Optimierung und Normierung einer colorimetrischen Methode (Bromodesoxyuridin (BrdU)-ELISA) zum quantitativen Nachweis von Zellproliferation und deren Hemmung und Apoptose-Nachweis an mononukleären Zellen:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
5
1.1
MODELLSYSTEME
IN
DER
TUMORFORSCHUNG
5
1.2
WIRKMECHANISMUS
VON
PHYTOHAEMAGGLUTININ
5
1.3
METHODEN
ZUR
MESSUNG
DER
ZELLPROLIFERATION
6
1.4
HEMMUNG
DER
ZELLPROLIFERATION
7
1.5
ZELLTOD:
APOPTOSE
VERSUS
NEKROSE
7
1.6
HEMMSTOFFE
8
1.6.1
CAMPTOTHECIN
8
1.6.2
DIMETHYLSULFOXID
9
2
ZIELSETZUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
11
3
TESTPRINZIPIEN
12
3.1
BRDU-TEST
12
3.2
TUNEL-TEST
12
3.3
ACRIDINORANGE-FAERBUNG
13
4
METHODIK
14
4.1
GEWINNUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
14
4.1.1
BLUTENTNAHME
14
4.1.2
ISOLIERUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
(DICHTEGRADIENTEN-ZELLTRENNUNG)
14
4.1.3
EINSTELLEN
DER
ZELLDICHTE
15
4.2
BRDU-PROLIFERATIONS-ASSAY
15
4.2.1
OPTIMIERUNGSVERSUCHE
17
4.2.2
HEMMSTOFFVERSUCHE
17
4.2.2.1
HEMMSTOFFVERSUCH
1
17
4.2.2.2
HEMMSTOFFVERSUCH
2
19
4.2.3
BRDU-ELISA
22
4.3
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
VERFAHREN
24
4.3.1
TUNEL-TEST
24
4.3.2
ACRIDINORANGE-FAERBUNG
27
2
SEITE
4.4
PROBANDENKOLLEKTIV
28
5
ERGEBNISSE
29
5.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
OPTIMIERUNG
DES
BRDU-ELISA
29
5.1.1
INKUBATIONSZEIT
UND
-TEMPERATUR
VON
ANTI-BRDU-POD
30
5.1.2
INKUBATIONSZEIT
VON
BROMODESOXYURIDIN
(BRDU)
34
5.1.3
INKUBATIONSZEIT
VON
PHYTOHAEMAGGLUTININ
(PHA)
36
5.1.4
KONZENTRATION
DER
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
38
5.1.5
KONZENTRATIONS-WIRKUNGS-BEZIEHUNG
VON
PHA
40
5.1.5.1
VORVERSUCHE
ZUR
OPTIMIERUNG
DES
BRDU-ELISA
40
5.1.5.2
GESAMTERGEBNIS
44
5.1.6
LONGITUDINALBEOBACHTUNGEN
46
5.2
UNTERSUCHUNG
DER
PROLIFERATIONSHEMMUNG
PHA-STIMULIERTER
MONONUKLEAERER
ZELLEN
DURCH
CAMPTOTHECIN
UND
DMSO
49
5.2.1
ERGEBNISSE
HEMMSTOFFVERSUCH
1
49
5.2.2
ERGEBNISSE
HEMMSTOFFVERSUCH
2
55
5.3
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
VERFEHLEN
61
5.3.1
TUNEL-TEST
61
5.3.2
ACRIDINORANGE-FAERBUNG
63
6
DISKUSSION
66
6.1
OPTIMIERUNG
DES
BRDU-ELISA
66
6.1.1
INKUBATIONSZEIT
UND
-TEMPERATUR
VON
ANTI-BRDU-POD
66
6.1.2
INKUBATIONSZEIT
VON
BROMODESOXYURIDIN
66
6.1.3
INKUBATIONSZEIT
VON
PHYTOHAEMAGGLUTININ
68
6.1.4
ZELLKONZENTRATION
DER
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
69
6.1.5
KONZENTRATIONS-WIRKUNGS-BEZIEHUNG
VON
PHYTOHAEMAGGLUTININ
71
6.1.6
LONGITUDINALBEOBACHTUNGEN
73
6.2
PROLIFERATIONSHEMMUNG
PHA-STIMULIERTER
MONONUKLEAERER
ZELLEN
DURCH
CAMPTOTHECIN
(CAM)
UND
DIMETHYLSULFOXID
(DMSO)
74
6.2.1
KONZENTRATIONEN
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
CAM
UND
DMSO
74
6.2.2
ZU
ERWARTENDE
HEMMWIRKUNG
VON
CAM
UND
DMSO
75
3
SEITE
6.2.3
UNTERSCHIEDLICHE
ABLAEUFE
DER
HEMMSTOFFVERSUCHE
1
UND
2
75
6.2.4
HEMMSTOFFVERSUCH
1
76
6.2.5
HEMMSTOFIVERSUCH
2
78
6.3
FHIORESZENZMIKROSKOPISCHE
VERFAHREN
80
6.3.1
TUNEL-TEST
81
6.3.2
ACRIDINORANGE-FAERBUNG
82
7
ZUSAMMENFASSUNG
83
8
ABKFIRZNNGSVERZEICHNIS
/
WORTERKLAERUNGEN
85
9
MATERIAL
87
9.1
GERAETE
87
9.2
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
87
9.3
LOESUNGEN
UND
SUBSTANZEN
88
9.4
COMPUTER-SOFTWARE
89
10
LITERATURVERZEICHNIS
90
11
ANHANG
98
11.1
LEBENSLAUF
98
11.2
DANKSAGUNG
100
11.3
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
101 |
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