Immunzytologischer Nachweis von disseminierten Tumorzellen im Knochenmark von Patientinnen mit einem Mammakarzinom:
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Seite
Abkürzungsverzeichnis 8
1. EINLEITUNG 9
1.1. Allgemeine Einleitung 9
1.2. Ätiologie 10
1.2.1. Genetische und familiäre Disposition 10
1.2.2. Alter und Menopausenstatus 11
1.2.3. Geburt und Stillen 11
1.2.4. Hormonelle Faktoren und orale Kontrazeptiva 12
1.2.5. Lebensumstände 13
1.2.6. Strahlenexposition 13
1.2.7. Mastopathie 13
1.3. Pathologie des Mammakarzinoms 14
1.3.1. Pathologie und Lokalisation 14
1.3.2. Histologische Klassifikation 15
1.4. Prognostische und therapierelevante Faktoren 15
1.4.1. Allgemeines 15
1.4.2. Anforderungen an Prognosefaktoren 16
1.4.3. Prognosefaktoren 17
1.4.3.1. Etablierte Prognosefaktoren 17
1.4.3.2. Neue Prognosefaktoren 18
1.5. Stand der Forschung 21
1.6. Zielsetzung und Fragestellung 22
4
2. MATERIAL UND METHODEN 25
2.1. Herkunft der Proben 25
2.1.1. Knochenmark 25
2.1.2. Tumorgewebe 25
2.1.3. Pleura und Aszitespunktate 25
2.2. Chemikalien, Antikörper und Material 26
2.3. Aufarbeitung der Proben 26
2.3.1. Methode zur Aufarbeitung von Knochenmarkproben 26
2.3.2. Methode zur Aufarbeitung von Tumorproben 27
2.3.3. Methode zur Aufbereitung von Pleura und Aszitespunktaten 27
2.4. Immunzytologische Färbung 27
2.4.1. Durchführung der APAAP Färbung 27
2.4.2. Durchführung der „EPIMET Färbung 28
2.4.3. APAAP Vorfärbung der Proben für
die Fluoreszenz in situ Hybridisierung 29
2.5. Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 29
2.5.1. Durchführung der FISH 29
2.6. Patientenkollektiv 32
2.7. Statistische Methoden 33
5
3. ERGEBNISSE 35
3.1. Immunzytologische Untersuchung 35
3.1.1. Tumorzellnachweis im Knochenmark
bei Mammakarzinompatientinnen 35
3.1.2. Negativkontrollen 41
3.1.3. Ergebnisse der immunzytologischen Untersuchung
bei Mammakarzinompatientinnen 41
3.1.3.1. Tumorgröße (pT) 42
3.1.3.2. Lymphknotenstatus (pN) 43
3.1.3.3. Metastasierung (M) 44
3.1.3.4. Grading(G) 45
3.1.3.5. Östrogen und Progesteronrezeptorstatus 46
3.1.3.6. Menopausenstatus / Alter der Patientinnen 47
3.1.4. Nachbeobachtung der Patientinnen 49
3.1.5. Tumorzellnachweis im Knochenmark bei Patientinnen
mit multiplen Mammakarzinomen 50
3.1.6. Tumorzellnachweis im Knochenmark bei Patienten
mit intestinalen Karzinomen 51
3.1.7. Immunzytologische Untersuchung an Tumorgewebe
und Ergüssen 54
3.2. Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 55
3.2.1. Ergebnisse der FISH an Mammakarzinomproben 58
3.2.2. Ergebnisse der FISH an Ovarialkarzinomproben 61
3.2.3. Ergebnisse der FISH an Pleura und Aszitespunktaten 64
3.2.4. Ergebnisse der FISH an Knochenmarkpunktaten von
Mammakarzinompatientinnen 68
6
4. DISKUSSION 69
4.1. Immunzytologie 70
4.1.1. Ergebnisse der Knochenmarkuntersuchung von
Mammakarzinompatientinnen in Bezug zu etablierten
Prognosefaktoren 72
4.1.2. Nachbeobachtung der Patientinnen 80
4.1.3. Knochenmarkergebnisse bei intestinalen malignen Tumoren 81
4.1.4. Positive Zellen in den karzinomfreien Kontrollproben 83
4.2. Fluoreszenz in situ Hybridisierung 85
4.2.1 Ergebnisse der FISH an Mammakarzinomproben 89
4.2.2. Ergebnisse der FISH an Ovarialkarzinomproben 90
4.2.3. Ergebnisse der FISH Technik an Pleura und Aszitespunktaten 91
4.2.4. Ergebnisse der FISH an Knochenmarkpunktaten
von Mammakarzinompatientinnen 93
5. ZUSAMMENFASSUNG 94
6. LITERATURVERZEICHNIS 96
7. DANKSAGUNG 119
8. LEBENSLAUF 120
7
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INHALTSVERZEICHNIS
Seite
Abkürzungsverzeichnis 8
1. EINLEITUNG 9
1.1. Allgemeine Einleitung 9
1.2. Ätiologie 10
1.2.1. Genetische und familiäre Disposition 10
1.2.2. Alter und Menopausenstatus 11
1.2.3. Geburt und Stillen 11
1.2.4. Hormonelle Faktoren und orale Kontrazeptiva 12
1.2.5. Lebensumstände 13
1.2.6. Strahlenexposition 13
1.2.7. Mastopathie 13
1.3. Pathologie des Mammakarzinoms 14
1.3.1. Pathologie und Lokalisation 14
1.3.2. Histologische Klassifikation 15
1.4. Prognostische und therapierelevante Faktoren 15
1.4.1. Allgemeines 15
1.4.2. Anforderungen an Prognosefaktoren 16
1.4.3. Prognosefaktoren 17
1.4.3.1. Etablierte Prognosefaktoren 17
1.4.3.2. Neue Prognosefaktoren 18
1.5. Stand der Forschung 21
1.6. Zielsetzung und Fragestellung 22
4
2. MATERIAL UND METHODEN 25
2.1. Herkunft der Proben 25
2.1.1. Knochenmark 25
2.1.2. Tumorgewebe 25
2.1.3. Pleura und Aszitespunktate 25
2.2. Chemikalien, Antikörper und Material 26
2.3. Aufarbeitung der Proben 26
2.3.1. Methode zur Aufarbeitung von Knochenmarkproben 26
2.3.2. Methode zur Aufarbeitung von Tumorproben 27
2.3.3. Methode zur Aufbereitung von Pleura und Aszitespunktaten 27
2.4. Immunzytologische Färbung 27
2.4.1. Durchführung der APAAP Färbung 27
2.4.2. Durchführung der „EPIMET' Färbung 28
2.4.3. APAAP Vorfärbung der Proben für
die Fluoreszenz in situ Hybridisierung 29
2.5. Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 29
2.5.1. Durchführung der FISH 29
2.6. Patientenkollektiv 32
2.7. Statistische Methoden 33
5
3. ERGEBNISSE 35
3.1. Immunzytologische Untersuchung 35
3.1.1. Tumorzellnachweis im Knochenmark
bei Mammakarzinompatientinnen 35
3.1.2. Negativkontrollen 41
3.1.3. Ergebnisse der immunzytologischen Untersuchung
bei Mammakarzinompatientinnen 41
3.1.3.1. Tumorgröße (pT) 42
3.1.3.2. Lymphknotenstatus (pN) 43
3.1.3.3. Metastasierung (M) 44
3.1.3.4. Grading(G) 45
3.1.3.5. Östrogen und Progesteronrezeptorstatus 46
3.1.3.6. Menopausenstatus / Alter der Patientinnen 47
3.1.4. Nachbeobachtung der Patientinnen 49
3.1.5. Tumorzellnachweis im Knochenmark bei Patientinnen
mit multiplen Mammakarzinomen 50
3.1.6. Tumorzellnachweis im Knochenmark bei Patienten
mit intestinalen Karzinomen 51
3.1.7. Immunzytologische Untersuchung an Tumorgewebe
und Ergüssen 54
3.2. Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 55
3.2.1. Ergebnisse der FISH an Mammakarzinomproben 58
3.2.2. Ergebnisse der FISH an Ovarialkarzinomproben 61
3.2.3. Ergebnisse der FISH an Pleura und Aszitespunktaten 64
3.2.4. Ergebnisse der FISH an Knochenmarkpunktaten von
Mammakarzinompatientinnen 68
6
4. DISKUSSION 69
4.1. Immunzytologie 70
4.1.1. Ergebnisse der Knochenmarkuntersuchung von
Mammakarzinompatientinnen in Bezug zu etablierten
Prognosefaktoren 72
4.1.2. Nachbeobachtung der Patientinnen 80
4.1.3. Knochenmarkergebnisse bei intestinalen malignen Tumoren 81
4.1.4. Positive Zellen in den karzinomfreien Kontrollproben 83
4.2. Fluoreszenz in situ Hybridisierung 85
4.2.1 Ergebnisse der FISH an Mammakarzinomproben 89
4.2.2. Ergebnisse der FISH an Ovarialkarzinomproben 90
4.2.3. Ergebnisse der FISH Technik an Pleura und Aszitespunktaten 91
4.2.4. Ergebnisse der FISH an Knochenmarkpunktaten
von Mammakarzinompatientinnen 93
5. ZUSAMMENFASSUNG 94
6. LITERATURVERZEICHNIS 96
7. DANKSAGUNG 119
8. LEBENSLAUF 120
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