Untersuchung der Funktion des angiogenen Faktors VEGF in der Entwicklung des zentralen Nervensystems:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Gießen, Univ., Diss., 2001 |
| Beschreibung: | VI, 183 S. Ill., graph. Darst. : 30 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
1 EINLEITUNG 1
1.1 Das Kreislaufsystem 1
1.2 Entwicklung des Blutgefaßsystems 3
1.3 Regulatoren der Vaskulogenese und der Angiogenese 6
1.3.1 Das VEGF/VEGF Rezeptor System 7
1.3.1.1 Die VEGF Familie 7
1.3.1.2 Expressionskontrolle der VEGF Familie 11
1.3.1.3 VEGF Rezeptoren 12
1.3.2 Zelladhäsionsrezeptoren 14
1.3.3 Die Angiopoietine und die Tie Rezeptoren 15
1.3.4 Die Funktion des VEGF/VEGF Rezeptorsystems während der Entwicklung 16
1.3.5 Rolle von VEGF in pathologischen Prozessen 22
2 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 25
3 MATERIAL UND METHODEN 26
3.1 Geräte 26
3.2 Verbrauchsmaterialien 27
3.3 Häufig verwendete Lösungen 29
3.4 Verwendete Antikörper 29
3.5 Verwendete Plasmide 30
3.6 Verwendete Mausstämme und transgene Mäuse 32
3.7 Verwendete Oligonukleotide 32
3.8 Bakterien 34
3.8.1 Bakterien Medien 34
3.8.2 Lagerung und Vermehrung 34
3.8.3 Herstellung transformationskompetenter Bakterien 35
3.8.4 Chemische Transformation von Bakterien 35
Inhaltsverzeichnis ü
3.9 DNS Techniken 36
3.9.1 Isolation von Plasmid DNS aus Bakterien 36
3.9.2 Analytische DNS Präparation 36
3.9.3 Präparation genomischer DNS aus Gewebe 37
3.9.4 Gewinnung von genomischer DNS aus Schwanzspitzen und Dottersäcken 37
3.9.5 Quantifizierung von Nukleinsäuren 38
3.9.6 Auftrennung von DNS mittels Gelelektrophorese 38
3.9.7 Präparation von DNS Fragmenten 39
3.9.8 Enzymatische Modifikation von DNS 3 9
3.9.9 Standardverfahren zur Klonierung von DNS Fragmenten 41
3.9.10 Polymerase Kettenreaktion (PCR) 41
3.9.11 Radioaktive Markierung von DNS 42
3.9.12 „Southern Blof Analyse von DNS 42
3.9.13 Didesoxysequenzierung von DNS 43
3.10 Kultur von embryonalen Stammzellen (ES Zellen) der Maus 44
3.10.1 Geräte 44
3.10.2 Chemikalien und Reagenzien 44
3.10.3 Verwendete Medien und Lösungen 45
3.10.4 Verwendete Zellen 46
3.10.5 Arbeiten mit Zellkulturen 46
3.10.6 Präparation von embryonalen Fibroblasten der Maus (MEF) 46
3.10.7 Präparation von Zellkulturschalen mit MEF 47
3.10.8 Auftauen von ES Zellen 47
3.10.9 Kultivierung von ES Zellen 47
3.10.10 Elektroporation von ES Zellen 48
3.10.11 Picken der Kolonien 48
3.10.12 Passagieren der Zellen in der Mikrotiterplatte 49
3.10.13 Einfrieren der Zellen in Mikrotiterplatten 49
3.10.14 Auftauen der Zellen in Mikrotiterplatten 49
3.10.15 Aufreinigung von ES Zell DNS von Mikrotiterplatten 50
3.11 Proteinchemische Methoden 50
3.11.1 Proteinkonzentrationsbestimmung im Bicinchoninsäure Test 5 0
3.11.2 Proteinpräparation aus Mäusegehirnen 51
3.11.3 Enzyme linked immuno sorbent assay (ELISA) für murines VEGF 51
3.12 Histologie 51
Inhaltsverzeichnis m
3.12.1 Beschichtung von Objektträgern 51
3.12.2 Herstellung von Gefrierschnitten 51
3.12.3 Herstellung von Paraffinschnitten 5 2
3.12.4 Hämatoxilin Eosin Färbung von Gewebeschnitten 52
3.12.5 Perjodsäure Schiff Färbung 52
3.12.6 Imrnunhistochemie 53
3.12.7 ß Galactosidase Färbung von Gefrierschitten 5 3
3.12.8 Terminale Transferase vermittelte Markierung von DNS Einzelstrangbrüchen 54
3.12.9 in sz7« Hybridisierung mit a [ ^S] markierten RNS Sonden 54
3.12.9.1 Verwendete Sonden 56
3.13 Arbeiten mit Mäusen 5 8
3.13.1 Nachzucht 58
3.13.2 Töten der Mäuse und Embryonenpräparation 59
3.13.3 ß Galactosidase Färbung ganzer Embryonen (in tofo Färbung) 60
3.13.4 Hypoxieexperimente mit Mäusen 60
3.13.5 SauerstoffinduzierteRetinopathie(OIR) 60
3.14 Retinadigestion 60
4 ERGEBNISSE 62
4.1 Expression von VEGF und VEGFR 2 während der Embryonalentwicklung der Maus in
ZNS und Auge 62
4.2 Veränderung des endogenen VEGF Gens der Maus durch homologe Rekombination 67
4.2.1 Charakteristiken eines Targeting Vektors 69
4.2.2 Herstellung eines Targeting Vektors 70
4.2.2.1 Genkartierung der verwendeten Plasmide 70
4.2.3 Insertion des HSV tk Gens in pBlueskript 72
4.2.4 Insertion des Exon 2 enthaltenden Bereichs des mVEGF Gens in pBHSV ^ 72
4.2.5 Insertion des neo Gens in pB VEGFNX/HSV tk 72
4.2.6 Insertion einer weiteren loxP Stelle in das Plasmid
pBVEGFNX/neoSMSV tk 74
4.2.7 Insertion des Exon 3 des m VEGF Gens in das Plasmid
pBK£GFNX/loxP/«eo8/HSV tf: 76
4.2.8 Ersetzen der fehlerhaften loxP Stelle 77
4.2.9 Insertion des Exon 4 und 5 enthaltenden m VEGF Genfragments in das
Plasmid pB VEGFNXJloxP/ VEGFXX/neo%/HSV tk 77
Inhaltsverzeichnis — —
4.2.10 Herstellung eines Targeting Vektors mit einem verlängerten kurzen Arm 78
4.2.11 Kontrolle der beiden Targeting Vektoren 79
4.2.12 Transfektion der Targeting Vektoren in ES Zellen und Analyse der
entstandenen Klone 80
4.2.13 Transfektion der Targeting Vektoren in ES Zellen 80
4.2.14 Analyse der entstandenen Klone 81
4.3 Konditionelle Inaktivierung des VEGF Gens im Zentralen Nervensystem der Maus 81
4.3.1 VEGF lox/lox Mäuse 81
4.3.2 Konditionelle Inaktivierung des VEGF Gens in Bereichen des ZNS während
der postnatalen Entwicklung der Maus 82
4.3.2.1 Zucht der GFAP cre Mäuse 83
4.3.2.2 Reportermaus Analysen zur indirekten Darstellung der cre Rekombinase
Aktivität in GFAP cre transgenen Mäusen 83
4.3.2.2.1 Indirekter Nachweis der cre Rekombinase Aktivität in embryonalen
und adulten GFAP cre transgenen Mäusen 84
4.3.2.3 Heterozygote und homozygote Inaktivierung des m VEGF Gens durch
Aktivität des GFAP cre Transgens 89
4.3.2.3.1 Darstellung des Phänotyps von VEGF lox/wt//GFAP cre und
VEGF lox/lox/ /GFAP cre Mäusen 89
4.3.2.3.1.1 Augenuntersuchungen bei GFAP cre transgenen Mäusen 94
4.3.2.3.2 Untersuchung des Gehirns von VEGF lox/lox//GFAP cre Mäusen 95
4.3.2.3.3 Deletion des VEGF Gens im Gehirn und Augen von
VEGF loxlloxllGFAP cre Mäusen 95
4.3.2.3.4 VEGF Konzentrationen in Gehirnen von VEGF lox/lox// GFAP cre
Mäusen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen 96
4.3.3 Konditionelle Inaktivierung des VEGF Gens im ZNS der Maus während der
Embryonalentwicklung 100
4.3.3.1 Indirekter Nachweis der cre Rekombinase Aktivität in Nestin cre Mäusen 100
4.3.3.1.1 Expression der cre Rekombinase in Nestin cre transgenen Mäusen
während der Embryonalentwicklung 101
4.3.3.1.2 N achweis der cre Rekombinase Expression in adulten Nestin cre
transgenen Tieren 103
4.3.3.2 Inaktivierung eines VEGF Allels während der Embryonalentwicklung im
ZNS von Mäusen 107
4.3.3.2.1 Charakterisierung der VEGF oxlwt//Nestin cre Tiere 108
4.3.3.2.2 Deletionshäufigkeit des VEGF lox Gens in Organen von
Inhaltsverzeichnis V
VEGF ox/wt//Nestin cre Mäusen 108
4.3.3.2.3 Deletion des VEGF lox Gens in der Retina von
VEGF ox/wt//Nestin cre Mäusen 109
4.3.3.2.4 VEGF Konzentrationen in Gehirnen von VEGF ox/wt//Nesän cre
Mäusen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen 112
4.3.3.2.5 Gefäßzählung in Gehirnen von VEGF lox/wt/ZNestin cre Mäusen 114
4.3.3.2.6 Untersuchung des retinalen Gefaßsystems adulter
VEGF loxJwt//Nestin cre Mäuse 121
4.3.3.2.7 Die Inaktivierung eines VEGF Allels in den VEGF ox/wt//Nestin cre
Mäusen bewirkt die Inhibition der Neovaskularisierung in der Retina
in einem Mausmodell der Retinopathie von Frühgeborenen 122
4.3.4 Homozygote konditioneile Inaktivierung von VEGF im ZNS 123
4.3.4.1 Zucht der VEGF lox/lox//Nestin cre Mäuse 123
4.3.4.2 Nachweis der embryonalen Letalität bei Mäusen des Genotyps
VEGF lox/lox und VEGF oxl oxlNestin cre. 124
4.3.4.3 VEGF ox/wt//Nestin cre Männchen vererben die Deletion des
VEGF lox Allel mit unterschiedlicher Häufigkeit 127
4.3.5 Craniale Dysmorphien von VEGF oyJ oxllNestin cre Mäusen 128
5 DISKUSSION 133
5.1 Herstellung der Targeting Vektoren 134
5.2 Heterozygote und homozygote Inaktivierung des VEGF Gens im ZNS postnataler
Mäuse 135
5.2.1 Expressionsmuster der cre Rekombinase im Gehirn GFAP cre transgener Mäuse 135
5.2.2 Deletion des dritten Exons des VEGF Gens in VEGF lox/lox// GFAP cre Mäusen 136
5.2.2.1 Expression von VEGF im Gehirn der VEGF lox/lox// GFAP cre Mäusen 137
5.2.3 Phänotyp des Gehirns der VEGF lox/lox// GFAP cre Mäuse 137
5.3 Pathologische Veränderungen der Augen nach heterozygoter bzw.
homozygoter, GFAP cre vermittelter Inaktivierung des VEGF Gens 138
5.4 Heterozygote und Homozygote Inaktivierung von VEGF während
der Embryonalentwicklung des ZNS 141
5.4.1 Expressionsmuster der cre Rekombinase in Nestin cre transgenen Mäusen 142
5.4.2 Heterozygote Inaktivierung von VEGF im ZNS während
der Embryonalentwicklung 143
5.4.3 Deletion des dritten Exons des VEGF Gens in VEGF loxIwtJ/Nestin cre Mäusen 143
Inhaltsverzeichnis VI
5.4.4 Expression von VEGF im Gehirn von VEGF oxlvAl INestin cre Mäusen 143
5.4.5 Phänotyp des Gehirns der VEGF lox/wt/ INestin cre Mäuse 145
5.4.6 Augenphänotyp der VEGF oxlwtllNestin cre Mäusen 146
5.4.7 Die Inaktivierung von VEGF in VEGF lox/wt/ INestin cre Mäusen
führt zu einer Inhibition der Neovaskularisierung in dem
Modell der Sauerstoff induzierten Retinopathie 148
5.4.8 Expression der cre Rekombinase außerhalb des ZNS der
VEGF lox/wt/ INestin cre Mäuse 150
5.4.9 Analyse der VEGF oxl oxlINestin cre Mäuse 150
6 ZUSAMMENFASSUNG 155
7 LITERATURVERZEICHNIS 157
8 ANHANG 178
8.1 Abkürzungen 178
8.2 Eidesstattliche Erklärung 180
8.3 Lebenslauf 181
8.4 Publikationen 182
8.5 Danksagung 183
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis I
1 EINLEITUNG 1
1.1 Das Kreislaufsystem 1
1.2 Entwicklung des Blutgefaßsystems 3
1.3 Regulatoren der Vaskulogenese und der Angiogenese 6
1.3.1 Das VEGF/VEGF Rezeptor System 7
1.3.1.1 Die VEGF Familie 7
1.3.1.2 Expressionskontrolle der VEGF Familie 11
1.3.1.3 VEGF Rezeptoren 12
1.3.2 Zelladhäsionsrezeptoren 14
1.3.3 Die Angiopoietine und die Tie Rezeptoren 15
1.3.4 Die Funktion des VEGF/VEGF Rezeptorsystems während der Entwicklung 16
1.3.5 Rolle von VEGF in pathologischen Prozessen 22
2 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 25
3 MATERIAL UND METHODEN 26
3.1 Geräte 26
3.2 Verbrauchsmaterialien 27
3.3 Häufig verwendete Lösungen 29
3.4 Verwendete Antikörper 29
3.5 Verwendete Plasmide 30
3.6 Verwendete Mausstämme und transgene Mäuse 32
3.7 Verwendete Oligonukleotide 32
3.8 Bakterien 34
3.8.1 Bakterien Medien 34
3.8.2 Lagerung und Vermehrung 34
3.8.3 Herstellung transformationskompetenter Bakterien 35
3.8.4 Chemische Transformation von Bakterien 35
Inhaltsverzeichnis ü
3.9 DNS Techniken 36
3.9.1 Isolation von Plasmid DNS aus Bakterien 36
3.9.2 Analytische DNS Präparation 36
3.9.3 Präparation genomischer DNS aus Gewebe 37
3.9.4 Gewinnung von genomischer DNS aus Schwanzspitzen und Dottersäcken 37
3.9.5 Quantifizierung von Nukleinsäuren 38
3.9.6 Auftrennung von DNS mittels Gelelektrophorese 38
3.9.7 Präparation von DNS Fragmenten 39
3.9.8 Enzymatische Modifikation von DNS 3 9
3.9.9 Standardverfahren zur Klonierung von DNS Fragmenten 41
3.9.10 Polymerase Kettenreaktion (PCR) 41
3.9.11 Radioaktive Markierung von DNS 42
3.9.12 „Southern Blof' Analyse von DNS 42
3.9.13 Didesoxysequenzierung von DNS 43
3.10 Kultur von embryonalen Stammzellen (ES Zellen) der Maus 44
3.10.1 Geräte 44
3.10.2 Chemikalien und Reagenzien 44
3.10.3 Verwendete Medien und Lösungen 45
3.10.4 Verwendete Zellen 46
3.10.5 Arbeiten mit Zellkulturen 46
3.10.6 Präparation von embryonalen Fibroblasten der Maus (MEF) 46
3.10.7 Präparation von Zellkulturschalen mit MEF 47
3.10.8 Auftauen von ES Zellen 47
3.10.9 Kultivierung von ES Zellen 47
3.10.10 Elektroporation von ES Zellen 48
3.10.11 Picken der Kolonien 48
3.10.12 Passagieren der Zellen in der Mikrotiterplatte 49
3.10.13 Einfrieren der Zellen in Mikrotiterplatten 49
3.10.14 Auftauen der Zellen in Mikrotiterplatten 49
3.10.15 Aufreinigung von ES Zell DNS von Mikrotiterplatten 50
3.11 Proteinchemische Methoden 50
3.11.1 Proteinkonzentrationsbestimmung im Bicinchoninsäure Test 5 0
3.11.2 Proteinpräparation aus Mäusegehirnen 51
3.11.3 Enzyme linked immuno sorbent assay (ELISA) für murines VEGF 51
3.12 Histologie 51
Inhaltsverzeichnis m
3.12.1 Beschichtung von Objektträgern 51
3.12.2 Herstellung von Gefrierschnitten 51
3.12.3 Herstellung von Paraffinschnitten 5 2
3.12.4 Hämatoxilin Eosin Färbung von Gewebeschnitten 52
3.12.5 Perjodsäure Schiff Färbung 52
3.12.6 Imrnunhistochemie 53
3.12.7 ß Galactosidase Färbung von Gefrierschitten 5 3
3.12.8 Terminale Transferase vermittelte Markierung von DNS Einzelstrangbrüchen 54
3.12.9 in sz7« Hybridisierung mit a [ ^S] markierten RNS Sonden 54
3.12.9.1 Verwendete Sonden 56
3.13 Arbeiten mit Mäusen 5 8
3.13.1 Nachzucht 58
3.13.2 Töten der Mäuse und Embryonenpräparation 59
3.13.3 ß Galactosidase Färbung ganzer Embryonen (in tofo Färbung) 60
3.13.4 Hypoxieexperimente mit Mäusen 60
3.13.5 SauerstoffinduzierteRetinopathie(OIR) 60
3.14 Retinadigestion 60
4 ERGEBNISSE 62
4.1 Expression von VEGF und VEGFR 2 während der Embryonalentwicklung der Maus in
ZNS und Auge 62
4.2 Veränderung des endogenen VEGF Gens der Maus durch homologe Rekombination 67
4.2.1 Charakteristiken eines Targeting Vektors 69
4.2.2 Herstellung eines Targeting Vektors 70
4.2.2.1 Genkartierung der verwendeten Plasmide 70
4.2.3 Insertion des HSV tk Gens in pBlueskript 72
4.2.4 Insertion des Exon 2 enthaltenden Bereichs des mVEGF Gens in pBHSV ^ 72
4.2.5 Insertion des neo Gens in pB VEGFNX/HSV tk 72
4.2.6 Insertion einer weiteren loxP Stelle in das Plasmid
pBVEGFNX/neoSMSV tk 74
4.2.7 Insertion des Exon 3 des m VEGF Gens in das Plasmid
pBK£GFNX/loxP/«eo8/HSV tf: 76
4.2.8 Ersetzen der fehlerhaften loxP Stelle 77
4.2.9 Insertion des Exon 4 und 5 enthaltenden m VEGF Genfragments in das
Plasmid pB VEGFNXJloxP/ VEGFXX/neo%/HSV tk 77
Inhaltsverzeichnis — —
4.2.10 Herstellung eines Targeting Vektors mit einem verlängerten kurzen Arm 78
4.2.11 Kontrolle der beiden Targeting Vektoren 79
4.2.12 Transfektion der Targeting Vektoren in ES Zellen und Analyse der
entstandenen Klone 80
4.2.13 Transfektion der Targeting Vektoren in ES Zellen 80
4.2.14 Analyse der entstandenen Klone 81
4.3 Konditionelle Inaktivierung des VEGF Gens im Zentralen Nervensystem der Maus 81
4.3.1 VEGF lox/lox Mäuse 81
4.3.2 Konditionelle Inaktivierung des VEGF Gens in Bereichen des ZNS während
der postnatalen Entwicklung der Maus 82
4.3.2.1 Zucht der GFAP cre Mäuse 83
4.3.2.2 Reportermaus Analysen zur indirekten Darstellung der cre Rekombinase
Aktivität in GFAP cre transgenen Mäusen 83
4.3.2.2.1 Indirekter Nachweis der cre Rekombinase Aktivität in embryonalen
und adulten GFAP cre transgenen Mäusen 84
4.3.2.3 Heterozygote und homozygote Inaktivierung des m VEGF Gens durch
Aktivität des GFAP cre Transgens 89
4.3.2.3.1 Darstellung des Phänotyps von VEGF lox/wt//GFAP cre und
VEGF lox/lox/ /GFAP cre Mäusen 89
4.3.2.3.1.1 Augenuntersuchungen bei GFAP cre transgenen Mäusen 94
4.3.2.3.2 Untersuchung des Gehirns von VEGF lox/lox//GFAP cre Mäusen 95
4.3.2.3.3 Deletion des VEGF Gens im Gehirn und Augen von
VEGF loxlloxllGFAP cre Mäusen 95
4.3.2.3.4 VEGF Konzentrationen in Gehirnen von VEGF lox/lox//'GFAP cre
Mäusen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen 96
4.3.3 Konditionelle Inaktivierung des VEGF Gens im ZNS der Maus während der
Embryonalentwicklung 100
4.3.3.1 Indirekter Nachweis der cre Rekombinase Aktivität in Nestin cre Mäusen 100
4.3.3.1.1 Expression der cre Rekombinase in Nestin cre transgenen Mäusen
während der Embryonalentwicklung 101
4.3.3.1.2 N achweis der cre Rekombinase Expression in adulten Nestin cre
transgenen Tieren 103
4.3.3.2 Inaktivierung eines VEGF Allels während der Embryonalentwicklung im
ZNS von Mäusen 107
4.3.3.2.1 Charakterisierung der VEGF \oxlwt//Nestin cre Tiere 108
4.3.3.2.2 Deletionshäufigkeit des VEGF lox Gens in Organen von
Inhaltsverzeichnis V
VEGF \ox/wt//Nestin cre Mäusen 108
4.3.3.2.3 Deletion des VEGF lox Gens in der Retina von
VEGF \ox/wt//Nestin cre Mäusen 109
4.3.3.2.4 VEGF Konzentrationen in Gehirnen von VEGF \ox/wt//Nesän cre
Mäusen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen 112
4.3.3.2.5 Gefäßzählung in Gehirnen von VEGF lox/wt/ZNestin cre Mäusen 114
4.3.3.2.6 Untersuchung des retinalen Gefaßsystems adulter
VEGF loxJwt//Nestin cre Mäuse 121
4.3.3.2.7 Die Inaktivierung eines VEGF Allels in den VEGF \ox/wt//Nestin cre
Mäusen bewirkt die Inhibition der Neovaskularisierung in der Retina
in einem Mausmodell der Retinopathie von Frühgeborenen 122
4.3.4 Homozygote konditioneile Inaktivierung von VEGF im ZNS 123
4.3.4.1 Zucht der VEGF lox/lox//Nestin cre Mäuse 123
4.3.4.2 Nachweis der embryonalen Letalität bei Mäusen des Genotyps
VEGF lox/lox und VEGF \oxl\oxlNestin cre. 124
4.3.4.3 VEGF \ox/wt//Nestin cre Männchen vererben die Deletion des
VEGF lox Allel mit unterschiedlicher Häufigkeit 127
4.3.5 Craniale Dysmorphien von VEGF \oyJ\oxllNestin cre Mäusen 128
5 DISKUSSION 133
5.1 Herstellung der Targeting Vektoren 134
5.2 Heterozygote und homozygote Inaktivierung des VEGF Gens im ZNS postnataler
Mäuse 135
5.2.1 Expressionsmuster der cre Rekombinase im Gehirn GFAP cre transgener Mäuse 135
5.2.2 Deletion des dritten Exons des VEGF Gens in VEGF lox/lox//'GFAP cre Mäusen 136
5.2.2.1 Expression von VEGF im Gehirn der VEGF lox/lox//'GFAP cre Mäusen 137
5.2.3 Phänotyp des Gehirns der VEGF lox/lox//'GFAP cre Mäuse 137
5.3 Pathologische Veränderungen der Augen nach heterozygoter bzw.
homozygoter, GFAP cre vermittelter Inaktivierung des VEGF Gens 138
5.4 Heterozygote und Homozygote Inaktivierung von VEGF während
der Embryonalentwicklung des ZNS 141
5.4.1 Expressionsmuster der cre Rekombinase in Nestin cre transgenen Mäusen 142
5.4.2 Heterozygote Inaktivierung von VEGF im ZNS während
der Embryonalentwicklung 143
5.4.3 Deletion des dritten Exons des VEGF Gens in VEGF loxIwtJ/Nestin cre Mäusen 143
Inhaltsverzeichnis VI
5.4.4 Expression von VEGF im Gehirn von VEGF \oxlvAl INestin cre Mäusen 143
5.4.5 Phänotyp des Gehirns der VEGF lox/wt/'INestin cre Mäuse 145
5.4.6 Augenphänotyp der VEGF \oxlwtllNestin cre Mäusen 146
5.4.7 Die Inaktivierung von VEGF in VEGF lox/wt/'INestin cre Mäusen
führt zu einer Inhibition der Neovaskularisierung in dem
Modell der Sauerstoff induzierten Retinopathie 148
5.4.8 Expression der cre Rekombinase außerhalb des ZNS der
VEGF lox/wt/'INestin cre Mäuse 150
5.4.9 Analyse der VEGF \oxl\oxlINestin cre Mäuse 150
6 ZUSAMMENFASSUNG 155
7 LITERATURVERZEICHNIS 157
8 ANHANG 178
8.1 Abkürzungen 178
8.2 Eidesstattliche Erklärung 180
8.3 Lebenslauf 181
8.4 Publikationen 182
8.5 Danksagung 183 |
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