Herstellung und Charakterisierung von monoklonalen und polyklonalen Antikörpern gegen die humane lysosomale Lipase:
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Veröffentlicht: |
2001
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Beschreibung: | Hamburg, Univ., Diss., 2001 |
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INHALTSVERZEICHNIS
A.
EINLEITUNG
5
1.
EINFUEHRUNG
IN
DIE
THEMATIK
5
2.
BIOCHEMIE
UND
PATHOBIOCHEMIE
DER
LYSOSOMALEN
LIPASE
6
2.1.
EXTRAZELLULAERER
LIPOPROTEINMETABOLISMUS
6
2.2.
INTRAZELLULAERER
LIPIDMETABOLISMUS
7
2.3.
EIGENSCHAFTEN
DER
LYSOSOMALEN
LIPASE
9
3.
KLINISCH
RELEVANTE
DEFIZIENZEN
DER
LYSOSOMALEN
LIPASE
10
3.1.
WOHNAN'SCHE
ERKRANKUNG
11
3.2.
CESD
11
3.3.
PATHOGENESE
DER
WOLMAN'SCHEN
ERKRANKUNG
UND
DER
CESD
12
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
13
1.
MATERIAL
13
1.1.
CHEMIKALIEN
13
1.2.
ZELLKULTURMEDIEN
UND
ZUSAETZE
14
1.3.
ANTIKOERPER
14
1.4.
KITS
14
1.5.
MOLEKULARGEWICHTSTANDARDS,
PROTEINE
UND
ENZYME
15
1.6.
RADIOAKTIVE
MATERIALIEN
15
1.7.
WASSER
15
1.8.
WEITERE
MATERIALIEN
15
1.9.
GERAETE
15
2.
METHODEN
16
2.1.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
16
2.1.1.
IMMUNISIERUNG
16
2.1.2.
MYELOMZELLEN
19
2.1.3.
FEEDERZELLEN
19
2.1.4.
POLYETHYLENGLYKOL
19
2.1.5.
FUSION
19
2.1.6.
SELEKTION
20
2.1.7.
ZELLKULTUR
21
2.1.8.ANTIKOERPERGEWINNUNG
UND
LAGERUNG
21
2.1.9.
REKLONIERUNG
22
2.1.10.
EINFRIEREN
DER
KLONE
23
2.1.11.
AUFTAUEN
DER
KLONE
24
2.1.12.
SUBTYPENTEST
24
2.1.13.
DOT-BLOT
25
2.1.14.
ANTIGEN-ELISA
26
2.1.15.
INDIREKTE
IMMUNZYTOCHEMIE
27
2.1.16.
IMMUNPRAEZIPITATION
28
2.1.17.
ANTIKOERPERREINIGUNG
AUS
ZELLKULTURUEBERSTAND
29
2.2.
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
31
2.2.1.
KOPPLUNG
31
2.2.2.
IMMUNISIERUNG
DER
HUEHNER
31
2.2.3.ANTIKOERPERREINIGUNG
AUS
EIGELB
32
2.2.4.
WESTERN-BLOT
34
C.
ERGEBNISSE
37
1.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
37
1.1.
KLONAUSBEUTE
37
1.2.
SUBTYP
37
1.3.
ANTIGEN-ELISA
38
1.4.
DOT-BLOT
40
1.5.
IMMUNZYTOCHEMIE
41
1.6.
IMMUNPRAEZIPITATION
44
1.7.
ANTIKOERPERREINIGUNG
AUS
ZELLKULTURUEBERSTAND
45
2.
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
46
2.1.
IMMUNISIERUNG
DER
HUEHNER
46
2.2.
ANTIGEN-ELISA
47
2.3.
DOT-BLOT
47
2.4. WESTERN-BLOT
48
D.
DISKUSSION
50
1.
IMMUNISIERUNGEN
50
2.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
53
2.1.
IMMUNZYTOCHEMIE
53
2.2.
IMMUNPRAEZIPITATION
55
3.
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
55
3.1.
EIGENSCHAFTEN
VON
HUEHNERANTIKOERPEM
55
3.2.
WESTERN-BLOT
56
E.
ZUSAMMENFASSUNG
58
F.
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
59
G.
LITERATURVERZEICHNIS
60
H.
DANKSAGUNG
67 |
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