Untersuchung zur Herstellung von humanen monoklonalen Antikörpern nach primärer in-vitro-Immunisierung humaner B-Lymphozyten:
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| Format: | Buch |
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1993
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I
EINLEITUNG
1
1.
GRUNDLAGEN
DER
HERSTELLUNG
VON
HUMANEN
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
(MAK)
1
2.
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
3
3.
STRATEGIEN
DER
IMMORTALISIERUNG
5
4.
KONZEPT
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
7
H
MATERIAL
UND
METHODE
11
1.
MATERIALIEN
11
1.1.
CHEMIKALIEN,
REAGENZIEN,
MEDIENZUSAETZE
11
1.2.
MEDIEN,
PUFFER,
GEBRAUCHSLOESUNGEN
13
1.3.
HILFSMITTEL,
AUSRUESTUNG,
GERAETE
19
2.
METHODEN
22
2.1.
ANTIGENHERSTELLUNG
22
2.2.
ISOLIERUNG
DER
MONONUKLEAEREN
BLUTLEUKOZYTEN
AUS
BUFFY
COAT
24
2.2.1.
ISOLIERUNG
DER
MONONUKLEAEREN
BLUTLEUKOZYTEN
AUS
DER
MILZ
25
2.3.
SELEKTION
ADHAERENTER
MONOZYTEN
AUS
MONONUKLEAEREN
BLUTLEUKOZYTEN
26
2.4.
BEHANDLUNG
DER
MONONUKLEAEREN
BLUTLEUKOZYTEN
MIT
L-LEUCIN-METHYLESTER
(LEU-O-ME)
28
2.4.1.
BEHANDLUNG
DER
MONONUKLEAEREN
BLUTLEUKOZYTEN
MIT
L-LEUCYL-L-LEUCINMETHYLESTER
(LEU-LEU)
28
2.5.
KONZEPT
DER
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
29
2.6.
ZELLFUSION
ZUR
PRODUKTION
VON
HUMANEN
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
30
2.7.
KLONIERUNG
DER
HYBRIDOME
34
2.8.
KULTIVIERUNG
DER
MYELOMZELLEN
35
2.9
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
36
2.10.
ZELLZAHLBESTIMMUNG
UND
VITALITAETSTEST
37
2.11.
ELISA
ZUM
NACHWEIS
VON
ANTIKOERPERN
37
2.12.
QUANTITATIVER
NACHWEIS
DER
ANTIKOERPER-PRODUKTION
40
2.13.
NACHWEIS
VON
ZYTOPLASMATISCHEM
IMMUNGLOBULIN
41
2.14.
MYKOPLASMEN-NACHWEIS
MIT
BISBENZIMID
41
2.15.
ENZYMATISCHE
BEHANDLUNG
DER
ZELLEN
42
2.16.
KONZENTRIERUNG
VON
HYBRIDOM-UEBERSTAENDE
43
2.17.
DIALYSE
44
2.18.
PROTEINBESTIMMUNG
45
2.19.
MAGNETISCHE
ZELLSEPERATION
MIT
MACS
45
2.20.
ANALYSE
DER
ZELLFUSION
48
2.21.
SDS-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
49
2.21.1.
HERSTELLUNG
DES
TRENN-UND
SAMMELGELS
49
2.21.2.
ELEKTROPHORESE-BEDINGUNGEN
50
2.21.3.
IMMUNOBLOT
50
2.21.4.
COOMASSIE-FAERBUNG
51
UI.
ERGEBNISSE
52
3.1.
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
VON
PERIPHEREN
BLUTLEUKOZYTEN
MIT
BORRELIA
BURGDORFERI-ANTIGEN
52
3.1.1.
IGM-ANTWORT
53
3.1.2.
IGG-ANTWORT
54
3.2.
ABHAENGIGKEIT
DER
IGM-ANTWORT
BEI
DER
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
MIT
BORRELIA
BURGDORFERI-AG
VON
VARIABLEN
54
3.2.1.
SPENDER
54
3.2.2.
ANTIGENDOSIS
55
3.2.3.
KULTURBEDINGUNGEN
57
3.2.4.
ZELL-TRENNUNGSVERFAHREN
61
3.3.
EINFLUSS
VON
M-AC
AUF
DIE
IN-VITRO
IMMUNISIERUNG
VON
PERIPHEREN
BLUTLEUKOZYTEN
MIT
BORRELIA
BURGDORFERI-AG
63
3.4.
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
VON
MILZ-LYMPHOZYTEN
MIT
BORRELIA
BURGDORFERI-AG
64
3.5.
REPRODUZIERBARKEIT
DER
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
MIT
ANDEREN
ANTIGENEN
AUSSER
BORRELIA
BURGDORFERI
66
3.5.1.
HELICOBACTER
PYLORI
66
3.5.2.
TRIOSEPHOSPHATISOMERASE-AG
(TIM-AG)
67
3.6.
BORRELIA
BURGDORFERI
ANTIGENE
ALS
POLYKLONALER
AKTIVATOR
68
3.7.
PEG-INDUZIERTE
ZELLFUSION
ZUR
HERSTELLUNG
VON
HUMANEN
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
69
3.8.
ETABLIERUNG
DER
ELEKTRISCH
INDUZIERTEN
ZELLFUSION
ZUR
HERSTELLUNG
VON
HUMANEN
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
70
3.8.1.
FUSIONSKAMMEM
70
3.8.2.
FUSIONSPARAMETER
71
3.8.3.
FUSIONSFRIST
75
3.8.4.
FUSIONSMEDIUM
76
3.8.5.
FUSION
MIT
ANGEREICHERTEN
B-ZELLEN
78
3.9.
POSTFUSIONALE
SELEKTION
DER
ELEKTROFUSIONATE
MITTELS
MACS
STATT
AMINOPTERIN
79
3.10.
CHARAKTERISIERUNG
DER
HERGESTELLTEN
HYBRIDOME
UND
DER
HUMANEN
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
80
3.11.
HUMANE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
EIN
39-KILODALTON
BORRELIA
BURGDORFERI-HG
(P39)
86
IV.4.
DISKUSSION
89
4.1.
IN-VITRO-IMMUNISIERUNG
89
4.2.
IMMORTALISIERUNG
97
4.3.
HUMANE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
BORRELIA
BURGDORFERI-AG
102
V
ZUSAMMENFASSUNG
105
VI
LITERATURVERZEICHNIS
107 |
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