Verfügbarkeit: Funktionelle Charakterisierung der Interaktion zwischen den WWC Proteinen und dem Autophagie Regulator TSC1

Funktionelle Charakterisierung der Interaktion zwischen den WWC Proteinen und dem Autophagie Regulator TSC1:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Pechmann, Ava Sophie 1995- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Münster 2020
Schlagworte:	Hochschulschrift
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG .................................................................................................................. 1 1.1 DIE AUTOPHAGIE ..................................................................................................................... 1 1.1.1 AUTOPHAGIE ALS ZELLEIGENER RECYCLING MECHANISMUS .......................................... 1 1.1.2 AUTOPHAGIE IN DER KRANKHEITSENTSTEHUNG .............................................................. 2 1.2 DER MTOR SIGNALWEG ............................................................................................................ 3 1.2.1 MTOR ALS WICHTIGER ZELLGROESSENREGULATOR .............................................................. 3 1.2.2 TSC1/2 MUTATION FUEHRT ZUR TUBEROESEN SKLEROSE ..................................................6 1.3 DIE WWC PROTEINE .............................................................................................................. 7 1.3.1 WWC PROTEINFAMILIE UND IHRE ZELLBIOLOGISCHE FUNKTION ...................................... 7 1.4 DER HIPPO SIGNALWEG ........................................................................................................... 9 1.4.1 DER HIPPO SIGNALWEG REGULIERT ZELLPROLIFERATION UND ORGANWACHSTUM ............. 9 1.4.2 AMOT PROTEINE REGULIEREN DEN HIPPO SIGNALWEG ............................................. 10 1.4.3 WWC PROTEINE REGULIEREN DEN HIPPO SIGNALWEG ............................................... 11 1.5 ZIELSETZUNG ......................................................................................................................... 12 2 MATERIAL ...................................................................................................................14 2.1 GERAETE .................................................................................................................................. 14 2.2 LABORBEDARF ........................................................................................................................ 15 2.3 CHEMIKALIEN ........................................................................................................................ 17 2.4 LOESUNGEN, MEDIEN UND PUFFER ......................................................................................... 18 2.5 ENZYME ................................................................................................................................ 19 2.6 PRIMER .................................................................................................................................. 20 2.7 PLASMIDE UND VEKTOREN .................................................................................................... 20 2.8 PRIMAERE ANTIKOERPER ............................................................................................................. 21 2.9 SEKUNDAERE ANTIKOERPER ....................................................................................................... 21 2.10 BAKTERIEN ............................................................................................................................ 22 2.11 EUKARYONTISCHE ZELLLINIEN .................................................................................................. 22 2.12 KOMMERZIELLE KITS .............................................................................................................. 22 2.13 SOFTWARE ............................................................................................................................. 23 3 METHODEN ............................................................................................................... 24 3.1 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN .............................................................................................. 24 3.1.1 TRANSFORMATION VON KOMPETENTEN E. COLI BAKTERIEN .......................................... 24 3.1.2 PLASMID-DNA ISOLIERUNG ........................................................................................ 24 3.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN ...................................................................................... 25 3.2.1 RESTRIKTIONSVERDAU ................................................................................................. 25 3.2.2 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE ................................................................................. 25 3.2.3 GELELUTION ................................................................................................................ 26 3.2.4 DNA-LIGATION ......................................................................................................... 26 3.2.5 POLYMERASE KETTENREAKTION (PCR) ...................................................................... 27 3.2.6 SEQUENZIERUNGS-PCR ........................................................................................... 27 3.2.7 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG DER DNA .................................................................. 28 3.3 METHODEN DER ZELLKULTUR .................................................................................................. 28 3.3.1 KULTIVIERUNG VON ZELLLINIEN .................................................................................... 28 3.3.2 T RANSIENTE T RANSFEKTION ........................................................................................ 29 3.3.3 HERSTELLUNG VON ZELLLYSATEN .................................................................................. 30 3.4 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN ..................................................................................... 31 3.4.1 IMMUNPRAEZIPITATION ............................................................................................... 31 3.4.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) ...................................... 32 3.4.3 WESTERN BLOT ANALYSE ........................................................................................... 33 3.4.4 IMMUNFLUORESZENZ ................................................................................................ 34 3.5 PLNDUCER21-PURO-SYSTEM ............................................................................................ 35 4 ERGEBNISSE ............................................................................................................ 37 4.1 GENERIERUNG DES KONSTRUKTS V180 FLAG WWC1 WWDM ............................................. 37 4.2 CHARAKTERISIERUNG DER WWC1/2 KNOCKOUT ZELLLINIE ...................................................... 41 4.2.1 EINFLUSS DES WWC1/2 KNOCKOUTS AUF DEN HIPPO SIGNALWEG .......................... 41 4.2.2 DIE BEDEUTUNG VERSCHIEDENER WWC1 DOMAENEN FUER DIE LATS PHOSPHORYLIERUNG ................................................................................................................. 43 4.3 INTERAKTIONSSTUDIE DER WWC PROTEINE MIT TSC1 .......................................................... 46 4.4 EINFLUSS VON WWC1 AUF DEN MTOR SIGNALWEG UND DIE AUTOPHAGIE ........................ 50 5 DISKUSSION ........................................................................................................... 54 5.1 WWC PROTEINE REGULIEREN DEN HIPPO SIGNALWEG IN HEK293T ZELLEN ....................... 54 5.2 DIE INTERAKTION VON WWC1 UND TSC1 ............................................................................ 56 5.3 DER EINFLUSS VON WWC1 AUF DEN MTOR SIGNALWEG UND DIE AUTOPHAGIE .................. 58 5.4 MOEGLICHE MTOR-UNABHAENGIGE FUNKTIONEN DER WWC1-TSC1 INTERAKTION ................. 59 5.5 AUSBLICK .............................................................................................................................. 60 5.6 ZUSAMMENFASSUNG ........................................................................................................... 61 6 LITERATURVERZEICHNIS ............................................................................................. 63 7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS ....................................................................................... 72 8 TABELLENVERZEICHNIS ............................................................................................. 73 9 DANKSAGUNG .......................................................................................................... 74 75 10 LEBENSLAUF
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