Humane Hepatozytenkulturen immobilisiert in einer dreidimensionalen Kollagenmatrix: ein In-Vitro-Modell für Langzeituntersuchungen an differenzierten Hepatozyten
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2000
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3
I
NHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
E
INLEITUNG
8
II.
M
ATERIAL
UND
M
ETHODIK
14
2.1
PATIENTEN
14
2.2 ISOLATION
UND
PRAEPARATION DER
HEPATOZYTEN
IS
2.2.1
HUMANE
HEPATOZYTEN
IS
2.2.2
SCHWEINEHEPATOZYTEN
19
2.3
HERSTELLUNG
DES
KOLLAGENS
21
2.4
UNTERSUCHUNG
ZUR
DIFFUSIONSKINETIK
DURCH
DIE
KOLLAGENMATRIX
22
2.S
ZELLKULTURTECHNIK
23
2.S.1
IMMOBILISATIONSVERFAHREN
23
2.5.2
DOUBLE
GEL-TECHNIK
25
2.5.3
IMMOBILISATION
AUF
DREIDIMENSIONALE
POLYURETHANFASEM
26
2.6
HYPOTHERME
LAGERUNG
DER
ZELLEN
28
2.7
MORPHOLOGISCHE
VERLAUFSBEOBACHTUNG
30
2.8
FUNKTIONSANALYSEN
31
2.8.1
DNA
31
2.8.2
PROTEIN
32
2.8.3
LDH
32
2.8.4
ALBUMIN
33
2.8.5
FIBRINOGEN
34
2.8.6
IMMUNGLOBULIN
G
34
2.8.7
ETHOXYCOUMARIN
DEETHYLIERUNG
35
4
2.8.8
KONJUGATION
VON
PARACETAMOL
35
2.8.9
DEMETHYLIERUNG
VON
P-NITROANISOL
ZU
P-NITROPHENOL
36
2.8.10
METABOLISMUS
VON
PIMOBENDAN
(UD-CG
115)
37
2.8.11
ANDERE
ASSAYS
39
2.9
DATENANALYSE
UND
AUSWERTUNG
40
III.
E
RGEBNISSE
41
3.1
ISOLATIONSERGEBNISSE
41
3.2
KULTURKONFIGURATION
41
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
DIFFUSION
DURCH DIE
KOLLAGENMATRIX
42
3.3.1
MATRIX/MEDIUM-VERTEILUNG
VON
7-HYDROXYCOUMARIN
43
3.3.2
DIFFUSIONSKINETIK
DURCH
DIE
KOLLAGENMATRIX
44
3.3.3
ETHOXYCOUMARINDEETHYLASE-AKTIVITAET
IN
DER
IMMOBILISATIONS
UND
DER
SINGLE
GEZ-TECHNIK
48
3.4
ZELLMORPHOLOGIE
HUMANER
HEPATOZYTEN
IM
KULTURVERLAUF
49
3.4.1
LICHTMIKROSKOPIE
49
3.4.2
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
51
3.5
VITALITAET
UND
ZELLINTEGRITAET
IM
KULTURVERLAUF
53
3.5.1
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
53
3.5.2
DNA-GEHALT
54
3.5.3
GPT-FREISETZUNG
55
3.5.4
LDH-FREISETZUNG
56
3.6
SEKRETIONSPARAMETER
IM
KULTURVERLAUF
57
3.6.1
ALBUMINSYNTHESE
57
3.6.2
FIBRINOGENSYNTHESE
59
5
3.6.3
HAMSTOFFSYNTHESC
60
3.6.4
FUENF-AMINOLAEVULINSAEURE
INDUZIERTE
PORPHYRINSYNTHESE
61
3.7
CYTOCHROM
P450-AKTIVITAET
62
3.7.1
DEETHYLIERUNG
VON
ETHOXYCOUMARIN
62
3.7.2
DEETHYLIERUNG
VON
P-NITROANISOL
63
3.8
KONJUGATION
VON
PARACETAMOL
64
3.9
METABOLISMUS
VON
PIMOBENDAN:
IN
VITRO/IN
VIVO
VERGLEICH
68
3.9.1
STRUKTURERKENNUNG
VON
PIMOBENDAN
UND
SEINER
METABOLITE
68
3.9.2
METABOLISMUS
VON
PIMOBENDAN
IN
VITRO
69
3.9.3
METABOLISMUS
VON
PIMOBENDAN
IN
VIVO
73
3.10
HYPOTHERME
LAGERUNG
VON
HEPATOZYTEN
76
3.10.1
MORPHOLOGIE
76
3.10.2
ZELLVITALITAET
UND
-ADHAESION
80
3.10.3
ALBUMINSYNTHESE
82
3.10.4
CYTOCHROM
P450-AKTIVITAET
86
3.10.5
EINFLUSS
DER
ZELLKONZENTRATION
87
3.11
IMMOBILISATION
VON
HEPATOZYTEN
AUF
DREIDIMENSIONALEN
91
POLYURETHANFASEMETZEN
3.11.1
RAEUMLICHE
KONFIGURATION
DER
KULTURANORDNUNG
91
3.11.2
ALBUMINSYNTHESE
93
3.11.3
HAMSTOFFSYNTHESE
94
IV.
D
ISKUSSION
95
4.1
DISKUSSION
DER
METHODIK
95
4.1.1
GEWEBE
FUER
DIE
ZELLISOLATION
95
6
4.1.2
ZELLISOLATIONSTECHNIK
96
4.1.3
KULTIVIERUNG
VON
HEPATOZYTEN
99
4.1.3.1
EXOGEN
LOESLICHE
FAKTOREN
100
4.1.3.2
EXTRAZELLULAERE
MATRIX
100
4.1.3.3
ZELL/ZELL-INTERAKTIONEN
104
4.1.3.4
WACHSTUMSFAKTOREN
105
4.1.4
KOLLAGEN
ALS
DIFFUSIONSBARRIERE
105
4.1.5
HYPOTHERMIE
106
4.1.6
IMMOBILISATION
AUF
DREIDIMENSIONALE
POLYURETHAN
FASERN
108
4.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
108
4.2.1
ZELLISOLATION
108
4.2.2
ZELLKULTURTECHNIK
111
4.2.2.1
KONVENTIONELLE
KULTURTECHNIK
111
4.2.2.2
REKULTIVIERUNG
MIT
EPITHELZELLEN
112
4.2.2.3
DREIDIMENSIONALE
EXTRAZELLULAERE
114
MATRIXKONFIGURATION
4.2.2.3.
1
DOUBLE
GEL-TECHNIK
114
4.1.2.3.2
IMMOBILISATIONSVERFAHREN
117
4.2.2.3.3
VEGLEICH
DOUBLE
GEL-TECHNIK
-
122
IMMOBILISATIONSTECHNIK
4.2.2.3
HYPOTHERMIE
VON
HEPATOZYTEN
124
V.
Z
USAMMENFASSUNG
126
5.1
ZIEL
DER
PROMOTIONSARBEIT
126
5.2
METHODEN
127
7
5.3
ERGEBNISSE
128
5.4
SCHLUSSFOLGERUNG
129
VI.
L
ITERATURVERZEICHNIS
130
VII.
B
ISHER
VEROEFFENTLICHTE
T
EILASPEKTE
DER
A
RBEIT
149
VIII.
A
BSCHLIEBENDE
B
EMERKUNGEN
153
IX.
L
EBENSLAUF
155
X.
A
NHANG
157
10.1
BEWILLIGUNGSSCHREIBEN
DER
ETHIKKOMMISSION
ZUR
VERWENDUNG
157
HUMANER
ORGAN
TEILE
ZUR
LEBERZELLISOLATION |
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