Geno- und phänotypische Charakterisierung des CD4/DR3-Mausstammes: ein partiell humanisierter Inzuchtstamm mit den humanen Molekülen CD4 und HLA-DR3(DRw17) in einem murin-cd4-defizienten genetischen Hintergrund
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
BIBLIOGRAPHIE I
INHALTSVERZEICHNIS II
VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN
V
1. EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNG 1
1.1 SELBSTTOLERANZ - WESENTLICHES CHARAKTERISTIKUM DES IMMUNSYSTEMS 1
1.2 MOLEKUELE DES HAUPTHISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEXES DER KLASSE II
(MHC-II) 2
1.3 DAS CD4-MOLEKUEL 4
1.4 DIE CD4-INTERAKTIONEN INNERHALB EINES MULTIMOLEKUELKOMPLEXES 6
1.5 DER CD4-KOREZEPTOR WAEHREND ENTWICKLUNG UND FUNKTION CD4
+-T-ZELLEN 8
1.6 GRUNDLAGEN FUER DAS CD4/DR3-MAUSMODELL 11
1.7 ZIELSTELLUNG DER VORLIEGENDEN ARBEIT 13
2. MATERIAL UND METHODEN 14
2.1 MATERIALIEN 14
2.1.1 PRIMER 14
2.1.2 ANTIKOERPER 14
2.1.3 CHEMIKALIEN/REAGENZIEN 15
2.1.4 PUFFER/MEDIEN 16
2.1.5V ERBRAUCHSMATERIALIEN 17
2.1.6 GERAETE 18
2.2 VERSUCHSTIERE UND DEREN HALTUNG 19
2.2.1 TRANSGENE AUSGANGSTAEMME UND CD4/DR3-MAEUSE 19
2.2.2 KONTROLLTIERE 19
2.3 METHODEN 19
2.3.1 GEWINNUNG VON SOLIDEN ORGANEN UND VOLLBLUT 19
2.3.2 GENOTYPISCHE ANALYSEN 20
2.3.2.1 DNA-ISOLIERUNG 20
2.3.2.2 PRIMERSELEKTION UND -HERSTELLUNG 21
2.3.2.3 POLYMERASEKETTENREAKTIONEN 21
2.3.2.4 ANALYSE UND DOKUMENTATION DER PCR-ERGEBNISSE 22
2.3.3 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSEN 23
H
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2.3.3.1 HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN 23
2.3.3.2 FAERBEPROTOKOLLE 23
2.3.3.3 ANALYSE UND DOKUMENTATION DURCHFLUSSZYTOMETRISCHER FAERBUNGEN 24
2.3.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSEN 25
2.3.4.1 HERSTELLUNG VON GEFRIERSCHNITTEN 25
2.3.4.2 FAERBEPROTOKOLLE 25
2.3.4.3 DARSTELLUNG UND DOKUMENTATION IMMUNHISTOCHEMISCHER FAERBUNGEN 26
2.3.5 STATISTISCHE ANALYSE 26
3. ERGEBNISSE 27
3.1 GENOTYPISCHE ANALYSEN UND ZUCHTBEGLEITENDES MONITORING 27
3.1.1 ETABLIERUNG UND OPTIMIERUNG VON PCR-ANALYSEN 27
3.1.2 SEQUENZIERUNG AUSGEWAEHLTER AMPLIFIKATE 30
3.1.3 NACHWEIS DES
HLA-DR3(DRWI7) IM CD4/DR3-MAUSGENOM 31
3.1.4 NACHWEIS DES
HU-CD4 IM CD4/DR3-MAUSGENOM 32
3.1.5 INAKTIVIERUNG DES
MU-CD4 IM CD4/DR3-MAUSGENOM 33
3.1.6 IDENTIFIZIERUNG VON SEGREGANTEN 35
3.2 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSEN ZUR BEURTEILUNG DER
TRANSGENEXPRESSION 40
3.2.1 EXPRESSION DES HU-CD4 IN LYMPHATISCHEN ORGANEN UND VOLLBLUT 40
3.2.1.1 T-ZELL-SUBPOPULATIONEN IM THYMUS 40
3.2.1.2 T-ZELL-SUBPOPULATIONEN IN MILZ UND LYMPHKNOTEN 43
3.2.1.3 T-ZELL-SUBPOPULATIONEN IM VOLLBLUT 46
3.2.1.4 EXPRESSION DES HU-CD4 AUF MONOZYTEN 48
3.2.1.5 EXPRESSIONSSTAERKE DES TRANSGENEN HU-CD4 49
3.2.2 EXPRESSION DES HLA-DR3(DRWL7) IN LYMPHATISCHEN ORGANEN UND
VOLLBLUT 50
3.2.2.1 KOEXPRESSION DER A- UND SS-KETTE DES
HLA-DR3(DRWL7)-HETERODIMERS 50
3.2.2.2 EXPRESSION DES HLA-DR3(DRWL7) IM THYMUS 52
3.2.2.3 EXPRESSION DES HLA-DR3(DRWL7) IN MILZ UND LYMPHKNOTEN 53
3.2.2.4 EXPRESSION DES HLA-DR3(DRWL7) IM VOLLBLUT 56
3.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSEN TRANSGENER EXPRESSIONSMUSTER 58
3.3.1 EXPRESSIONSMUSTER DES HU-CD4 IN DER MILZ 58
3.3.2 EXPRESSIONSMUSTER FUER HLA-DR3(DRW 17) IM THYMUS 61
III
_INHALTSVERZEICHNIS_
4. DISKUSSION 64
4.1 DISKUSSION SPEZIFISCHER METHODENPROBLEME UND FEHLERQUELLEN 64
4.2 ZUCHTBEGLEITENDES SCREENING MIT DEN GENOTYPISCHEN PCR-ANALYSEN IM
VERGLEICH
ZU PHAENOTYPISCHEN DURCHFLUSSZYTOMETRIEN 66
4.3 SPEZIFISCHE EXPRESSION DES HU-CD4-TRANSGENS AUF THYMOZYTEN, REIFEN
CD4
+-T-
UND EXTRALYMPHATISCHEN ZELLEN 67
4.4 DAS HU-CD4-TRANSGEN ALS ADHAESIONS- UND SIGNALMOLEKUEL 69
4.5 EXPRESSION DES HLA-DR3(DRWL7)-HETERODIMERS IM MURINEN
H-2-HINTERGRUND 71
4.6 DIE VERTEILUNG DES HLA-DR3(DRWL 7) IN CD4/DR3-MAEUSEN 73
4.7 STELLENWERT DES CD4/DR3-MAUSSTAMMES INNERHALB ETABLIERTER PARTIELL
HUMANISIERTER MAUSMODELLE 74
5. ZUSAMMENFASSUNG 78
6. ANHANG
VIII
LITERATURVERZEICHNIS
XVII
DANKSAGUNG
XXXI
EIGENSTAENDIGKEITSERKLAERUNG
XXXII
LEBENSLAUF
XXXIII
PUBLIKATIONSLISTE
XXXV
IV |
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