Die Bedeutung von Gap-Junctions bei der interzellulären Ausbreitung von Calciumsignalen in humanen Endothelzellen:
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USAMMENFASSUNG
.....................................................................................................
V
1
EINFUEHRUNG
.............................................................................................................
1
2
LITERATURUEBERSICHT
........................................................................................
2
2.1
D
AS
E
NDOTHEL
IN
DER
D
URCHBLUTUNGSREGULATION
.......................................
2
2.2
G
AP
J
UNCTIONS
.......................................................................................................
3
2.3
B
EDEUTUNG
UND
F
UNKTION
VON
C
A
2+
AUF
ZELLULAERER
E
BENE
.......................
5
2.4
Z
IELE
DER
A
RBEIT
................................................................................................
11
3
MATERIAL
.................................................................................................................
13
3.1
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.......................................................................................................
13
3.2
C
HEMIKALIEN
....................................................................................................
14
3.3
P
UFFERLOESUNGEN
.................................................................................................
16
4
METHODEN
................................................................................................................
18
4.1
Z
ELLKULTUR
.....................................................................................................
18
4.1.1
HUVEC
............................................................................................................
18
4.1.2
HELA-ZELLEN
.....................................................................................................
19
4.2
PRAEPARATION
DER
MURINEN
AORTA
.....................................................................................
20
4.3
M
ESSUNG
UND
D
ARSTELLUNG
DER
C
ALCIUMAUSBREITUNG
..............................
20
4.3.1
FUNKTIONSWEISE
VON
FURA-2/AM.
....................................................................
20
4.3.2
CALCIUMMESSUNG
.............................................................................................
22
4.3.3
CALCIUMMESSUNG
IN
HUVEC
...........................................................................
25
4.3.3.1
HUMORALE
ZELLSTIMULATION
......................................................................
25
4.3.3.2
MECHANISCHE
ZELLSTIMULATION
..........................................
26
4.3.4
CALCIUMMESSUNG
IN
ENDOTHELZELLEN
DER
MURINEN
AORTA
...............................
28
4.3.5
BESTIMMUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CALCIUMKONZENTRATION
...............................
29
4.3.6
AUSWERTUNG
DER
CALCIUMMESSUNGEN
..............................................................
31
4.4
M
ESSUNG
VON
CGMP
IN
Z
ELLLYSAT
.................................................................
32
4.5
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
...............................................................................................
35
4.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
...........................................................................................
:
..........
37
4.7
S
TATISTIK
..............................................................................................................
39
X
INHALTSVERZEICHNIS
5
ERGEBNISSE
............................................................................................................
40
5.1
I
MMUNZYTOCHEMISCHE
C
HARAKTERISIERUNG
VON
HUVEC
UND
N
ACHWEIS
V
ON
G
AP
J
UNCTIONS
...............................................................................
40
5.2
C
ALCIUMKONZENTRATION
IN
UNSTIMULIERTEN
HUVEC
..................................
42
5.3
C
ALCIUMANSTIEG
DURCH
S
TIMULATION
MIT
H
ISTAMIN
ODER
I
ONOMYCIN
............
43
5.3.1
EINFLUSS
EINER
GAP
JUNCTION
BLOCKADE
AUF
DEN
HISTAMIN-INDUZIERTEN
CALCIUMANSTIEG
IN
HUVEC
...............................................................
46
5.3.2
EXPRESSION
VON
HISTAMINREZEPTOR
1
AUF
HUVEC.
........................................
48
5.3.3
NO-ABHAENGIGER
ANSTIEG
DER
CGMP-PRODUKTION
UNTER
HISTAMIN
...............
50
5.4
C
ALCIUMANSTIEG
DURCH
S
TIMULATION
MIT
ATP
...........................................
51
5.4.1
EINFLUSS
DER
GAP
JUNCTION
BLOCKADE
AUF
DEN
ATP-INDUZIERTEN
CALCIUMANSTIEG
...................................................................................
53
5.4.2
EFFEKT
DES
P2Y-REZEPTORHEMMERS
SURAMIN
AUF
DEN
ATP-INDUZIERTEN
CALCIUMANSTIEG
...................................................................................
54
5.4.3
VERTEILUNG
DER
P2Y2-R^ZEPTOREN
AUF
HUVEC
................................................
55
5.5
C
ALCIUMANSTIEG
DURCH
S
TIMULATION
MIT
ATP
IM
E
NDOTHEL
ISOLIERTER
BLUTGEFAESSE
...................................................................................................................................
56
5.6
C
ALCIUMANSTIEG
NACH
MECHANISCHER
S
TIMULATION
...................................
58
5.6.1
HELA-ZELLEN
.....................................................................................................
58
5.6.1.1
TRANSFIZIERTE
HELA-ZELLEN
EXPRIMIEREN
CX43
......................................
58
5.6.1.2
MECHANISCHE
STIMULATION
VON
HELA-ZELLEN
..........................................
59
5.6.2
MECHANISCHE
STIMULATION
VON
HUVEC
.........................................................
60
5.1
A
USBREITUNGSGESCHWINDIGKEIT
DES
CALCIUMSIGNALS
........................................
62
5.8
XESTOSPONGIN
VERRINGERT
DIE
AUSBREITUNGSFLAECHE
DER
CALCIUMWELLE
IN
HUVEC
...............................................................................................
63
6
DISKUSSION
.............................................................................................................
65
7
VERZEICHNISSE
....................................................................................................
80
7.1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
......................................................................................................
80
7.2
LITERATURVERZEICHNIS
...........................................................................................................
85
D
ANKSAGUNG
...................................................................................................................
98
|
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