Effekte einer Therapie mit dem nichtselektiven Endothelinrezeptorantagonisten Bosentan auf rechts- und linksventrikuläres Remodelling und Genexpression bei der bleomycininduzierten Lungenfibrose mit pulmonaler Hypertonie der Ratte:
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2012
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I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 73
1. EINLEITUNG 7
1.1. PULMONALE HYPERTONIE 7
1.2. IDIOPATHISCHE LUNGENFIBROSE 7
1.3. DAS ENDOTHELINSYSTEM 9
ENDOTHELIN UND PULMONALE HYPERTONIE 9
ENDOTHELIN UND IPF 10
ENDOTHELIN UND HERZ 10
1.4 KARDIALES REMODELLING 11
1.5. DIE NATRIURETISCHEN PEPTIDE ANP UND BNP 12
NATRIURETISCHE PEPTIDE UND DER RECHTE VENTRIKEL 13
1.6. DAS MODELL DER BLEOMYCININDUZIERTEN LUNGENFIBROSE IN DER RATTE 14
1.7. ZIEL DER ARBEIT 15
2. METHODEN UND MATERIALIEN 17
2.1. DIE TIEREXPERIMENTELLE VERSUCHSPHASE 17
2.1.1 LAUFBANDBELASTUNGSTEST 17
HALTUNG UND GRUPPENEINTEILUNG 17
LAUFBANDBELASTUNGSTEST UND -AUFBAU 17
TRAINING 17
ERMITTLUNG DER AUSGANGSKONDITION UND ABBRUCHKRITERIEN 18
BELASTUNGSTEST 19
2.1.2 VERABREICHUNG VON BLEOMYCIN UND BOSENTAN AN DIE VERSUCHSTIERE 19
INDUKTION VON PULMONALER FIBROSE UND PULMONALER HYPERTONIE MIT
BLEOMYCIN IN GRUPPE 2 UND 3 19
VERABREICHUNG VON BOSENTAN AN GRUPPE 3 20
2.1.3. HAEMODYNAMISCHE MESSUNGEN 20
BLUTDRUCKMESSUNG MIT DER TAIL-CUFF-METHODE 20
RECHTSVENTRIKULAERE SYSTOLISCHE DRUCKMESSUNG 20
2.1.4. ORGANENTNAHME 21
4
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IMAGE 2
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
BLUTENTNAHME UND PLASMAGEWINNUNG 21
ORGANENTNAHME UND -KONSERVIERUNG 21
2.2. QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON ET-1 IM PLASMA 22
PRINZIP ELISA 22
DURCHFIIHRUNG ET-1-ELISA 22
AUSWERTUNG 23
2.3. IMMUNHISTOLOGIE 23
ANFERTIGEN DER GEFRIERSCHNITTE 23
PRINZIP DER DAB-IMMUNHISTOLOGIE 24
DURCHFIIHRUNG 24
2.4. MORPHOMETRISCHE ANALYSE DER KARDIOMYOZYTEN 25
MORPHOMETRISCHE BESTIMMUNG DER LAMININDICKE 26
MORPHOMETRISCHE BESTIMMUNG DES MYOZYTENVOLUMENS 26
2.5. RNA-ISOLATION 27
RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 2 8
RNA-INTEGRITAETSBESTIMMUNG 29
2.6. REAL-TIME QUANTITIVE PCR ZUR RELATIVEN QUANTIFIZIERUNG SOWOHL
DER ANP- UND BNP-GENEXPRESSION ALS AUCH DER ETA UND
ETBREZEPTORGENEXPRESSION 30
DIE REVERSE-TRANSKRIPTASE-REAKTION 30
PRINZIP DER REAL-TIME QUANTITATIVE PCR 31
DURCHFUEHRUNG 33
BERECHNUNG NACH DER AA-CT-METHODE 33
2.7. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 34
PRINZIP DER AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 3 5
DURCHFUEHRUNG 35
2.8. STATISTISCHE AUSWERTUNG 36
3. ERGEBNISSE 37
3.1. HAEMODYNAMISCHE MESSUNGEN 37
3.2. RECHTSVENTRIKULAERE HYPERTROPHIE 37
3.3. LAMININ IM HERZMUSKELPRAEPARAT 38
3.4. MORPHOMETRIE DER KARDIOMYOZYTEN 39
5
IMAGE 3
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
3.5. ANP-MRNA-EXPRESSION 42
3.6. BNP-MRNA-EXPRESSION 43
3.7. ETA-REZEPTORGENEXPRESSION 44
3.8. ETB-REZEPTORGENEXPRESSION 45
3.9. ET-1 IM PLASMA AM TAG 29 46
4. DISKUSSION 47
4.1. RECHTSHERZHYPERTROPHIE UND KARDIALES REMODELLING 47
4.2. VENTRIKULAERE GENEXPRESSIONSANALYSE 51
ETA- UND ETB-REZEPTORGENEXPRESSION 51
DIE NATRIURETISCHEN PEPTIDE ANP UND BNP 53
ENDOTHEL IN-1 IM PLASMA 56
5. ZUSAMMENFASSUNG 58
6. LITERATURNACHWEIS 60
7. ABKUERZUNGEN 73
8. DANKSAGUNG 75
6
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