Charakterisierung und Untersuchung einer neuen Spleißvariante des Proteins Vimentin an onkozytären Tumoren:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1. SIGNALUEBERTRAGUNG UND TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IN RENALEN ONKOZYTOMEN
1
1.2. ONKOZYTAERE TUMOREN 1
1.2.1. ZUR TERMINOLOGIE: ONKOZYTEN, OXYPHILE ZELLEN, HURTHLE- UND
ASKANAZY ZELLEN 1
1.2.2. ONKOZYTAERE METAPLASIE, ONKOZYTOSE UND ONKOZYTAERE TRANSFORMATION 2
1.2.3. VORKOMMEN UND SPEZIELLE PATHOLOGIE ONKOZYTAERER TUMOREN 3
1.2.4. PATHOGENESE ONKOZYTAERER TUMORE 6
1.2.5. WIDERSPRUECHLICHE ERGEBNISSE IN DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN
ANFAERBBARKEIT VON VIMENTIN IN
ONKOZYTAEREN TUMOREN 7
1.3. DAS STRUKTURPROTEIN VIMENTIN 8
1.4. CHARAKTERISIERUNG DER VIMENTIN VARIANTE 3 - DURCH ALTERNATIVES
SPLEISSEN ENTSTEHT EIN
NEUES PROTEIN 10
2. FRAGESTELLUNG 14
3. MATERIAL UND METHODEN 15
3.1. MATERIALEN 15
3.1.1. CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 15
3.1.2. PCR - REAGENZIEN 16
3.1.3. IMMUNHISTOCHEMIE - REAGENZIEN 16
3.1.4. KITS 17
3.1.5. LABOREQUIPMENT 17
3.1.6. LOESUNGEN UND PUFFER 18
3.1.7. PCR PRIMER 21
3.1.8. ANTIKOERPER FUER IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN UND WESTERN BLOT 21
3.1.8.1. VIMENTIN ANTIKOERPER VOLLAENGENMOLEKUEL 21
3.1.8.2. VIMENTIN ANTIKOERPER VARIANTE 3 21
3.1.8.3. SS-AKTIN ANTIKOERPER 22
3.1.9. UNTERSUCHUNGSMATERIAL FUER RNA - ISOLIERUNG UND IMMUNHISTOCHEMIE
22
3.1.10. UNTERSUCHUNGSMATERIAL FUER IMMUNHISTOCHEMIE ZUR AUSTESTUNG DES
ANTIKOERPERS GEGEN
VIMENTIN VARIANTE 3 UND LASERMIKRODISSEKTION 23
3.1.11. UNTERSUCHUNGSMATERIAL FUER IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN MITTELS
DES ANTIKOERPERS
GEGEN VIMENTIN VARIANTE 3 23
3.1.12. UNTERSUCHUNGSMATERIAL WESTERN BLOT 24
3.2. METHODEN 24
3.2.1. RNA ISOLIERUNG 24
3.2.2. RNA QUANTIFIZIERUNG UND REINHEITSKONTROLLE 25
3.2.3. REVERSE TRANSKRIPTION : CDNA SYNTHESE 25
3.2.4. QUANTITATIVE ECHTZEIT (ENGL. REAL TIME) POLYMERASE-KETTENREAKTION
(QRT-PCR) 25
3.2.5. LASER MIKRODISSEKTION 27
3.2.6. MAKRODISSEKTION 28
3.2.7. PROTEINISOLIERUNG 28
3.2.8. PROTEINQUANTIFIZIERUNG 29
3.2.9. WESTERN BLOT 29
3.2.10. IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN 30
V
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4. ERGEBNISSE 33
4.1. EXPRESSION DES TRANSKRIPTIONSFAKTORS PKCA, ENDOTHELIN 1, DES
ENDOTHELIN-REZEPTORS A
UND DES ZIELGENS INTERLEUKIN 6 IN ONKOZYTAEREN TUMOREN UND NORMALGEWEBEN
VERSCHIEDENER
ORGANE33
4.2. EXPRESSION VON VIMENTIN VARIANTE 3 IN ONKOZYTAEREN TUMOREN UND
NORMALGEWEBEN
VERSCHIEDENER ORGANE 33
4.2.1. ETABLIERUNG DES ANTIKOERPERS GEGEN VIMENTIN VARIANTE 3 33
4.2.1.1. IMMUNHISTOCHEMISCHE AUSTESTUNG 33
4.2.1.2. UEBERPRUEFUNG DER SPEZIFITAET DES ANTIKOERPERS GEGEN VIMENTIN
VARIANTE 3 MITTELS WESTERN
BLOT 34
4.2.2. QRT-PCR ANALYSE DER EXPRESSION VON VIMENTIN VARIANTE 3 36
4.2.3. IMMUNHISTOCHEMISCHE EXPRESSION VON VIMENTIN VARIANTE 3 IN
ONKOZYTAEREN TUMOREN UND
NORMALGEWEBEN VERSCHIEDENER ORGANE IM VERGLEICH ZUM VOLLLAENGENMOLEKUEL
VIMENTIN 40
4.2.3.1. SCHILDDRUESE 40
4.2.3.2. GLANDULA PAROTIS 42
4.2.3.3. NIERE 43
4.2.3.4. ZUSAMMENFASSUNG DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN ERGEBNISSE: 44
5. DISKUSSION 45
5.1. LAESST DAS MORPHOLOGISCH IDENTISCHE BILD VON ONKOZYTEN IN
VERSCHIEDENEN ORGANEN
ODER ALS TEIL VON TUMOREN AUF EINE IDENTISCHE BIOLOGIE, Z.B IN DER
AUSSTATTUNG AN
SIGNALKOMPONENTEN SCHLIESSEN?
45
5.2. KOENNTE DIE BEOBACHTETE VIMENTIN-POSITIVITAET DER ONKOZYTOME AUF
EINER SPIEISSFORM VON
VIMENTIN BERUHEN UND WIE IST DEREN EXPRESSION IN ANDEREN ONKOZYTAEREN
LAESIONEN? 46
5.2.1. QUANTITATIVER REAL TIME-PCR-NACHWEIS VON VIMENTIN VARIANTE 3 -
VERGLEICH DER MRNA
EXPRESSION UND DER PROTEINIDENTIFIKATION MITTELS IMMUNHISTOCHEMIE 46
5.2.2. ETABLIERUNG EINES ANTIKOERPERS GEGEN VIMENTIN VARIANTE 3 48
5.2.2.1. ANTIKOERPER DESIGN 48
5.2.2.2. IMMUNHISTOCHEMISCHE AUSTESTUNG DES ANTIKOERPERS AN FFPE-GEWEBE
49
5.2.2.3. OBERPRUEFUNG DER SPEZIFITAET DURCH WESTERN BLOT AN FFPE-GEWEBE 50
5.3. DER ANTIKOERPER GEGEN VIMENTIN VARIANTE 3 ALS POTENTIELLER
DIFFERENTIALDIAGNOSTISCHER
IMMUNHISTOCHEMISCHER MARKER ZUR ABGRENZUNG VON ONKOZYTOMEN ZU
EOSINOPHILEN VARIANTEN
VON NIERENZELLKARZINOMEN, INSBESONDERE ZU CHROMOPHOBEN
NIERENZELLKARZINOMEN 55
5.4. MOEGLICHE KONSEQUENZEN DES FEHLENS DER TAIL-DOMAENE 56
6. ZUSAMMENFASSUNG 60
7. LITERATURVERZEICHNIS 61
8. LEBENSLAUF 69
VI
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