Bedeutung der Protein-Tyrosin-Kinase pp60Src für die Genese der akuten myeloischen Leukämie:
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Allgemeiner Teil 5
1.1. Ziel der Studie 5
1.2. Arbeitsplan 6
1.3. Akute Myeloische Leukämie (AML) 7
1.3.1. Definition und Inzidenz 7
1.3.2. Ätiologie 7
1.3.3. Diagnostik 7
1.3.4. Klassifikation, Zytologie und Molekulargenetik 8
1.3.5. Prognose 10
1.4. c-SRC Proto-Onkogen und Protein-Tyrosin-Kinase Src (pp60c-Src) 10
l .4.1. c-SRC-Gen (SRC) 11
1.4.2. Phospho-Protein-Tyrosinkinse Src - pp60c-Src 12
1.4.3 Bedeutung von SRC, bzw. ppöOSrc bei Tumoren und AML 14
2. Material und Methoden 17
2.1. Chemikalien und Lösungsmittel 17
2.2. Untersuchungsmaterial und Probenkollektiv 19
2.3. Methoden 22
2.3.1. RNA-Isolierung 22
2.3.2. Herstellung von cDNA durch Reverse Transkription 23
2.3.3. Polymerasekettenreaktion 23
2.3.4. Horizontale Agarosegelelektrophorese 26
2.3.5. DNA-Einzelstrang-Konformitätsanalyse im Polyarcylamidgel 26
2.3.6. Sequenzierung mit floureszenzmarkierten Didesoxyribonukleinsäuren 27
2.3.7. Klonierungsexperimente 28
2.3.8. Western-Blot-Analysen 29
3. Ergebnisse 32
3.1. Probenkollektiv 32
3.2. Ergebnisse der Analyseverfahren 33
3.2.1. Polymerasekettenreaktion 33
3.2.2. DNA-Einzelstrang-Konformitätsanalyse im Polyarcylamidgel 34
3.2.3. Zyklische Sequenzierung 36
3.2.4. Klonierung 38
3.2.5. Western-Blot-Analyse 39
4. Diskussion 40
4.1. Material 40
4.2. Probenkollektiv 40
4.3. Diskussion der Methoden 41
4.4. Diskussion des Gesamtergebnis 44
5. Zusammenfassung 50
6. Anhang 51
Inhaltsverzeichnis
6.1. Abkürzungs- und Symbolverzeichnis 51
6.2. Literaturverzeichnis 52
6.3. Danksagung 61
6.4. Eidesstattliche Versicherung 61
6.5. Anlagen 62
6.5.1. Lebenslauf 62
6.5.2. Publikationen 63
Tabellenverzeichnis
Tab. 1 Charakterisierung der AML-Subtypen 8
Tab. 2 Translokationen und genetische Rearrangements bei AML-Subtypen 9
Tab. 3 Patienten- und Probencharakteristik 20
Tab. 4 Größe und Nukleotidsequenz des SRC-Gens 24
Tab. 5 Primer Paare, Fragmente, Exons 25
Abbilungsverzeichnis
Abb. 1 Struktur des S7?C-Gens und der pp60Src-Kinase (Src) 12
Abb. 2 Konformitätsänderung der Src-Kinase ppöOSrc durch Phosphorylierung 14
Abb. 3 Src und Signalwege bei der Hämatopoese 15
Abb. 4 SRC-Gen und Primer 25
Abb. 5 PCR-Produkte des SRC-Gens von 6 Patientenproben 34
Abb. 6 Polyacrylamidgel mit 8 SRC-Plasmidproben 35
Abb. 7 Polyacrylamidgel mit 13 Patientenproben 35
Abb. 8 5 - 3-SequenzExon8derProbe70 37
Abb. 9 3 - 5 -Sequenz Exon 8 der Probe 70 37
Abb. 10 PCR-Produkte der Klone 1 bis 5 38
Abb. 11 Röntgenfilm mit Immunkomplexen von Ph-Src und Anti-Src 39
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Inhaltsverzeichnis
1. Allgemeiner Teil 5
1.1. Ziel der Studie 5
1.2. Arbeitsplan 6
1.3. Akute Myeloische Leukämie (AML) 7
1.3.1. Definition und Inzidenz 7
1.3.2. Ätiologie 7
1.3.3. Diagnostik 7
1.3.4. Klassifikation, Zytologie und Molekulargenetik 8
1.3.5. Prognose 10
1.4. c-SRC Proto-Onkogen und Protein-Tyrosin-Kinase Src (pp60c-Src) 10
l .4.1. c-SRC-Gen (SRC) 11
1.4.2. Phospho-Protein-Tyrosinkinse Src - pp60c-Src 12
1.4.3 Bedeutung von SRC, bzw. ppöOSrc bei Tumoren und AML 14
2. Material und Methoden 17
2.1. Chemikalien und Lösungsmittel 17
2.2. Untersuchungsmaterial und Probenkollektiv 19
2.3. Methoden 22
2.3.1. RNA-Isolierung 22
2.3.2. Herstellung von cDNA durch Reverse Transkription 23
2.3.3. Polymerasekettenreaktion 23
2.3.4. Horizontale Agarosegelelektrophorese 26
2.3.5. DNA-Einzelstrang-Konformitätsanalyse im Polyarcylamidgel 26
2.3.6. Sequenzierung mit floureszenzmarkierten Didesoxyribonukleinsäuren 27
2.3.7. Klonierungsexperimente 28
2.3.8. Western-Blot-Analysen 29
3. Ergebnisse 32
3.1. Probenkollektiv 32
3.2. Ergebnisse der Analyseverfahren 33
3.2.1. Polymerasekettenreaktion 33
3.2.2. DNA-Einzelstrang-Konformitätsanalyse im Polyarcylamidgel 34
3.2.3. Zyklische Sequenzierung 36
3.2.4. Klonierung 38
3.2.5. Western-Blot-Analyse 39
4. Diskussion 40
4.1. Material 40
4.2. Probenkollektiv 40
4.3. Diskussion der Methoden 41
4.4. Diskussion des Gesamtergebnis 44
5. Zusammenfassung 50
6. Anhang 51
Inhaltsverzeichnis
6.1. Abkürzungs- und Symbolverzeichnis 51
6.2. Literaturverzeichnis 52
6.3. Danksagung 61
6.4. Eidesstattliche Versicherung 61
6.5. Anlagen 62
6.5.1. Lebenslauf 62
6.5.2. Publikationen 63
Tabellenverzeichnis
Tab. 1 Charakterisierung der AML-Subtypen 8
Tab. 2 Translokationen und genetische Rearrangements bei AML-Subtypen 9
Tab. 3 Patienten- und Probencharakteristik 20
Tab. 4 Größe und Nukleotidsequenz des SRC-Gens 24
Tab. 5 Primer Paare, Fragmente, Exons 25
Abbilungsverzeichnis
Abb. 1 Struktur des S7?C-Gens und der pp60Src-Kinase (Src) 12
Abb. 2 Konformitätsänderung der Src-Kinase ppöOSrc durch Phosphorylierung 14
Abb. 3 Src und Signalwege bei der Hämatopoese 15
Abb. 4 SRC-Gen und Primer 25
Abb. 5 PCR-Produkte des SRC-Gens von 6 Patientenproben 34
Abb. 6 Polyacrylamidgel mit 8 SRC-Plasmidproben 35
Abb. 7 Polyacrylamidgel mit 13 Patientenproben 35
Abb. 8 5'- 3-SequenzExon8derProbe70 37
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