Genetische und funktionelle Charakterisierung der LPS-Biosynthese von Neisseria gonorrhoeae:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Rottenburg, Habichtweg 9
<<T.>> Schwan
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.0
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2.0
EINLEITUNG
.
3
2.1
ASPEKTE
ZUR
LOKALISATION,
BIOCHEMIE
UND
GENETIK
VON
LIPOPOLYSACCHARID
ALS
VIRULENZFAKTOR
.
3
2.2
PHASENVARIATION,
IN
VIVO
MODIFIKATION
UND
GENETIK
DES
LPS
VON
NEISSERIEN
.
9
2.3
ZIEL
DER
ARBEIT
.
12
3.0
ERGEBNISSE
.
13
3.1
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
RFAF
HOMO
LOGS
VON
N.
GONORRHOEAE
.
13
3.1.1
SEQUENZHOMOLOGIE
ZWISCHEN
LSI-1
VON
N.
GONORRHOEAE
UND
RFAF
VON
E.
COLI
.
13
3.1.2
IDENTIFIZIERUNG
EINES
LSI-1
POSITIVEN
GENBANKKLONS
UND
KONSTRUK
TION
VON
INSERTIONSMUTANTEN
IN
N.
GONORRHOEAE
MS
11
.
17
3.1.3
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
LSI-1
MUTANTEN
.
20
3.1.4
VERGLEICHENDE
ZUCKERANALYSE
DES
LPS
DER
LSI-1
MUTANTE
VON
N.
GONORRHOEAE
MS
11
.
22
3.1.5
FUNKTIONELLE
KOMPLEMENTATION
EINER
SALMONELLA
RFAF
MUTANTE
DURCH
LSI-1
DER
GONOKOKKEN
.
24
3.1.6
TOTALSEQUENZIERUNG
VON
RFAF
(LSI-1)
VON
N.
GONORRHOEAE
.
30
3.2
BIOMEDIZINISCHE
EIGENSCHAFTEN
VON
GONOKOKKEN,
DIE
RDJ-CHEMOTYP
LPS
EXPRIMIEREN
.
35
3.2.1
KONSTRUKTION
VON
RFAF
MUTANTEN
IN
LABORSTAEMMEN
UND
KLINISCHEN
ISOLATEN
VON
N.
GONORRHOEAE
UND
N.
MENINGITIDIS
.
35
3.2.2
INFEKTIONSVERHALTEN
DER
RFAFMUTANTEN
IN
VITRO
-
1.
NACHWEIS
DURCH
LICHTMIKROSKOPIE
.
36
3.2.3
INFEKTIONSVERHALTEN
DER
RFAFMUTANTEN
IN
VITRO
-
2.
GENTAMYCIN
ASSAYS
.
39
3.2.4
EINFLUSS
DES
KEMBEREICHS
DES
LPS
AUF
DIE
EMPFINDLICHKEIT
VON
N.
GONORRHOEAE
GEGENUEBER
HUMANEM
KOMPLEMENT
.
39
INHALTSVERZEICHNIS
3.3
TRANSFORMATION
UND
IMMUNOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
EINES
STAMMSPEZIFISCHEN,
PHASENVARIABLEN
LPS-EPITOPS
VON
GONOKOKKEN
.
41
3.3.1
IDENTIFIZIERUNG
EINES
STAMMSPEZIFISCHEN,
PHASENVARIABLEN
LPS
EPITOPS
IN
N.
GONORRHOEAE
VP2
.
41
3.3.2
BEDEUTUNG
DES
LPS-PHAENOTYPS
DES
REZIPIENTEN
FUER
DIE
SELEKTION
VON
TRANSFORMANTEN
.
43
3.3.3
LPS-PROFIL
DER
7BLE-POSITIVEN
COTRANSFORMANTEN
.
47
3.3.4
PHASENVARIATION
DES
TRANSFORMIERTEN
EPITOPS
IN
DEN
COTRANSFORMANTEN
.
48
3.3.5
UNTERSUCHUNG
DER
PRAESENTATION
UND
KOMPATIBILITAET
VON
LPS
EPITOPEN
IN
DEN
COTRANSFORMANTEN
DURCH
WESTEM
BLOTS
.
51
3.3.6
IDENTIFIZIERUNG
TERMINALER
GALACTOSERESTE
IM
LPS
DER
COTRANSFOR
MANTEN
DURCH
NANA
SHIFT
UND
NANA
ASSAY
.
56
3.3.7
SEGREGATION
VP2-SPEZIFISCHER
PHAENOTYPEN
IN
DEN
COTRANSFORMAN
TEN
-1.
SERUMRESISTENZ
.
60
3.3.8
SEGREGATION
VP2-SPEZIFISCHER
PHAENOTYPEN
IN
DEN
COTRANSFORMAN
TEN
-
2.
AGGLUTINATIONSVERHALTEN
.
62
3.3.9
ZUSAMMENFASSUNG
DER
CHARAKTERISIERUNG
DES
7B1E-EPITOPS
VON
N.
GONORRHOEAE
VP2
.
64
4.0
DISKUSSION
.
66
4.1
DAS
RFAF
GEN
VON
N.
GONORRHOEAE
.
66
4.1.1
SEQUENZIERUNG
DES
RFAF
GENS
VON
N.
GONORRHOEAE
UND
IDENTIFIZIE
RUNG
VON
HOMOLOGEN
ALLELEN
DER
ENTEROBACTERIACEEN
.
66
4.1.2
MUTAGENISIERUNG
VON
LSI-1
IN
N.
GONORRHOEAE
UND
CHARAKTERISIE
RUNG
DER
MUTANTE
.
69
4.1.3
KOMPLEMENTATION
DER
RFAF
MUTANTE
VON
N.
GONORRHOEAE
MS
11
.
72
4.1.4
BIOMEDIZINISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
RFAF
MUTANTEN
VERSCHIEDENER
GONOKOKKENISOLATE
.
73
4.2
MOLEKULARE
CHARAKTERISIERUNG
DES
7B1E-EPITOPS
VON
N.
GONORRHOEAE
VP2
.
77
4.2.1
LOKALISIERUNG
DER
ABSORPTION
VON
MAB
7B
IE
AN
EIN
VP2-SPEZIFI
SCHES,
PHASENVARIABLES
LPS-EPITOP
.
77
4.2.2
TRANSFORMATION
DES
7B1E-EPITOPS
IN
MS
11
UND
ENTWICKLUNG
EINER
METHODIK
ZUR
ANREICHERUNG
NICHT
SELEKTIERBARER
PHAENOTYPEN
.
78
II
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.3
VERGLEICHENDE
CHARAKTERISIERUNG
7BLE-POSITIVERUND
-NEGATIVER
LPS-MOLEKUELE
DER
ISOLIERTEN
GONOKOKKENSTAEMME
.
80
5.0
MATERIAL
UND
METHODEN
.
86
5.1
ABKUERZUNGEN
.
86
5.2
MATERIAL
.
88
5.2.1
CHEMIKALIEN
UND
SUBSTRATE
.
88
5.2.2
LOESUNGEN
.
88
5.2.3
MEDIEN
.
91
5.2.4
ANTIBIOTIKA
UND
ANDERE
ZUSAETZE
.
92
5.2.5
OLIGONUKLEOTIDE
.
92
5.2.6
PLASMIDVEKTOREN
.
93
5.2.7
BAKTERIENSTAEMME
.
93
5.2.8
PROTEINE,
ENZYME,
ANTIKOERPER,
ZELLINIEN
.
94
5.2.9
GERAETE
UND
SONSTIGE
MATERIALIEN
.
95
5.3
METHODEN
.
96
5.3.1
ARBEITEN
MIT
DESOXYRIBONUKLEINSAEURE
.
96
5.3.1.1
EXTRAKTION
.
96
5.3.1.2
REINIGUNG
.
98
5.3.1.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
101
5.3.1.4
MODIFIZIERUNGSREAKTIONEN
.
102
5.3.1.5
SOUTHERN
HYBRIDISIERUNG
.
103
5.3.1.6
IDENTIFIZIERUNG
REKOMBINANTER
PLASMIDE
.
104
5.3.1.7
DARSTELLUNG
SYNTHETISCHER
OLIGONUKLEOTIDE
.106
5.3.1.8
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
106
5.3.1.9
DNA-SEQUENZIERUNG
.
107
5.3.2
ARBEITEN
MIT
PROTEINEN
.
107
5.3.2.1
PROBENAUFBEREITUNG
FUER
SDS
PAGE
.
107
5.3.2.2
SDS
PAGE
.
107
5.3.3
ARBEITEN
MIT
GLYCOKONJUGATEN
.
108
5.3.3.1
LPS-PRAEPARATION
FUER
PAGE
.
108
5.3.3.2
HAMSTOFF-PAGE
FUER
LPS
.
108
5.3.3.3
SILBERFAERBUNG
VON
LPS
.
108
5.3.3.4
SIALYLIERUNG
VON
LPS
.
108
5.3.3.5
NANAASSAY
.
109
5.3.4
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
109
5.3.4.1
AGGLUTINATIONSTEST
.
109
III
INHALTSVERZEICHNIS
5.3.4.2
BAKTERIZIDIE
.
109
5.3.4.3
KOLONIEIMMUNOBLOT
.
110
5.3.4.4
WESTEM
BLOT
VON
LPS
.
110
5.3.4.5
WESTEM
BLOT
VON
PROTEINEN
.
111
5.3.4.6
WHOLE
CELL
ELISA
.
111
5.3.5
ZELLKULTUR
.
111
5.3.5.1
INFEKTIONSEXPERIMENT
.
111
5.3.5.2
GENTAMYCIN
ASSAY
.112
5.3.6
ARBEITEN
MIT
PROKARYONTEN
.
112
5.3.6.1
ANZUCHT
.
112
5.3.6.2
EINFRIEREN
.112
5.3.6.3
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ESCHERICHIA
COLI
ZELLEN
.112
5.3.6.4
TRANSFORMATION
VON
ESCHERICHIA
COLI
.
113
5.3.6.5
TRANSFORMATION
VON
NEISSERIA
GONORRHOEAE
UND
NEISSERIA
MENINGITIDIS
.
113
5.3.6.6
HERSTELLUNG
VON
ELEKTROPORATIONSZELLEN
VON
ESCHERICHIA
COLI
UND
SALMONELLA
TYPHIMURIUM
.113
5.3.6.7
ELEKTROPORATION
VON
ESCHERICHIA
COLI
UND
SALMONELLA
TYPHIMURIUM
.
113
6.0
LITERATUR
.
114
7.0
ANHANG
.
118
7.1
SEQUENZHEADER
DES
ECORFA2
LOCUS
DER
GENBANK
.
118
7.2
HOMOLOGIESUCHEN
ZWISCHEN
NGOLSIRA
UND
ECORFA2
.
118
IV |
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