Gesteigerte NLRP3-InfIammasom-abhängige [Interleukin-1-Beta-Produktion] in peripheren Blutmonozyten von Sarkoidosepatienten:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2014
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| Beschreibung: | VIII, 74 Bl. graph. Darst. 30 cm |
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| adam_text | AUS DEM DEPARTMENT INNERE MEDIZIN
KLINIK FUER PNEUMOLOGIE
(LEITER: UNIVERSITAETSPROFESSOR DR. J. MUELLER-QUERNHEIM)
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
GESTEIGERTE NLRP3-INFIAMMASOM-ABHAENGIGE INTERLEUKIN-LSS PRODUKTION
IN PERIPHEREN BLUTMONOZYTEN VON SARKOIDOSEPATIENTEN
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR
ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET
FREIBURG IM BREISGAU
VORGELEGT 2014
VON ROMAN JOHANNES SMONIG
GEBOREN IN GRAZ
HTTP://D-NB.INFO/1065827415
III
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS V
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VHI
TABELLENVERZEICHNIS VHI
ABKUERZUNGEN IX
1 EINLEITUNG 1
1.1 SARKOIDOSE: GRUNDLAGEN 1
1.1.1 DEFINITION, EPIDEMIOLOGIE, KLINIK 1
1.1.2 AETIOLOGIE 2
1.2 SARKOIDOSE:
IMMUNPATHOGENESE 3
1.2.1 ANGEBORENE UND ADAPTIVE IMMUNANTWORT 3
1.2.2 PATTERN-RECOGNITION REZEPTOREN 4
1.2.3 TOLL-LIKE REZEPTOREN (TLR) 5
1.2.3.1 TLR2 6
1.2.3.2 TLR4 7
1.2.3.3 TLR9 7
1.2.4 NOD-LIKE REZEPTOREN (NLR) 7
1.2.5 GRANULOMFORMATION 8
1.2.6 ALLGEMEINES ZU MONOZYTEN 10
1.2.7 PROPIONIBACTERIUM ACNES 11
1.2.8 SERUM AMYLOID A ....12
1.3 INTERLEUKIN-LSS UND INFLAMMASOM 12
1.3.1 DIE INTERLEUKIN-1 FAMILIE 12
1.3.2 IL-LSS: INTRAZELLULAERE PROZESSIERUNG 13
1.3.3 INFLAMMASOM 14
1.3.4 INFLAMMASOM-AKTIVIERUNG IN MONOZYTEN VERSUS MAKROPHAGEN 15
1.3.5 IL-LSS UND AUTOINFLAMMATORISCHE ERKRANKUNGEN 16
1.4 MICRORNA 17
1.4.1 ALLGEMEINES 17
1.4.2 MICRORNAS UND DIE IMMUNANTWORT 18
1.5 ZIELSETZUNG UND FRAGESTELLUNG 19
2 MATERIAL UND METHODEN 20
2.1 MATERIALIEN 20
2.1.1 GERAETE 20
2.1.2 SOFTWARE 21
2.1.3 VERBRAUCHSMATERIALIEN 21
IV
2.1.4 KITS UND MASTERMIX 22
2.1.5 KULTURMEDIEN UND CHEMIKALIEN 22
2.1.6 STIMULANZIEN 23
2.1.7 ANTIKOERPER 23
2.1.8 OLIGONUKLEOTIDE UND PRIMER 24
2.1.9 PUFFER UND
LOESUNGEN FUER IL-LSS ELISA 24
2.2 METHODEN 25
2.2.1 AUSWAHL DER PATIENTEN UND GESUNDEN KONTROLLPERSONEN 25
2.2.2 GEWINNUNG
VON PERIPHEREN BLUTZELLEN 25
2.2.3 ZELLISOLATION 25
2.2.3.1 ISOLATION MONONUKLEAERER ZELLEN AUS PERIPHEREM BLUT (PBMCS) 25
2.2.3.2 ISOLATION VON MONOZYTEN AUS PBMCS 26
2.2.4 ZELLZAEHLUNG MITTELS TUERK SCHER LOESUNG 28
2.2.5 STIMULATION DER ZELLEN IN KULTUR UND GEWINNUNG VON UEBERSTAENDEN 28
2.2.5.1 STIMULATION DER MONOZYTEN IN KULTUR 28
2.2.5.2 GEWINNUNG VON UEBERSTAENDEN FIIR ELISA UND ZELLEN ZUR
RNA-ISOLATION 28
2.2.6 RNA-ISOLATION 29
2.2.6.1 RNA-ISOLATION MIT DEM RNEASY MINIKIT 29
2.2.6.2 ISOLATION DER MICRORNA MIT DEM MIRVANA*KIT 29
2.2.6.3 MESSUNG DER RNA-KONZENTRATION MITTELS PHOTOMETRIE 29
2.2.7 ENZYM-LINKED-IMMUNOSORBANT-ASSAY (ELISA) 29
2.2.7.1 HINTERGRUND. 29
2.2.7.2 ZYTOKIN-ELISA-VERSUCHSANLEITUNG 30
2.2.7.3 CASPASE-1 UNDSAA-ELISA-VERSUCHSANLEITUNG 31
2.2.8 POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) 31
2.2.8.1 HINTERGRUND. 31
2.2.8.2 NLRP3-PCR-
VERSUCHSANLEITUNG 32
2.2.8.3 MIRNA223-PCR-
VERSUCHSANLEITUNG 34
2.2.9 STATISTIK 36
3 RESULTATE 37
3.1 INTERLEUKIN-LSS PRODUKTION IN PERIPHEREN BLUTMONOZYTEN VON
SARKOIDOSEPATIENTEN VERSUS NORMALPERSONEN 37
3.1.1 EINLEITUNG 37
3.1.2 STIMULATION FUER 24 STUNDEN 37
3.1.2.1 STUDIENPOPULATION 37
3.1.2.2 IL-LSS PRODUKTION NACH STIMULATION MIT LPS, P.A. LYSAT UND
PAM3CSK 38
3.1.3 STIMULATION FUER 4 STUNDEN 39
3.1.3.1 STUDIENPOPULATION 39
3.1.3.2 IL-LSS PRODUKTION NACH STIMULATION MIT LPS, P.A.-LYSAT, PAM3CSK
UND SAA 39
3.1.3.3 KORRELATION DER IL-LSS KONZENTRATION IN DEN UEBERSTAENDEN MIT DEN
SARKOIDOSE-AKTIVITAETSPARAMETERN ACE, SIL-2R UNDNEOPTERIN IM SERUM ....41
3.2.3.4 KORRELATION DER IL-LSS KONZENTRATION IN DEN
UEBERSTAENDEN MIT DER
LUNGENFUNKTION 42
V
3.2 SERUM AMYLOID A BEI SARKOIDOSEPATIENTEN VERSUS NORMALPERSONEN 42
3.2.1 STUDIENPOPULATION 42
3.2.2 ERHOEHTE SAA-KONZENTRATIONEN IN SERUMPROBEN VON SARKOIDOSEPATIENTEN
42
3.3 NLRP3-INFLAMMASOM EXPRESSION IN PERIPHEREN BLUTMONOZYTEN VON
SARKOIDOSEPATIENTEN VERSUS NORMALPERSONEN 43
3.3.1 STUDIENPOPULATION 43
3.3.2 ERGEBNISSE NLRP3-PCR 44
3.4 CASPASE-L-AKTIVITAET IN ZELLKULTURUEBERSTAENDEN PERIPHERER
BLUTMONOZYTEN VON
SARKOIDOSEPATIENTEN VERSUS NORMALPERSONEN 45
3.4.1
STUDIENPOPULATION 45
3.4.2 ERGEBNISSE CASPASE-1-ELISA 46
3.5 MIR-223-EXPRESSION IN PERIPHEREN BLUTMONOZYTEN VON
SARKOIDOSEPATIENTEN
VERSUS NORMALPERSONEN 47
3.5.1 STUDIENPOPULATION 47
3.5.2 ERGEBNISSE MIR-223-PCR 47
4 DISKUSSION 49
4.1 GESTEIGERTE IL-LSS PRODUKTION PERIPHERER BLUTMONOZYTEN VON
SARKOIDOSEPATIENTEN NACH STIMULATION MIT VERSCHIEDENEN TLR-LIGANDEN 50
4.2 MOEGLICHE GRUENDE FUER DIE UEBERSCHIESSENDE IL-LSS PRODUKTION 51
4.2.1 GESTEIGERTE NLRP3-INFLAMMASOM-AKTIVIERBARKEIT 52
4.2.2 GESTEIGERTE AKTIVITAET DER INFLAMMATORISCHEN CASPASE-1 55
4.2.3 GENETISCHE EINFLUESSE UND MICRORNA-DYSREGULATION 55
4.2.4 EXPANSION DER CD14+CD16+ MONOZYTEN 57
4.2.5 MOEGLICHE THERAPIEANSAETZE 58
4.3 SIERUM AMYLOID A UND SARKOIDOSE 59
4.4 AUSBLICK 61
5 ZUSAMMENFASSUNG 62
6 LITERATURVERZEICHNIS 63
7 DANKSAGUNGEN 74
|
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