Einfluss der "advanced glycation endproducts" (AGEs) auf die Proliferation und Migration von choroidalen Endothelzellen und retinalen Pigmentepithelzellen im Rahmen der altersabhängigen Makuladegeneration:
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2004
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG Seite
1.1 Die altersabhängige Makuladegeneration (AMD) 10
1.1.1 Einteilung und Prävalenz 10
1.1.2 Pathophysiologie der AMD 11
1.1.3 Risikofaktoren der AMD 13
1.1.4 Therapiemöglichkeiten der AMD 14
1.2 Angiogenese und choroidale Neovaskularisation 17
1.2.1 Prinzipien der Aniogenese 17
1.2.2 „Advanced glycated endproducts (AGEs) 20
1.2.3 Rolle der AGEs in der Angiogenese 21
1.3 Thema dieser Arbeit 23
2. MATERIAL UND METHODEN 24
2.1 Kulturmedien, Puffer, Chemikalien, Zusätze und Lösungen 24
2.1.1 Kulturmedien 24
2.1.2 Puffer 24
2.1.3 Chemikalien 25
2.1.4 Zusätze 25
2.1.5 Lösungen 26
2.2 Kulturgefäße und andere Materialien 27
2.3 Laborgeräte 28
2.4 Gewinnung und Kultivieren von bovinen RPE Zellen und
bovinen CECs 30
2.4.1 Augenpräparation 30
2.4.2 Gewinnung der RPE Zellen 30
2.4.3 Präparation und Verdau der CECs 31
2.4.4 Primärkultur der bovinen CECs nach Separation mit Hilfe von
Magnet gekoppelten LEA 32
2.5 Allgemeine Zellkultur 35
2.5.1 Beschichtung von Zellkulturplastik 35
2.5.2 Sterilfiltrieren von Flüssigkeiten 36
2.5.3 Herstellung der Medien 36
2.5.4 Mediumwechsel (Füttern der Zellen) 37
INHALTSVERZEICHNIS
2.5.5 Passagieren von Zellen (Trypsinieren) 37
2.5.6 Einfrieren und Auftauen von Zellen 38
2.5.7 Zellzahlbestimmung 39
2.6 AGE Präparation 40
2.7 Methoden zur Messung der Zellproliferation 40
2.7.1 MTT (3 (4,5 dimethylthiazol 2 yl) 2,5 diphenyl Tetrazolium
Bromid) Test 41
2.7.2 BrdU5 (Brom 2 desoxyuridin) Test 41
2.8 Migrationsversuch mit den Zellen 42
2.9 Statistische Auswertung 43
3. ERGEBNISSE 45
3.1 Ergebnisse der Zellpräparation 45
3.2 Ergebnisse der AGE Präparation 45
3.3 Ergebnisse der Proliferationsversuche 46
3.3.1 Einfluß der AGE Stimulation auf die Proliferation von
bovinen CECs 46
3.3.1.1 Versuche mittels MTT Test 46
3.3.1.2 Proliferationsversuche mittels BrdU Test 49
3.3.2 Einfluß der AGE Stimulation auf die Proliferation der bovinen
RPE Zellen 52
3.3.2.1 Versuche mittels MTT Test 52
3.3.2.2. Proliferationsversuche mittels BrdU Test 54
3.4 Ergebnisse der Migrationsversuche 57
3.4.1 Einfluß der AGE Stimulation auf Migration der bovinen
CECs 57
3.4.2 Einfluß der AGE Stimulation auf die Migration der bovinen
RPE Zellen 58
4. DISKUSSION 60
4.1 Einfluss der AGEs auf die bovinen CECs 60
4.2 Einfluss der AGEs auf die RPE Zellen 67
4.3 Chemie der verwendeten AGEs 72
4.4 Diskussion der Methoden 76
INHALTSVERZEICHNIS
4.4.1 Proliferationsversuche 77
4.4.2 Migrationsversuche 80
4.5 Ausblick 82
5. ZUSAMMENFASSUNG 83
6. LITERATURVERZEICHNIS 85
7. LEBENSLAUF 95
8. DANKSAGUNG
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