Verfügbarkeit: Funktion der miR-148a in reifen Plasmazellen

Funktion der miR-148a in reifen Plasmazellen:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Pracht, Katharina 1988- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Erlangen ; Nürnberg [2018]
Schlagworte:	Plasmazelle Differenzierung Überleben Proteomanalyse Methode miRNS Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	271 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS ABBILDUNGSVERZEICHNIS ______________________________________________________________ 7 TABELLENVERZEICHNIS__________________________________ ______________________________ 9 1. ZUSAMMENFASSUNG _______________________________________________________________ 10 2. S UM M ARY__________________________________________________________ ____________ 11 3. EINLEITUNG _______________________________________________________________________ 12 3.1. ANTIKOERPER-SEZERNIERENDE PLASM AZELLEN ________________________________________ 12 3.1.1. B-ZELLENTWICKLUNG UND PLASMAZELLDIFFERENZIERUNG ____________________________ 12 3.1.2. LANGLEBIGE PLASMAZELLEN UND IHRE UEBERLEBENSSTRATEGIEN _____________________ 23 3.2. MICRORNAS___________________________________________________________________32 3.2.1. BIOSYNTHESE UND FUNKTION VON MICRORNAS __________________________________ 33 3.2.2. ROLLE DER MICRORNAS IN PLASMAZELLEN ______________________________________36 3.2.3. DIE M IR-148/152 FAMILIE: PHYSIOLOGISCHE FUNKTIONEN UND KRANKHEITSMARKER __ 41 4. ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT _ ________________________________________________________48 5. ERGEBNISSE ____________________ 50 5.1. ETABLIERUNG EINER DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN METHODE ZUR IDENTIFIZIERUNG VON PLASMAZELL- DIFFERENZIERUNGSSTADIEN _______ 50 5.1.1. IDENTIFIZIERUNG VON CD138, TACI, B220 UND CD19 ALS PLASMABLAST/ PLASMAZELLMARKERPROTEINE ________________________________________________ 50 5.1.2. CHARAKTERISIERUNG DER CD19-POSITIVEN UND -NEGATIVEN PLASMAZELL-SUBPOPULATIONEN _____________________________________________________ 54 5.2. ETABLIERUNG EINES MAUSMODELLS ZUR TAMOXIFEN-INDUZIERBAREN CRE-VERMITTELTEN DELETION DES M IR -148A-G ENS ________ 61 5.2.1. ETABLIERUNG EINER MAUSLINIE MIT LOXP-FLANKIERTEN MIR-148A-ALLELEN UND EINER TAMOXIFEN-AKTIVIERBAREN CRE-REKOM BINASE_______________________________________61 5.2.2. UEBERPRUEFUNG DER GENETISCHEN UND IMMUNOLOGISCHEN EIGENSCHAFTEN VON NICHT- IMMUNISIERTEN UND NICHT-INDUZIERTEN ROSA26CREERT2 X M IR -148A-M AEUSEN__________65 5.2.3. OPTIMIERUNG DER TAMOXIFEN-INDUZIERTEN, CRE-VERMITTELTEN DELETION DER LOXP- FLANKIERTEN MIR-148A-ALLELE IN V IV O ____ ___________________________________________71 5.3. UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES EINER INDUZIERTEN M IR-148A DELETION AUF T- UND B- LYMPHOZYTEN IN VERSCHIEDENEN ORGANEN____________________________________________75 5.3.1. ANALYSE DER THYMUS-ABHAENGIGEN IMMUNANTWORT VON NICHT-INDUZIERTEN ROSA26CREERT2 LOXP-FLANKIERTEN MIR-148A MAEUSEN_______________________________75 5.3.2. MIR-148A DELETIONSEFFIZIENZ AUF EBENE DER D N A ____________________________84 5.3.3. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSE DES EINFLUSSES EINER TAM-INDUZIERTEN M IR-148A- DELETION AUF T- UND B-LYMPHOZYTEN______________________________________________ 87 5.3.4. BESTIMMUNG DER ANZAHL AN ASC UND ANALYSE DER ANTIGEN-SPEZIFISCHEN LG-SPIEGEL IM SERUM VON TAM-INDUZIERTEN MIR-148A-DEFIZIENTEN M AE U S E N _____________________95 5.3.5. EINFLUSS DER TAMOXIFEN-INDUZIERTEN MIR-148A-DELETION AUF ZUVOR EDU-MARKIERTE PLASMAZELLEN__________________________________________________________________ 100 5.4. UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS DER MIR-148A-DELETION AUF DAS UEBERLEBEN IN VITRO GENERIERTER PLASM ABLASTEN _______________________________________________________ 106 5.4.1. EINFLUSS DER TAM-INDUZIERTEN MIR-148A-DELETION AUF DIE PROLIFERATION REIFER, IN VITRO- GENERIERTER LPS-B LASTEN _______________________________________________________ 107 5.4.2. ANALYSE DES MIR-148A EINFLUSSES AUF DIE REIFUNG UND DIE VITALITAET IN VITRO- GENERIERTER LPS-BLASTEN _______________________________________________________ 111 5.5. UNTERSUCHUNG DER POTENTIELLEN WIRKMECHANISMEN DER M IR -148A _________________ 120 5.5.1. VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNG DES PROTEOMS IN NAIVEN FO-B-ZELLEN UND KNOCHENMARKS-PLASMAZELLEN AUS WILDTYP- UND MIR-148-DEFIZIENTEN- M AEU SEN ______ 120 5.5.2. EINFLUSS DER T AMOXIFEN-INDUZIERTEN MIR-148A-DELETION AUF DIE IGH- ISOTYPENVERTEILUNG UND MICRORNA-EXPRESSION IN ISOLIERTEN P LASM AZELLEN ___________ 149 5.5.3. UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES DER TRANSGENEN EXPRESSION VON TN F-A AUF PLASMAZELLEN__________________________________________________________________ 155 5.5.4. EINFLUSS DER MIR-148A AUF DIE GLUKOSEAUFNAHME VON PLASM AZELLEN _________ 160 6. DISKUSSION ____ _______________________________________________________________169 6.1. IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON PLASMAZELLEN _________________________ 169 6.1.1. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE BESTIMMUNG VON PLASMABLASTEN UND PLASMAZELLEN IN DER MILZ UND IM KNOCHENMARK ______________________________________________________ 169 6.1.2. PROTEOMICS: WELCHE PROTEINE PRODUZIEREN PLASMAZELLEN IM KNOCHENMARK? __ 176 6.2. FUNKTION DER MIR-148A IN REIFEN PLASM AZELLEN _________________________________ 183 6.2.1. DER VERLUST DER MIR-148A BEEINTRAECHTIGT DIE PLASMAZELLDIFFERENZIERUNG _____ 183 6.2.2. DIE MIR-148A IST EIN UEBERLEBENSFAKTOR FUER PLASM AZELLEN ___________________ 185 6.2.3. DER TAMOXIFEN-INDUZIERTE VERLUST DER MIR-148A HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE ANZAHL TNP-SPEZIFISCHER ASC ________________________________________________________ 189 6.2.4. DAS MIGRATIONSVERHALTEN DER PLASMAZELLEN KOENNTE VON DER MIR-148A BEEINFLUSST WERDEN __________________________________________ 191 6.2.5. DIE MIR-148A UNTERSTUETZT DIE GLUT-1 VERMITTELTE GLUKOSEAUFNAHME IN PLASMAZELLEN __________________________________________________________________ 193 6.2.6. DIE MIR-148A BEEINFLUSST DAS ANTIKOERPER-REPERTOIRE________________________195 7. MATERIAL UND M ETHODEN ________________________________________________________ 197 7.1. M ATERIAL____________________________________________________________________ 197 7.1.1. G ERAETE__________________________________________________________________197 7.1.2. VERWENDETE SOFTWARE ZUR DATENANALYSE ___________________________________ 198 7.1.3. VERWENDETE K ITS ________________________________________________________ 198 7.1.4. VERBRAUCHSMATERIAL______________________________________________________ 198 7.1.5. NAEHRMEDIUM______________________________ 200 7.1.6. VERWENDETE ZUSAETZE FUER IN VITRO STIMULIERTE PRIMAERE MURINE B-ZELLEN__________200 7.1.7. ANTIKOERPER __ ________________________________________________ 200 7.1.8. VERWENDETE OLIGONUKLEOTIDE______________________________________________201 7.1.9. M IRNA-ASSAYS ______ _ _________________________________________________ 202 7.1.10. SONSTIGE PUFFER UND LOESUNGEN __________________________________________ 202 7.1.11. SONSTIGE CHEMIKALIEN/REAGENZIEN_______________________________________203 7.2. VERWENDETE MAUSSTAEMME ________________________________________________ 204 7.3. METHODEN 204 7.3.1. PRAEPARATION DER DNA VON MURINEN ZELLEN UND BIOPSIEN _____________________ 204 7.3.2. ISOLATION DER RNA/MICRORNAS VON MURINEN ZELLEN __________________________ 204 7.3.3. TAG MAN REAL-TIME PCR ZUR QUANTIFIZIERUNG VON REIFEN M ICROR N A S ________ 205 7.3.4. GENOTYPISIERUNGS-PCRS ______ ___________________________________________205 7.3.5. GELELEKTROPHORESE VON PCR-PRODUKTEN ___________________________________ 206 7.3.6. PRAEPARATION MURINER ZELLEN EX VIVO________________________________________ 207 7.3.7. ISOLATION PRIMAERER MURINER B-ZELLEN AUS DER MILZ ____________________________ 208 7.3.8. IN VITRO STIMULATION PRIMAERER MURINER B-ZELLEN UND TAMOXIFEN-INDUZIERTE GEN- DELETION ______________________________________________________________________ 209 7.3.9. BESTIMMUNG DER ZELLZAHL IN SUSPENSIONEN _________________________________ 209 7.3.10. FAERBUNG VON ZELLSUSPENSIONEN ZUR DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN A NALYSE ______ 210 7.3.11. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSE INTRAZELLULAERER P RO TE IN E __________________ 212 7.3.12. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSE EDU-POSITIVER Z E LLE N ____________________ 213 7.3.13. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNG DER PROLIFERATION IN VITRO ____________ 213 7.3.14. UNTERSUCHUNG DER ZELLVITALITAET MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE_________________213 7.3.15. UNTERSUCHUNG DES GLUKOSEIMPORTS MITTELS NBDG _________________________ 214 7.3.16. ZELLISOLATION MITTELS FA C S _______________________________________________ 214 7.3.17. INTRAPERITONEALE IMMUNISIERUNG VON M AE U S E N ______________________________216 7.3.18. EDU-APPLIKATION IN VIVO _________________________________________________ 216 7.3.19. TAMOXIFEN-APPLIKATION IN VIVO ___________________________________________ 217 7.3.20. ENTNAHME VON MURINEN BLUTPROBEN UND SEREN-GEWINNUNG _________________ 217 7.3.21. BESTIMMUNG DER ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN IM SERUM MITTELS E L IS A _______218 7.3.22. BESTIMMUNG DER ANZAHL ANTIKOERPER-SEZERNIERENDER ZELLEN MITTELS ELISPOT __ 219 7.3.23. PROTEINEXTRAKTION ZUR PROTEOM-ANALYSE ___________________________________ 221 8. ANHANG_________________________________________________________________________ 222 9. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS __________________________________________________________231 10. LITERATURVERZEICHNIS ____________________________________________________________ 233 11. LEBENSLAUF____________________________________________________________________ 267 12. PUBLIKATIONEN__________________________________________________________________269 13. DANKSAGUNG___________________________________________________________________ 271 14. ERKLAERUNG ___________________________________ 272
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