Isolation und Charakterisierung von HBV-Mutanten aus dem Serum eines Patienten mit immunologisch negativer Hepatitis B-Virus Infektion:
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1995
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1
INHALTSVERZEICHNIS
A. EINLEITUNG SEITE
1. STRUKTUR UND VERMEHRUNG DES HEPATITIS B-VIRUS 3
1.1. DIE VIRUSSTRUKTUR 3
1.2. DAS GENOM 4
1.3. DIE PROTEINE DES HEPATITIS B-VIRUS 5
1.3.1. DERPRAEC/C-ORF 5
1.3.2. DERP-ORF 5
1.3.3. DERPRAES/S-ORF 5
1.3.4. DERX-ORF 6
1.4. DIE INFEKTION UND REPLIKATION 6
1.5. DIE GENETISCHE ORGANISATION UND REGULATION 7
2. DAS KRANKHEITSBILD DER HBV-INFEKTION 7
3. PROPHYLAXE UND THERAPIE DER HB V-INFEKTION 8
4. IMMUNOLOGISCH-NEGATIVE HBV-INFEKTIONEN 9
5. NATUERLICHE MUTATIONEN UND IHRE BEDEUTUNG 10
6. HINTERGRUND UND ZIELE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 10
B. METHODEN UND MATERIAL 12
1. SERUMAUFARBEITUNG 12
2. DIE POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 12
2.1. DURCHFUEHRUNG DER PCR 13
2.2. DIE YYNESTED" PCR 14
2.3. KONTAMINATIONSSCHUTZ 15
3. KLONIERUNG 15
3.1. SPALTUNG MIT RESTRIKTIONSENZYMEN 16
3.2. LIGATION DER VEKTOR- MIT DER INSERT-DNA 16
3.3. TRANSFORMATION AUF
E. COLI JM109
16
3.4. IDENTIFIZIERUNG DER HB V-DNA-HALTIGEN REKOMBINANTEN KLONE 17
4. PLASMID-ISOLIERUNG 18
5. AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE 18
6. ISOLIERUNG VON DNA AUS EINEM AGAROSE-GEL 19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
7. SEQUENZIERUNG VON DOPPELSTRAENGIGER PLASMID-DNA 19
7.1. SEQUENZREAKTION 19
7.2. VORBEREITUNG DER SEQUENZIERUNGSKAMMER 21
7.3. VORBEREITUNG DER SEQUENZIERUNGSGELE
21
7.4. DER SEQUENZIERUNGSLAUF
21
7.5. LAUFBEDINGUNGEN 22
8
. RESTRIKTIONSANALYSEN 22
9. SOUTHEM-BLOT 22
10. MATERIAL 23
10.1 PUFFER UND LOESUNGEN 23
10.2. ENZYME UND OLIGONUKLEOTIDE 24
10.3. BAKTERIENKULTURMEDIEN 24
10.4. VERBRAUCHSMATERIALIEN 25
10.5. TECHNISCHE GERAETE 25
C. ERGEBNISSE
26
1. DIE GESAMTPOPULATION ALLER KLONE DES PATIENTEN 26
2. DIE GESAMTPOPULATION DES PATIENTEN IM VERGLEICH ZU 44
BEKANNTEN GENOMEN
3. FEHLERHAEUFIGKEIT BEI DER POLYMERASEKETTENREAKTION 50
D. DISKUSSION 5X
1. BEWERTUNG UND GEWICHTUNG DER MUTATIONEN 51
2. DAS KONTAMINATIONSPROBLEM 52
3. DIE QUASISPECIES UNSERES PATIENTEN 52
4. BIOLOGISCHE AUSWIRKUNGEN DER MUTATIONEN
53
4.1. DERPRAEC/C-ORF
53
4.2. DERP-ORF
55
4.3. DERPRAES/S-ORF
55
4.4. DERX-ORF 56
4.5. DIE REGULATORISCHEN ELEMENTE 56
E. ZUSAMMENFASSUNG 57
F. LITERATUR 5 G
G. ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS
67
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF |
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