Immuntherapie von Tumoren mit Hilfe einer neuen Klasse intakter bispezifischer Antikörper:
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| adam_text | O IMMUNTHERAPIE VON TUMOREN MIT HILFE EINER NEUEN KLASSE INTAKTER
BISPEZIFISCHER ANTIKOERPER DISSERTATION DER FAKULTAET FUER BIOLOGIE DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN ERSTELLT AM INSTITUT FUER
KLINISCHE MOLEKULARBIOLOGIE UND TUMORGENETIK DES FORSCHUNGSZENTRUMS FUER
UMWELT UND GESUNDHEIT (GSF), MUENCHEN UNTER DER LEITUNG VON PROF. DR.
MED. GEORG W. BORNKAMM VORGELEGT VON PETER RUF MUENCHEN, 27. 04. 2000
INHALTSVERZEICHNIS _ I ABKORZUNGSVERZEICHNIS V A. EINLEITUNG 1 1.
IMMUNTHERAPIE VON TUMORERKRANKUNGEN MIT MONOKLONALEN ANTIKOERPERN 1 2.
IMMUNTHERAPEUTISCHE ANSAETZE MIT BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN 3 3.
INDUKTION EINER IMMUNITAET GEGEN TUMOREN ?. 6 4. HERSTELLUNG VON
BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN 8 5. ZIEL DER ARBEIT 10 B. MATERIAL 12 1.
ZELLLINIEN 12 1.1. MAUS-LYMPHOME 12 1.2. MAUS-MELANOME 12 1.3.
MAUS-HYBRIDOME 12 1.4. RATTEN-HYBRIDOME 12 1.5. RATTE/MAUS-QUADROM 12
1.6. HUMANE ZELLLINIE 13 2. CHEMIKALIEN 13 3. ENZYME/ZYTOKINE/STANDARDS
14 4. MOLEKULARBIOLOGISCHE REAGENZIEN 14 5. OLIGONUKLEOTIDE 14 * 6.
ANTIKOERPER 15 7. ZELLKULTUR 16 7.1. VERBRAUCHSMATERIAL 16 7.2.
REAGENZIEN 16 7.3. MEDIEN 17 8. GERAETE .*., 18 9. CHROMATOGRAPHIE-MEDIEN
19 10. SONSTIGE MATERIALIEN UND REAGENZIEN 19 11. MAUS-INZUCHTSTAEMME 19
C. METHODEN 20 1. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 20 1.1. ISOLIERUNG VON
RNS 20 1.2. GEWINNUNG VON CDNS ,. 20 INHALTSVERZEICHNIS II 1.3. RT-PCR
20 1.4. HERSTELLUNG UND REINIGUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN 21 1.5 BESTIMMUNG
DER KONZENTRATION VON NUKLEINSAEUREN 21 2. PROTEINCHEMISCHE METHODEN 22
2.1. REINIGUNG VON MONOKLONALEN ANTIKOERPERN 22 2.1.1.
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 22 2.1.2 IONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE 22
2.2. BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 23 2.3. HERSTELLUNG VON
BISPEZIFISCHEN F(AB )2-FRAGMENTEN 23 2.4.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 23 3. METHODEN DER
ZELLKULTUR 24 3.1. ALLGEMEINE ZELLKULTURBEDINGUNGEN 24 3.2. AUFTAUEN UND
EINFRIEREN VON ZELLEN 25 3.3. ZAEHLEN VON ZELLEN 25 3.4.
PLASMIDTRANSFEKTION 25 3.5. REKLONIERUNG 26 3.6. HERSTELLUNG VON
BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN 26 4. IMMUNOLOGISCHE METHODEN 27 4.1. EL1SA
27 4.1.1. NACHWEIS VON BSAK 27 4.1.2. QUANTIFIZIERUNG DER PRODUZIERTEN
ANTIKOERPERKLASSEN 28 4.1.3. NACHWEIS UND QUANTIFIZIERUNG VON
ANTI-A20-IDIOTYP-ANTIKOERPERN 28 4.2. DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS) 29
4.2.1. BESTIMMUNG DER BINDUNGSAKTIVITAET VON BSAK 29 4.2.2. NACHWEIS
TUMORREAKTIVER ANTIKOERPER 30 4.2.3. ANALYSE VON VOLLBLUT UND MILZZELLEN
30 4.3. KOMPLEMENTLYSE 31 4.4. MTT-ZYTOTOXIZITAETS-TEST 31 4.5. DEPLETION
VON B-LYMPHOZYTEN AUS MILZZELLEN 32 4.6. ANTIKOERPERABHAENGIGE
ZELLVERMITTELTE ZYTOTOXIZITAET (ADCC) 32 5. TIEREXPERIMENTELLE METHODEN
33 5.7. GEWINNUNG VON MAKROPHAGEN 33 5.2. PRAEPARATION VON MILZZELLEN 33
5.3. THERAPIEVERSUCHE UND VAKZINIERUNGEN 34 INHALTSVERZEICHNIS 6.
STATISTISCHE AUSWERTUNG 34 D. ERGEBNISSE 35 1. AUFREINIGUNG DES
BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERS BLLU 35 2. QUANTIFIZIERUNG DER PRODUZIERTEN
ANTIKOERPER-VARIANTEN 37 3. HERSTELLUNG UND REINIGUNG VON BISPEZIFISCHEN
F(AB VFRAGMENTEN :... 41 4. FUNKTIONALITAET DER BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPER
IN VITRO 45 4.1. DAS B16-MELANOM-MODELL IN VITRO I 45 4.1.1.
REDIRIGIERTE ZELLULAERE ZYTOTOXIZITAET 45 4.1.2. ANTIKOERPERABHAENGIGE
ZEILVERMITTELTE ZYTOTOXIZITAET (ADCC) 50 4.1.3. INDUKTION VON ZYTOKINEN
UND KOSTIMULI DURCH BISPEZIFISCHE ANTIKOERPER. 53 4.2. DAS
A20-LYMPHOM-MODELL IN VITRO 55 4.2.1. TRANSFEKTION VON A20-ZELLEN 55
4.2.2. REDUKTION VON A20-LYMPHOMZELLEN DURCH BISPEZIFISCHE ANTIKOERPER 56
4.2.3. EINFLUSS DER ZIELANTIGENDICHTE AUF DIE BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER-VERMITTELTE TUMORZELLELIMINATION 57 5. WIRKUNG DER
BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPER IN VIVO 59 5.7. THERAPIE DES B16-MELANOMS 59
5.2. THERAPIE DES A20-LYMPHOMS 63 5.3. IMMUNISIERUNG GEGEN TUMOREN MIT
HILFE VON BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN 66 5.3.1. IMMUNISIERUNG GEGEN DAS
B16-MELANOM 66 5.3.1.1. DIE THERAPIE MIT DEM BSAK FUEHRT ZUR BILDUNG VON
KOMPLEMENT- FIXIERENDEN TUMORREAKTIVEN ANTIKOERPERN UND DER INDUKTION
EINES LANG-ANHALTENDEN IMMUNSCHUTZES 66 5.3.1.2. DIE HUMORALE
IMMUNANTWORT TRAEGT ZUM ANTITUINOR-SCHUTZ BEI 70 5.3.1.3. DIE ROLLE DER
T-ZELLEN BEI DER ABSTOSSUNG DES B16-MELANOMS 71 5.3.1.3. ZUSAMMENFASSUNG
DER IMMUNISIERUNGSDATEN IM B16-MELANOM- MODELL 74 5.3.2. IMMUNISIERUNG
GEGEN DAS A20-LYMPHOM 75 5.3.2.1. MAEUSE KOENNEN MIT INTAKTEN
BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPER UND BESTRAHLTEN TUMORZELLEN EFFEKTIV GEGEN
A20-WILDTYPZELLEN IMMUNISIERT WERDEN 76 5.3.2.2. IMMUNISIERTE MAEUSE
BILDEN TUMORSPEZIFISCHE ANTI-IDIOTYP-ANTIKOERPER 79 5.3.2.3. CD4-POSITIVE
T-ZELLEN SIND IN DER INDUKTIONSPHASE DER IMMUNISIERUNG WICHTIG FUER DIE
BILDUNG DER HUMORALEN IMMUNANTWORT 80 INHALTSVERZEICHNIS IV 5.3.2.4. DIE
HUMORALE IMMUNANTWORT TRAEGT ZUR BEOBACHTETEN PROTEKTION GEGEN
A20-TUMORZELLEN BEI 80 5.3.2.5. DIE ROLLE DER T-ZELLEN BEI DER ABSTOSSUNG
DES A20-LYMPHOMS 82 5.3.2.6. ZUSAMMENFASSUNG DER IMMUNISIERUNGSDATEN IM
A20-MODELL 83 E. DISKUSSION 84 1. HERSTELLUNG UND ANALYSE INTAKTER
BISPEZIFISCHER MAUS-IGG2 A X RATTE- IGG2B-ANTIKOERPER UND ZUGEHOERIGER
BISPEZIFISCHER F(AB ) 2 -FRAGMENTE 84 2. ZERSTOERUNG VON TUMORZELLEN MIT
HILFE DES INTAKTEN BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERS BILU 87 3. INTAKTE
BISPEZIFISCHE ANTIKOERPER UND BISPEZIFISCHE F(AB )2-FRAGMENTE IM
VERGLEICH 89 4. INDUKTION EINER TUMORIMMUNITAET 92 F. ZUSAMMENFASSUNG 98
G. LITERATUR 101 H. DANKSAGUNG 111 LEBENSLAUF 112
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