Die Rolle der SUMOylierung bei der ischämischen Stressantwort neuraler Zellen:
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Electronic Software eBook |
| Language: | German |
| Published: |
Leipzig
[2019?]
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | 1 CD-ROM (IX, 142 Seiten) Illustrationen 12 cm |
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|---|---|
| adam_text | I
INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
........................................................................................................................
I
II
ERRATUM
.......................................................................................................................................IV
III
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...............................................................................................................
V
IV
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
..............................................................................................................
VII
V
TABELLENVERZEICHNIS....................................................................................................................
IX
1
EINLEITUNG
.....................................................................................................................................
1
1.1
DER
ISCHAEMISCHE
SCHLAGANFALL
.............................................................................................
1
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE,
CHARAKTERISIERUNG
UND
THERAPIE
..........................................................
1
1.1.2
PATHOPHYSIOLOGIE
DES
ISCHAEMISCHEN
SCHLAGANFALLS
.......................................................
2
1.1.3
EXPERIMENTELLER
SCHLAGANFALL
.........................................................................................
6
1.2
DIE
ISCHAEMISCHE
STRESSANTWORT
..........................................................................................
7
1.3
DIE
SUMOYLIERUNG
..............................................................................................................
8
1.3.1
REVERSIBLE
KONJUGATION
VON
ZIELPROTEINEN
MITTELS
SUMOYLIERUNG
..............................
8
1.3.2
PHYSIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
SUMOYLIERUNG
..........................................................
10
1.3.3
PATHOPHYSIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
SUMOYLIERUNG
.................................................
12
1.4
ZIELSTELLUNG
UND
HYPOTHESEN
...........................................................................................
15
2
MATERIAL
UND
METHODEN
...........................................................................................................
16
2.1
GERAETE,
MATERIALIEN
UND
SOFTWARE
...................................................................................
16
2.2
CHEMIKALIEN,
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
NAEHRMEDIEN
...........................................................
18
2.3
METHODEN
.........................................................................................................................
25
2.3.1
IN
VIVO
ANALYSEN
...........................................................................................................
25
2.3.2
ISOLATION
UND
KULTIVIERUNG
PRIMAERER
NEURONE
UND
GLIAZELLEN
DER
MAUS
..................
26
2.3.3
HEK293T-ZELLKULTUR
......................................................................................................
28
2.3.4
IN
VITRO
ISCHAEMIEMODELL:
SAUERSTOFF-
UND
GLUKOSEENTZUG
..........................................
28
2.3.5
PROTEINEXPRESSIONSNACHWEIS
MITTELS
IMMUNFLUORESZENZ
IN
VITRO
..............................
29
2.3.6
GENERIERUNG
VON
ZELLLYSATEN
........................................................................................
29
2.3.7
PROTEINEXPRESSIONSNACHWEIS
MITTELS
WESTERN
BLOT
....................................................
30
2.3.8
VITALITAETSTEST
..................................................................................................................
32
2.3.9
ZELLSCHAEDIGUNGSSTEST
....................................................................................................
33
2.3.10
LIFE/DEAD
TEST
.........................................................................................................
33
2.3.11
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
NEURONEN
UND
ASTROZYTEN
.......................................
33
2.3.12
STABILE
LENTIVIRALE
TRANSFEKTION
VON
ASTROZYTEN
UND
HEK293T
ZELLEN
....................
37
2.3.12
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
..........................................................................................
38
3
ERGEBNISSE
.................................................................................................................................
39
3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SUMO-REGULATION
IN
NEURALEN
ZELLEN
NACH
PMCAO
.....................
39
3.1.1
CHARAKTERISIERUNG
DES
EXPERIMENTELLEN
SCHLAGANFALLS
...............................................
39
3.1.2
NEURONALE
SUMO-IMMUNFLUORESZENZ
IN
VIVO
.............................................................
41
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.3
ASTROZYTAERE
SUMO-IMMUNFLUORESZENZ
IN
VIVO
............................................................
42
3.1.4
PHAGOZYTAERE
SUMO-IMMUNFLUORESZENZ
IN
VIVO
...........................................................
45
3.2
ETABLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
NEURONALEN
IN
VITRO
ISCHAEMIEMODELLS
............
49
3.2.1
DIE
PRIMAERE
NEURONENKULTUR
........................................................................................
49
3.2.2
ETABLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
IN
VITRO
ISCHAEMIE
..........................................
51
3.2.3
DEFINITION
VON
QUALITAETSKRITERIEN
.................................................................................
55
3.2.4
SELEKTIVER
SAUERSTOFF-
UND
GLUKOSEENTZUG
..................................................................56
3.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
IN
VITRO
ISCHAEMIE
IN
ASTROZYTENKULTUREN
.....................................
58
3.3.1
PRIMAERE
ASTROZYTENKULTUR
.............................................................................................
58
3.3.2
SAUERSTOFF-
UND
GLUKOSEENTZUG
IN
ASTROZYTENKULTUREN
..............................................
58
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
SUMO-EXPRESSION
IN
NEURONEN
IN
VITRO
............................................
62
3.4.1
IMMUNFLUORENZENZANALYSE
VON
SUMO
IN
NEURONEN
IN
VITRO
.....................................
62
3.4.2
WESTERN
BLOT
ANALYSE
VON
SUMO
IN
VITRO
...................................................................
66
3.5
UNTERSUCHUNG
DER
SUMO-EXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
IN
VITRO
..........................................
68
3.5.1
IMMUNFLUORESZENZANALYSE
VON
SUMO
IN
ASTROZYTEN
IN
VITRO
.....................................
68
3.5.2
WESTERN
BLOT:
PROTEINEXTRAKTE
AUS
ASTROZYTEN
...........................................................
73
3.5.3
WESTERN
BLOT:
FRAKTIONIERTE
LYSE
VON
ASTROZYTEN
......................................................
76
3.6
UEBEREXPRESSION
VON
SUMO
IN
PRIMAERZELLEN
....................................................................
78
3.6.1
TRANSIENTE
UEBEREXPRESSION
VON
SUMO
IN
NEURONENKULTUREN
...................................
78
3.6.2
UEBEREXPRESSION
VON
SUMO
IN
ASTROZYTENKULTUREN
....................................................
80
4
DISKUSSION
..................................................................................................................................
83
4.1
REGULATION
DER
SUMO-EXPRESSION
IM
INFARKTBEREICH
......................................................
83
4.1.1
SUMO-EXPRESSION
IN
NEURONEN
IN
VIVO
.......................................................................
84
4.1.2
SUMO-EXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
UND
PHAGOZYTEN
IN
VIVO
..........................................
85
4.2
VERSTAERKT
NACHWEISBARE
SUMO-EXPRESSION
IN
KULTIVIERTEN
PRIMAERKULTUREN
..................
86
4.3
FUNKTIONEN
DER
SUMOYLIERUNG
BEI
DER
NEURONALEN
STRESSANTWORT
...............................90
4.3.1
SUMOYLIERUNG
VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
................................................................90
4.3.2
SUMO-PROTEASEN
UND
OXIDATIVER
STRESS
......................................................................
91
4.3.4
SUMOYLIERUNG
UND
MITOCHONDRIEN
.............................................................................
92
4.3.5
SUMOYLIERUNG
VON
MEMBRANPROTEINEN
UND
SIGNALKINASEN
......................................92
4.3.6
SUMOYLIERUNG
UND
WEITERE
PTMS
BEI
DER
ZELLULAEREN
STRESSANTWORT
........................
94
4.4
SUMOYLIERUNG
UND
FUNKTIONEN
VON
GLIAZELLEN
................................................................95
4.4.1
SUMOYLIERUNG
UND
FUNKTIONEN
VON
ASTROZYTEN
.........................................................96
4.4.2
SUMOYLIERUNG
UND
FUNKTIONEN
VON
PHAGOZYTEN
....................................................... 99
4.5
SUMOYLIERUNG
UND
REGENERATION
...................................................................................
100
4.6
LIMITIERTE
EIGNUNG
DER
IN
VITRO
ISCHAEMIEMODELLE
FUER
SUMO-ANALYSEN
........................
101
4.6.1
EINSCHAETZUNG
DES
NEURONALEN
IN
VITRO
MODELLS
.........................................................
101
4.6.2
EINSCHAETZUNG
DES
ASTROZYTAEREN
IN
VITRO
MODELLS
........................................................
103
4.6.3
EINSCHAETZUNG
DERTRANSFEKTIONSANALYSEN
..................................................................
104
4.7
ABSCHLUSSBETRACHTUNG
....................................................................................................
105
II
I
INHALTSVERZEICHNIS
5
ZUSAMMENFASSUNG
..................................................................................................................
108
6
SUMMARY
..................................................................................................................................
112
7
LITERATURVERZEICHNIS
................................................................................................................
115
8
ANHANG
.....................................................................................................................................
130
9
SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG
..................................................................................................
138
10
DANKSAGUNG.............................................................................................................................
139
11
AKADEMISCHER
WERDEGANG
......................................................................................................
141
12
EIGENE
PUBLIKATIONEN
..............................................................................................................
142
III
|
| adam_txt |
I
INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
.
I
II
ERRATUM
.IV
III
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
V
IV
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
VII
V
TABELLENVERZEICHNIS.
IX
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
DER
ISCHAEMISCHE
SCHLAGANFALL
.
1
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE,
CHARAKTERISIERUNG
UND
THERAPIE
.
1
1.1.2
PATHOPHYSIOLOGIE
DES
ISCHAEMISCHEN
SCHLAGANFALLS
.
2
1.1.3
EXPERIMENTELLER
SCHLAGANFALL
.
6
1.2
DIE
ISCHAEMISCHE
STRESSANTWORT
.
7
1.3
DIE
SUMOYLIERUNG
.
8
1.3.1
REVERSIBLE
KONJUGATION
VON
ZIELPROTEINEN
MITTELS
SUMOYLIERUNG
.
8
1.3.2
PHYSIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
SUMOYLIERUNG
.
10
1.3.3
PATHOPHYSIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
SUMOYLIERUNG
.
12
1.4
ZIELSTELLUNG
UND
HYPOTHESEN
.
15
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
16
2.1
GERAETE,
MATERIALIEN
UND
SOFTWARE
.
16
2.2
CHEMIKALIEN,
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
NAEHRMEDIEN
.
18
2.3
METHODEN
.
25
2.3.1
IN
VIVO
ANALYSEN
.
25
2.3.2
ISOLATION
UND
KULTIVIERUNG
PRIMAERER
NEURONE
UND
GLIAZELLEN
DER
MAUS
.
26
2.3.3
HEK293T-ZELLKULTUR
.
28
2.3.4
IN
VITRO
ISCHAEMIEMODELL:
SAUERSTOFF-
UND
GLUKOSEENTZUG
.
28
2.3.5
PROTEINEXPRESSIONSNACHWEIS
MITTELS
IMMUNFLUORESZENZ
IN
VITRO
.
29
2.3.6
GENERIERUNG
VON
ZELLLYSATEN
.
29
2.3.7
PROTEINEXPRESSIONSNACHWEIS
MITTELS
WESTERN
BLOT
.
30
2.3.8
VITALITAETSTEST
.
32
2.3.9
ZELLSCHAEDIGUNGSSTEST
.
33
2.3.10
LIFE/DEAD
TEST
.
33
2.3.11
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
NEURONEN
UND
ASTROZYTEN
.
33
2.3.12
STABILE
LENTIVIRALE
TRANSFEKTION
VON
ASTROZYTEN
UND
HEK293T
ZELLEN
.
37
2.3.12
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
38
3
ERGEBNISSE
.
39
3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SUMO-REGULATION
IN
NEURALEN
ZELLEN
NACH
PMCAO
.
39
3.1.1
CHARAKTERISIERUNG
DES
EXPERIMENTELLEN
SCHLAGANFALLS
.
39
3.1.2
NEURONALE
SUMO-IMMUNFLUORESZENZ
IN
VIVO
.
41
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.3
ASTROZYTAERE
SUMO-IMMUNFLUORESZENZ
IN
VIVO
.
42
3.1.4
PHAGOZYTAERE
SUMO-IMMUNFLUORESZENZ
IN
VIVO
.
45
3.2
ETABLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
NEURONALEN
IN
VITRO
ISCHAEMIEMODELLS
.
49
3.2.1
DIE
PRIMAERE
NEURONENKULTUR
.
49
3.2.2
ETABLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
IN
VITRO
ISCHAEMIE
.
51
3.2.3
DEFINITION
VON
QUALITAETSKRITERIEN
.
55
3.2.4
SELEKTIVER
SAUERSTOFF-
UND
GLUKOSEENTZUG
.56
3.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
IN
VITRO
ISCHAEMIE
IN
ASTROZYTENKULTUREN
.
58
3.3.1
PRIMAERE
ASTROZYTENKULTUR
.
58
3.3.2
SAUERSTOFF-
UND
GLUKOSEENTZUG
IN
ASTROZYTENKULTUREN
.
58
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
SUMO-EXPRESSION
IN
NEURONEN
IN
VITRO
.
62
3.4.1
IMMUNFLUORENZENZANALYSE
VON
SUMO
IN
NEURONEN
IN
VITRO
.
62
3.4.2
WESTERN
BLOT
ANALYSE
VON
SUMO
IN
VITRO
.
66
3.5
UNTERSUCHUNG
DER
SUMO-EXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
IN
VITRO
.
68
3.5.1
IMMUNFLUORESZENZANALYSE
VON
SUMO
IN
ASTROZYTEN
IN
VITRO
.
68
3.5.2
WESTERN
BLOT:
PROTEINEXTRAKTE
AUS
ASTROZYTEN
.
73
3.5.3
WESTERN
BLOT:
FRAKTIONIERTE
LYSE
VON
ASTROZYTEN
.
76
3.6
UEBEREXPRESSION
VON
SUMO
IN
PRIMAERZELLEN
.
78
3.6.1
TRANSIENTE
UEBEREXPRESSION
VON
SUMO
IN
NEURONENKULTUREN
.
78
3.6.2
UEBEREXPRESSION
VON
SUMO
IN
ASTROZYTENKULTUREN
.
80
4
DISKUSSION
.
83
4.1
REGULATION
DER
SUMO-EXPRESSION
IM
INFARKTBEREICH
.
83
4.1.1
SUMO-EXPRESSION
IN
NEURONEN
IN
VIVO
.
84
4.1.2
SUMO-EXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
UND
PHAGOZYTEN
IN
VIVO
.
85
4.2
VERSTAERKT
NACHWEISBARE
SUMO-EXPRESSION
IN
KULTIVIERTEN
PRIMAERKULTUREN
.
86
4.3
FUNKTIONEN
DER
SUMOYLIERUNG
BEI
DER
NEURONALEN
STRESSANTWORT
.90
4.3.1
SUMOYLIERUNG
VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.90
4.3.2
SUMO-PROTEASEN
UND
OXIDATIVER
STRESS
.
91
4.3.4
SUMOYLIERUNG
UND
MITOCHONDRIEN
.
92
4.3.5
SUMOYLIERUNG
VON
MEMBRANPROTEINEN
UND
SIGNALKINASEN
.92
4.3.6
SUMOYLIERUNG
UND
WEITERE
PTMS
BEI
DER
ZELLULAEREN
STRESSANTWORT
.
94
4.4
SUMOYLIERUNG
UND
FUNKTIONEN
VON
GLIAZELLEN
.95
4.4.1
SUMOYLIERUNG
UND
FUNKTIONEN
VON
ASTROZYTEN
.96
4.4.2
SUMOYLIERUNG
UND
FUNKTIONEN
VON
PHAGOZYTEN
. 99
4.5
SUMOYLIERUNG
UND
REGENERATION
.
100
4.6
LIMITIERTE
EIGNUNG
DER
IN
VITRO
ISCHAEMIEMODELLE
FUER
SUMO-ANALYSEN
.
101
4.6.1
EINSCHAETZUNG
DES
NEURONALEN
IN
VITRO
MODELLS
.
101
4.6.2
EINSCHAETZUNG
DES
ASTROZYTAEREN
IN
VITRO
MODELLS
.
103
4.6.3
EINSCHAETZUNG
DERTRANSFEKTIONSANALYSEN
.
104
4.7
ABSCHLUSSBETRACHTUNG
.
105
II
I
INHALTSVERZEICHNIS
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
108
6
SUMMARY
.
112
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
115
8
ANHANG
.
130
9
SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG
.
138
10
DANKSAGUNG.
139
11
AKADEMISCHER
WERDEGANG
.
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12
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.
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