Molekulare Analyse des Sonic-Hedgehog-Patched-Signaltransduktionsweges in primitiven neuroektodermalen Tumoren:
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2000
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5
1
EINLEITUNG
.
9
1.1
KLINIK
UND
HISTOPATHOLOGIE
DES
MEDULLOBLASTOMS
.
9
1.2
MOLEKULARE
ENTSTEHUNGSMECHANISMEN
VON
TUMOREN
.
11
1.2.1
AKTIVIERUNG
VON
PROTOONKOGENEN
.
11
1.2.2
INAKTIVIERUNG
VON
TUMORSUPPRESSORGENEN
.
12
1.3
DER
SONIC
HEDGEHOG/PATCHED-SIGNA\TRANSDUKTIONSWEG
.
13
1.4
ZIEL
DIESER ARBEIT
.
16
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
17
2.1
UNTERSUCHUNGSKOLLEKTIV
.
17
2.2
AUFARBEITUNG
DES
TUMORGEWEBES
.
17
2.3
ISOLIERUNG
VON
DNA
.
17
2.4
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
18
2.5
SILBERFARBUNG
VON
POLYACRYLAMIDGELEN
.
19
2.6
MUTATIONSANALYSE
MIT
HILFE
DER
EINZELSTRANG
KONFORMATIONS-POLYMORPHISMUS
(SSCP)-ANALYSE
.
20
2.6.1
REAMPLIFIKATION
DER
PROBEN
MIT
ABERRANTEM
LAUF
VERHALTEN
IM
SSCP-GEL
.
25
2.7
AUFREINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
.
25
2.8
SEQUENZIERUNG
.
25
2.9
ISOLIERUNG
VON
RNA
MITTELS
TRIZOL
.
27
2.9.1
BEHANDLUNG
VON
RNA
MIT
DNASE
1
.
27
2.9.2
KONTROLLE
DER
RNA
AUF
DNA-KONTAMINATION
.
28
6
2.10
MRNA-QUANTIFIZIERUNG
DURCH
EXTERNE
STANDARDMOLEKUELE
.
28
2.10.1
SYNTHESE
DER
STANDARDS
MITTELS
MUTAGENESE-PCR
.
30
2.10.2
AUFREINIGUNG
DES
MUTAGENESE-PCR-PRODUKTES
.
31
2.10.3
IN-VITRO-TRANSKRIPTION
.
31
2.10.4
AUFARBEITUNG
DER
TRANSKRIPTIONSPRODUKTE
.
32
2.10.5
CDNA-SYNTHESE
.
32
2.10.6
AMPLIFIZIERUNG
DER
GENPRODUKTE
.
34
2.10.7
ANALYSE
DER
AMPLIKONS
AUF
DEM
SEQUENZIERER
.
34
2.11
IMMUNHISTOCHEMIE
.
34
2.12
GERAETE
.
36
3.
ERGEBNISSE
.
37
3.1
MOLEKULARGENETISCHE
ANALYSE
DES
PTCH-GENS
.
40
3.1.1
EXPRESSION
VON
PTCH.
.
40
3.1.2
IMMUNHISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
PTCH.
.
41
3.2
MOLEKULARGENETISCHE
ANALYSE
VON
SMOH.
.
41
3.2.1
MUTATIONSANALYSE
VON
SMOH.
.
42
3.2.2
EXPRESSION
VON
SMOH.
.
43
3.3
MOLEKULARGENETISCHE
ANALYSE
VON
SHH
.
44
3.3.1
MUTATIONSANALYSE
VON
SHH.
.
44
3.3.2
EXPRESSION
VON
SHH.
.
45
3.3.3
IMMUNHISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
SHH.
.
45
3.4
EXPRESSION
VON
GLI
1
.
46
7
4
DISKUSSION
.48
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
53
6
LITERATURVERZEICHNIS
.55
7
ANHANG
.60
8
DANKSAGUNG
.
61
9
LEBENSLAUF.
.
62 |
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