Isoleucyl-tRNA-Synthetase aus Saccharomyces cerevisiae S228C: neue Modellvorstellung über die enzymatischen Reaktionen der IIeRSy
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ABKUERZUNGEN
EINLEITUNG
SEITE
1
5
II.
PROBLEMSTELLUNG
6
III.
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
7-95
111.1.
EXPRESSION
DES
IRS-GENS
IN
E.COLI
TG1-ZELLEN
7-14
111.1.1.
ERHOEHUNG
DER
EXPRESSIONSRATE
7-14
111.1.1.1.
VERAENDERUNG
DER
RIBOSOMALEN
BINDUNGSSTELLE
-
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
PILS
7-12
III.
1.1.2.
VERBESSERUNG
DER
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
VON
PLLS:TG1-ZELLEN
13-14
111.2.
ERZEUGUNG
VON
PUNKTMUTANTEN
DER
ILERSY
15-25
III.2.1.
AUSWAHL
DER
MUTATIONSORTE
[1-7]
15-18
III.
2.2.
KLONIERUNG
DES
IRS-GENS
IN
PUC1
18
UND
RUECK
KLONIERUNG
IN
DEN
EXPRESSIONSVEKTOR
18-19
III.2.3.
ORTSSPEZIFISCHE
MUTAGENESE
NACH
DER
PHOSPHOROTHIOAT-METHODE
20-25
III.
3.
EXPRESSION
DER
PUNKTMUTANTEN
DER
ILERSY
26-30
111.3.1.
EXPRESSION
DER
PUNKTMUTANTEN
[1-7]
IN
E.COLI
TG1-ZELLEN
26-29
III.
3.2.
EXPRESSION
DER
PUNKTMUTANTEN
[2-6]
IN
E.COLI
CAG
BZW
SG-ZELLEN
30
III.4.
PRAEPARATIVE
ISOLIERUNG
DER
ILERSY
AUS
PILS-.TG-L-ZELLEN
31-39
111.4.1.
ERNTEN
DER
ZELLEN
UND
ZELLAUFSCHLUSS
31
III.4.2.
DEAE-52-CELLULOSE-CHROMATOGRAPHIE
32
111.4.3.
HYDROXYLAPATIT-CHROMATOGRAPHIE
32-34
III.4.4.
FPL-CHROMATOGRAPHIE
35-36
111.4.5.
VERGLEICH
DER
ISOLIERUNG
DER
ILERSY
AUS
VERSCHIEDENEN
QUELLEN
37-39
111.5.
PRAEPARATIVE
ISOLIERUNG
DER
PUNKTMUTANTE
[1]
HERS(83
GLY ALA)
AUS
PLLS1:TG1-ZELLEN
39-40
III.
6.
ENZYMATISCHE
REAKTIONEN
DER
LLERSY
UND
DER
PUNKTMUTANTE
[1]
HERS(83
GLY-ALA)
41-95
111.6.1.
ALLGEMEINE
ANMERKUNG
ZUM
REAKTIONS
VERHALTEN
DER
LLERS
Y
41
III.6.2.
OPTIMIERTE
BEDINGUNGEN
FUER
DIE
AMINO
ACYLIERUNG
DER
TRNA
L,E
41-45
III.
6.3.
BESTIMMUNG
DER
KINETISCHEN
PARAMETER
K
M
UND
K
CAT
46-49
III.6.4.
DIE
AKTIVEN
ZENTREN
DER
HERS
Y
FUER
DIE
BILDUNG
UND
HYDROLYSE
DES
AMINOACYLADENYLATES
UND
DIE
AMINOACYLIERUNG
UND
DEACYLIERUNG
DER
TRNA
L,E
49-70
111.6.4.1.
BEGRUENDUNG
DER
WEITEREN
VORGEHENSWEISE
49-50
III.
6.4.2.
ISOLEUCYHERUNG,
FEHLAMINOACYLIERUNG
UND
DEACYLIERUNG
DER
TRNA
LLE
-CCA
DURCH
LLERS
Y
51-52
III.
6.4.3.
ISOLEUCYHERUNG,
FEHLAMINOACYLIERUNG
UND
DEACYLIERUNG
DER
TRNA
L,E
-CC3'DA
DURCH
LLERS
Y
52-55
III.6.4.4.
ISOLEUCYLIERUNG,
FEHLAMINOACYLIERUNG
UND
DEACYLIERUNG
DER
TRNA
LLE
-CCA
DURCH
LLERS(83
GLY-ALA)
55-66
III.6.4.5.
ISOLEUCYLIERUNG,
FEHLAMINOACYLIERUNG
UND
DEACYLIERUNG
DER
TRNA
LLE
-CC3'DA
DURCH
LLERS(83
GLY- ALA)
57
III.
6.4.6.
DAS
AKTIVE
ZENTRUM
DER
LLERS
Y
FUER
DIE
AMINOACYLIERUNG
UND
DEACYLIERUNG
DER
TRNA
LLE
58-66
III.6.4.7.
DAS
AKTIVE
ZENTRUM
DER
LLERS
Y
FUER
DIE
BILDUNG
UND
HYDROLYSE
DES
AMINOACYLADENYLATES
67-70
III.6.5.
AMP
UND
DIADENOSINPOLYPHOSPHAT-BILDUNGEN
DURCH
ILERS
71-86
111.6.5.1.
TRENNMETHODE
71-73
III.6.5.2.
ALLGEMEINE
ANMERKUNGEN
ZUR
SYNTHESE
VON
DIADENOSIN
POLYPHOSPHATEN
74-76
III.
6.5.3.
BILDUNG
VON
AMP
UND
DIADENOSINPOLYPHOSPHATEN
UNTER
ISOLEUCYLIERUNGSBEDTNGUNGEN
DER
TRNA
LLE
-CCA
DURCH
LLERSYY
UND
LLERS
C
Y
C
77-83
III.
6.5.4.
BILDUNG
VON
AMP
UND
DIADENOSINPOLYPHOSPHATEN
UNTER
ISOLEUCYLIERUNGSBEDINGUNGEN
DER
TRNA
LLE
-CC3'DA
DURCH
LLERS
Y
84-86
11.6.6.
NEUE
MODELLVORSTELLUNG
UEBER
DIE
ENZYMATISCHEN
REAKTIONEN
DER
HERS
Y
87
95
111.6.6.1.
AMINOACYLIERUNGSREAKTION
88
89
III.
6.6.2.
HYDROLYTISCHER
PRE
UND
POSTTRANSFER-KORREKTUR-,
MECHANISMUS
OHNE
ZUSAETZLICHEN
ATP-VERBRAUCH
89
91
III.
6.6.3.
SYNTHESE
VON
DIADENOSINPOLYPHOSPHATEN
92
94
III.
6.6.4.
SYNTHESE
VON
ISOLEUCYLESTERN
DES
ATP
94
95
IV.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
96
97
V.
MATERIAL
UND
METHODEN
98-126
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
127-134
VII.
ANHANG
135-146 |
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