Molekulargenetische und physiologische Untersuchungen an photosynthesedefizienten Plastommutanten von Antirrhinum majus L.:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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| adam_text | 0 MOLEKULARGENETISCHE UND PHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN AN
PHOTOSYNTHESEDEFIZIENTEN PLASTOMMUTANTEN VON ANTIRRHINUM MAJUS L.
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES DOCTOR RERUM
NATURALIUM (DR. RER. NAT.) VORGELEGT DER
MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICH-TECHNISCHEN FAKULTAET
(MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHER BEREICH) DER
MARTIN-LUTHER-UNIVERSITAET HALLE-WITTENBERG VON FRAU DIPL.-BIOL. CLAUDIA
SCHAFFNER GEB. AM 31. 07.1966 IN QUERFURT GUTACHTER: 1. 2. 3. HALLE
(SAALE), INHALTSVERZEICHNIS SEITE 1. EINLEITUNG 6 2. MATERIAL UND
METHODEN 15 2.1. MATERIAL 15 2.1.1. CHARAKTERISIERUNG DER UNTERSUCHTEN
SORTEN VON ANTIRRHINUM MAJUS L. 15 2.1.1.1. ANTIRRHINUM MAJUS L. SIPPE
50 15 2.1.1.2. ANTIRRHINUM MAJUS L. EN:ALBA-L 15 2.1.1.3. ANTIRRHINUM
MAJUS L. EN.ALBA-2 16 2.1.1.4. ANTIRRHINUM MAJUS L. EN:ALBA-4 1 7 2.1.2.
PFLANZENANZUCHT 18 2.1.3. ANTIKOERPER 18 2.1.4. GENSONDEN 19 2.1.5.
DNA-OIIGONUKLEOTIDE 20 2.1.6. STANDARDLOESUNGEN 20 2.2. METHODEN 22
2.2.1. INDUKTION VON MUTATIONEN MIT AF-NITROSO-IV-METHYL-HARNSTOFF 22
2.2.2. URAS-MESSUNGEN 22 2.2.3. CHLOROPHYLLFLUORESZENZ BEI
RAUMTEMPERATUR 23 2.2.4. CHLOROPHYLLFLUORESZENZ BEI 77 K 23 2.2.5.
ABSORPTIONSAENDERUNG DES CHL P700 24 2.2.6. BESTIMMUNG DER HALBWERTSZEIT
(T^) DES ELEKTRISCHEN POTENTIALGRADIENTEN UEBER DER THYLAKOIDMEMBRAN 24
2.2.7. PHOTOPHOSPHORYLIERUNG UND ELEKTRONENFLUSS 24 2.2.8. PRAEPARATION
VON INTAKTEN CHLOROPLASTEN 25 2.2.9. PRAEPARATION VON LOESLICHEN UND
MEMBRANPROTEINEN 26 2.2.10. PRAEPARATION VON THYLAKOIDMEMBRANEN UND
MEMBRANKOMPLEXEN 27 2.2.10.1. PRAEPARATION VON THYLAKOIDMEMBRANEN 27
2.2.10.2. PRAEPARATION VON PS II-KOMPLEXEN 28 2.2.10.3. ABTRENNUNG DES
WASSERSPALTENDEN SYSTEMS AUS PS II-PROBEN DURCH INKUBATION MIT CACL 2 28
2.2.10.4. PRAEPARATION VON PS I-KOMPLEXEN 29 2.2.11. BESTIMMUNG DES
CHLOROPHYLLGEHALTES 30 2.2.12. BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTES 30 2.2.13.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESEVONTHYLAKOIDMEMBRANPROTEINEN 30
2.2.14. IMMUNBLOTTANALYSEN 31 3.2.5. DAS MEMBRANPOTENTIAL UEBER DER
THYLAKOIDMEMBRAN 55 3.2.6. PHOTOPHOSPHORYLIERUNG UND ELEKTRONENTRANSPORT
57 3.2.7. ZUSAMMENFASSUNG DER PHYSIOLOGISCHEN UNTERSUCHUNGEN 58 3.3.
AUSWIRKUNGEN DER MUTATIONEN AUF DIE POLYPEPTIDZUSAMMENSETZUNG DER
THYLAKOIDMEMBRANEN 58 3.4. MOLEKULARGENETISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR
LOKALISATION DER MUTATIONEN AUFDERPTDNA 63 3.4.1. RFLP-ANALYSENDERPTDNA
63 3.4.2. SSCP-ANALYSEN VON PLASTOMCODIERTEN PHOTOSYNTHESEGENEN 68
3.4.2.1. POLYMORPHISMUS DER MUTANTE EN:ALBA-L 70 3.4.2.2. POLYMORPHISMUS
DER MUTANTE EN:ALBA-4 71 3.4.3. SEQUENZANALYSEN 73 3.4.3.1.
SEQUENZIERUNG DES PSAB-GEAS VON EN:ALBA-L 73 3.4.3.2. SEQUENZIERUNG DES
PSBD-GEAS VON EN.ALBA-4 76 4. DISKUSSION * 79 4.1. .PHOTOSYNTHESE-UND
ATMUNGSAKTIVITAET DER MUTANTEN 79 4.2. CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTE
EN:ALBA-4 79 4.3. CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTE EN:ALBA-L 82 4.4. DIE
VERSUCHE ZUR CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTE EN:ALBA-2 84 4.5. VERWENDUNG
VON SSCP-ANALYSEN ZUR LOKALISATION VON MUTATIONEN AUF DER PTDNA 86 4.6.
SCHLUSSBEMERKUNG 88 5. REGISTRIERUNG DER SEQUENZDATEN IN EINER
NUKLEOTIDSEQUENZDATENBANK 89 6. LITERATUR 89 7. VERZEICHNIS DER
VERWENDETEN ABKUERZUNGEN 106 8. ANHANG 2.2.14.1. TRANSFER VON
POLYPEPTIDEN AUF NITROCELLULOSEMEMBRANEN 31 2.2.14.2. IMMUNREAKTION 32
2.2.15. ISOLATION UND REINIGUNG VON DNA 33 2.2.15.1. ISOLATION VON
PFLANZLICHER GESAMT-DNA 33 2.2.15.2. ISOLATION VON PLASTIDEN-DNA 33
2.2.15.3. REINIGUNG VON DNA DURCH ULTRAZENTRIFUGATION IM
CSCI-DICHTEGRADIENTEN 34 2.2.16. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON DNA
IN AGAROSEGELEN 35 2.2.17. ELUTION VON DNA NACH GELELEKTROPHORETISCHER
AUFTRENNUNG 35 2.2.17.1. ELUTION VON DNA MIT QIAEX 36 2.2.17.2. ELUTION
VON DNA MIT DEAE-ZELLULOSE 36 2.2.18. SPALTUNG VON DNA MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN 36 2.2.19. RFLP-ANALYSEN 37 2.2.19.1.
ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG UND TRANSFER DER DNA AUF MEMBRANEN 37
2.2.19.2. RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER DNA-SONDEN MITTELS RANDOM PRIMING
37 2.2.19.3. HYBRIDISIERUNG MIT RADIOAKTIV MARKIERTER SONDEN-DNA 38
2.2.20. AMPLIFIKATION VON DNA MITTELS POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 38
2.2.21. SSCP-ANALYSEN 39 2.2.21.1. HERSTELLUNG DER DNA-PROBEN 39
2.2.21.2. POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE ZUR SSCP-ANALYSE 40 2.2.22.
SEQUENZIERUNG VON DNA 40 2.2.22.1. RADIOAKTIVE SEQUENZIERUNG VON
DOPPELSTRAENGIGEN PCR-PRODUKTEN MIT T7-POLYMERASE 40 2.2.22.2.
RADIOAKTIVE SEQUENZIERUNG VON DOPPELSTRAENGIGEN PCR-PRODUKTEN MITTELS
CYCLE SEQUENCING 41 2.2.22.3. POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE ZUR
DNA-SEQUENZANALYSE 42 2.2.22.4. RECHNERGESTUETZTE AUSWERTUNG DER
SEQUENZDATEN 43 2.2.23. FOTOGRAFISCHE ARBEITEN UND AUTORADIOGRAPHIE 43
3. ERGEBNISSE 44 3.1. INDUKTION VON PLASTOMMUTANTEN MIT
N-NITROSO-N-METHYL-HARNSTOFF(NMH) 44 3.2. PHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
DER PHOTOSYNTHESE 46 3.2.1. CQRGASWECHSEL VON A. MAJUS 46 3.2.2.
CHLOROPHYLLFLUORESZENZ BEI RAUMTEMPERATUR 48 3.2.2.1. POTENTIELLE UND
TATSAECHLICHE EFFIZIENZ DES PS II 48 3.2.2.2. REDOXZUSTAND DES PS
II-AKZEPTORS Q A UND ENERGETISIERUNG DER THYLAKOID- MEMBRAN 50 3.2.3.
CHLOROPHYLLFLUORESZENZ BEI 77 K 51 3.2.4. ABSORPTIONSAENDERUNGEN VON P700
IM PHOTOSYSTEM I 53
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