Die Rolle von Interferon-regulatory factor 4 in prä-B-Zell-Lymphomen der Maus:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Marburg
[2020]
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | VI-XV, 134 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGS-,
ABBILDUNGS-
UND
TABELLENVERZEICHNIS
.................
VI
A
BKUERZUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................................................
VI
BENENNUNG
DER
IRF4-MUTATIONEN
..............................................................................................................
IX
A
BBILDUNGSVERZEICHNIS
.......................................................................................................................................
X
T
ABELLENVERZEICHNIS
..........................................................................................................................................
XI
ZUSAMMENFASSUNG
........................................................................................
XII
SUMMARY
............................................................................................................
XIV
1
EINLEITUNG
....................................................................................................
1
1.1
D
AS
Z
USAMMENSPIEL
VON
K
REBS
UND
I
MMUNSYSTEM
...................................................................................
1
1.2
E
INFUEHRUNG
IN
DAS
I
MMUNSYSTEM
............................................................................................................
2
1.2.1
T-ZELLEN
ODER
DIE
*ZELLULAERE
ABWEHR
....................................................................................
5
1.2.2
B-LYMPHOZYTEN
ODER
DIE
HUMORALE
ABWEHR
.........................................................................
6
1.2.2.1
DIE
FRUEHE
B-ZELL-ENTWICKLUNG
..........................................................................................................
7
1.2.2.2
DIE
SPAETE
B-ZELLENTWICKLUNG
...........................................................................................................
10
1.3
T
RANSKRIPTIONSFAKTOREN
........................................................................................................................
14
1.4
D
IE
IRF-F
AMILIE
.......................................................................................................................................
14
1.5
D
ER
T
RANSKRIPTIONSFAKTOR
IRF4
............................................................................................................
18
1.5.1
DIE
STRUKTUR
VON
IRF4
...........................................................................................................19
1.5.2
DIE
ROLLE
VON
IRF4
IN
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.......................................................................
20
1.6
IRF4
IN
DER
O
NKOGENESE
.........................................................................................................................
23
1.7
A
LTE
I
RF
4
/
M
AEUSE
ENTWICKELN
PRAE
-B-Z
ELL
-L
YMPHOME
...........................................................................
29
1.8
T
HEMA
DIESER
D
ISSERTATION
.....................................................................................................................
30
2
MATERIAL
......................................................................................................
31
2.1
G
ERAETE
UND
L
ABORZUBEHOER
.....................................................................................................................
31
2.2
M
AEUSE
....................................................................................................................................................
32
2.3
Z
ELLLINIEN
...............................................................................................................................................
33
2.4
C
HEMIKALIEN
...........................................................................................................................................
33
2.5
P
LASMIDE
................................................................................................................................................
35
2.6
B
AKTERIENKLONIERUNGSSTAMM
.................................................................................................................
37
2.7
P
RIMER
....................................................................................................................................................
37
2.7.1
...ZUR
SEQUENZIERUNG
............................................................................................................
37
2.7.2
...ZUR
GENERIERUNG
DER
MUTATION
.........................................................................................
37
2.8
K
ITS
.........................................................................................................................................................
38
2.9
I
NHIBITOREN
............................................................................................................................................
38
2.10
Z
YTOKINE
............................................................................................................................................
39
2.11
R
EAGENZIEN
FUER
D
URCHFLUSSZYTOMETRIE
UND
Z
ELLISOLIERUNG
.............................................................
39
2.11.1
FARBSTOFF-KONJUGIERTE
PROTEINE
FUER
DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..........................................
39
2.11.2
ZELL
ISOLIERUNG
.........................................................................................................................
39
2.12
M
EDIEN
UND
P
UFFER
...........................................................................................................................
40
2.13
S
OFTWARE
..........................................................................................................................................
42
3
METHODEN
....................................................................................................
43
3.1
Z
ELLBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
....................................................................................................................
43
3.1.1
ZELLKULTUR
................................................................................................................................
43
3.1.2
ZELLZAEHLUNG
NACH
NEUBAUER
.................................................................................................
43
3.1.3
ZELLAUFREINIGUNG
....................................................................................................................
44
3.1.3.1
DICHTE-GRADIENT
..............................................................................................................................
44
3.1.3.2
ISOLIERUNG
MURINER
B-
LYMPHOZYTEN
..............................................................................................
44
3.1.3.3
ISOLIERUNG
MURINER
PRAE-B-LYMPHOZYTEN
........................................................................................
46
3.1.3.4
STIMULIERUNG
VON
B-LYMPHOZYTEN
MIT
LPS
UND
IL-4
.....................................................................
46
3.1.4
TESTUNG
VON
TUMOR-SIGNALWEGEN
ANHAND
VON
INHIBITOREN
...............................................
46
3.2
M
IKROBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
...............................................................................................................
47
3.2.1
HITZE-SCHOCK-TRANSFORMATION
...............................................................................................
47
3.2.2
HERSTELLUNG
EINER
BAKTERIENFLUESSIGKULTUR
............................................................................
47
3.2.3
PLASMIDAUFREINIGUNG
MITTELS
NUCLEOSPIN
PLASMID
MINI-PRAEPARATION
...............................
48
3.2.4
PLASMIDAUFREINIGUNG
MITTELS
NUCLEOBOND
XTRA
MAXI-PRAEPARATION
...................................
48
3.2.5
HERSTELLUNG
RETROVIRALER
UEBERSTAENDE
MITTELS
CALCIUMPHOPHAT-TRANSFEKTION
..................
48
3.2.5.1
ALLGEMEINES
.....................................................................................................................................48
3.2.5.2
DURCHFUEHRUNG
.................................................................................................................................
49
3.2.6
RETROVIRALE
SPINTRANSDUKTION
VON
ZELLEN
.............................................................................
50
3.2.6.1
...DER
B-LYMPHOZYTEN
.....................................................................................................................
50
3.2.6.2
...DER
LYMPHOMZELLLINIEN
...............................................................................................................
51
3.3
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.......................................................................................................
51
3.3.1
GENERIERUNG
VON
MUTATIONEN
MITTELS
QUIKCHANGELIGHTENINGKIT
......................................
51
3.3.2
RNA-SEQUENZIERUNG
.............................................................................................................
53
3.3.3
ANALYSE
DER
COPY-NUMBER-VARIATION-SEQUENZIERUNG
........................................................
55
3.3.4
KONTROLL-SEQUENZIERUNG
NACH
HERSTELLUNG
DER
MUTATIONEN
..............................................
56
3.4
I
MMUNFLUORESZENZ
................................................................................................................................
57
3.4.1
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
............................................................................................................
57
3.4.1.1
ANFAERBUNG
VON
ZELLEN
....................................................................................................................
59
3.4.1.2
ZELLSORTIERUNG
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..............................................................................
61
3.5
S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
.....................................................................................................................61
4
ERGEBNISSE
.................................................................................................63
4.1
A
NALYSE
DER
M
ALIGNITAET
DER
L
YMPHOME
DURCH
C
OPY
-N
UMBER
-V
ARIATION
-S
EQVENZ
ERUNG
......................
63
4.2
L
YMPHOMZELLEN
STERBEN
DURCH
IRF4-UE
BEREXPRESSION
...........................................................................
64
4.2.1
UEBERPRUEFUNG
DER
IRF4
EXPRESSION
DURCH
INTRAZELLULAERE
FAERBUNG
......................................65
4.2.2
ZELLSTERBEN
DURCH
IRF4-UEBEREXPRESSION
...............................................................................68
4.2.3
ETABLIERUNG
DES
PROTOKOLLS
FUER
DIE
TRANSDUKTION
DER
ZELLLINIE
TU
....................................
70
4.3
E
INFLUSS
VON
IRF4-M
UTATIONEN
AUF
DIE
L
YMPHOMZELLEN
.......................................................................71
4.4
E
INFLUSS
DER
IRF4-M
UTATIONEN
AUF
DIE
B-Z
ELL
-E
NTWICKLUNG
.................................................................76
4.5
A
NALYSE
DER
T
UMORGENETIK
DURCH
RNA-S
EQUENZIERUNG
.......................................................................
80
4.6
A
NALYSE
DER
TUMORASSOZIIERTEN
S
IGNALWEGE
DURCH
I
NHIBITOREN
...........................................................
87
5
DISKUSSION
..................................................................................................
91
6
LITERATURVERZEICHNIS
.........................................................................
109
7
PUBLIKATIONEN
.........................................................................................132
8
VERZEICHNIS
DER
AKADEMISCHEN
LEHRER
....................................
133
9
DANKSAGUNG
............................................................................................
134
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGS-,
ABBILDUNGS-
UND
TABELLENVERZEICHNIS
.
VI
A
BKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VI
BENENNUNG
DER
IRF4-MUTATIONEN
.
IX
A
BBILDUNGSVERZEICHNIS
.
X
T
ABELLENVERZEICHNIS
.
XI
ZUSAMMENFASSUNG
.
XII
SUMMARY
.
XIV
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
D
AS
Z
USAMMENSPIEL
VON
K
REBS
UND
I
MMUNSYSTEM
.
1
1.2
E
INFUEHRUNG
IN
DAS
I
MMUNSYSTEM
.
2
1.2.1
T-ZELLEN
ODER
DIE
*ZELLULAERE"
ABWEHR
.
5
1.2.2
B-LYMPHOZYTEN
ODER
DIE
HUMORALE
ABWEHR
.
6
1.2.2.1
DIE
FRUEHE
B-ZELL-ENTWICKLUNG
.
7
1.2.2.2
DIE
SPAETE
B-ZELLENTWICKLUNG
.
10
1.3
T
RANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
14
1.4
D
IE
IRF-F
AMILIE
.
14
1.5
D
ER
T
RANSKRIPTIONSFAKTOR
IRF4
.
18
1.5.1
DIE
STRUKTUR
VON
IRF4
.19
1.5.2
DIE
ROLLE
VON
IRF4
IN
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.
20
1.6
IRF4
IN
DER
O
NKOGENESE
.
23
1.7
A
LTE
I
RF
4
/
'
M
AEUSE
ENTWICKELN
PRAE
-B-Z
ELL
-L
YMPHOME
.
29
1.8
T
HEMA
DIESER
D
ISSERTATION
.
30
2
MATERIAL
.
31
2.1
G
ERAETE
UND
L
ABORZUBEHOER
.
31
2.2
M
AEUSE
.
32
2.3
Z
ELLLINIEN
.
33
2.4
C
HEMIKALIEN
.
33
2.5
P
LASMIDE
.
35
2.6
B
AKTERIENKLONIERUNGSSTAMM
.
37
2.7
P
RIMER
.
37
2.7.1
.ZUR
SEQUENZIERUNG
.
37
2.7.2
.ZUR
GENERIERUNG
DER
MUTATION
.
37
2.8
K
ITS
.
38
2.9
I
NHIBITOREN
.
38
2.10
Z
YTOKINE
.
39
2.11
R
EAGENZIEN
FUER
D
URCHFLUSSZYTOMETRIE
UND
Z
ELLISOLIERUNG
.
39
2.11.1
FARBSTOFF-KONJUGIERTE
PROTEINE
FUER
DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
39
2.11.2
ZELL
ISOLIERUNG
.
39
2.12
M
EDIEN
UND
P
UFFER
.
40
2.13
S
OFTWARE
.
42
3
METHODEN
.
43
3.1
Z
ELLBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
43
3.1.1
ZELLKULTUR
.
43
3.1.2
ZELLZAEHLUNG
NACH
NEUBAUER
.
43
3.1.3
ZELLAUFREINIGUNG
.
44
3.1.3.1
DICHTE-GRADIENT
.
44
3.1.3.2
ISOLIERUNG
MURINER
B-
LYMPHOZYTEN
.
44
3.1.3.3
ISOLIERUNG
MURINER
PRAE-B-LYMPHOZYTEN
.
46
3.1.3.4
STIMULIERUNG
VON
B-LYMPHOZYTEN
MIT
LPS
UND
IL-4
.
46
3.1.4
TESTUNG
VON
TUMOR-SIGNALWEGEN
ANHAND
VON
INHIBITOREN
.
46
3.2
M
IKROBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
47
3.2.1
HITZE-SCHOCK-TRANSFORMATION
.
47
3.2.2
HERSTELLUNG
EINER
BAKTERIENFLUESSIGKULTUR
.
47
3.2.3
PLASMIDAUFREINIGUNG
MITTELS
NUCLEOSPIN
PLASMID
MINI-PRAEPARATION
.
48
3.2.4
PLASMIDAUFREINIGUNG
MITTELS
NUCLEOBOND
XTRA
MAXI-PRAEPARATION
.
48
3.2.5
HERSTELLUNG
RETROVIRALER
UEBERSTAENDE
MITTELS
CALCIUMPHOPHAT-TRANSFEKTION
.
48
3.2.5.1
ALLGEMEINES
.48
3.2.5.2
DURCHFUEHRUNG
.
49
3.2.6
RETROVIRALE
SPINTRANSDUKTION
VON
ZELLEN
.
50
3.2.6.1
.DER
B-LYMPHOZYTEN
.
50
3.2.6.2
.DER
LYMPHOMZELLLINIEN
.
51
3.3
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
51
3.3.1
GENERIERUNG
VON
MUTATIONEN
MITTELS
QUIKCHANGELIGHTENINGKIT
.
51
3.3.2
RNA-SEQUENZIERUNG
.
53
3.3.3
ANALYSE
DER
COPY-NUMBER-VARIATION-SEQUENZIERUNG
.
55
3.3.4
KONTROLL-SEQUENZIERUNG
NACH
HERSTELLUNG
DER
MUTATIONEN
.
56
3.4
I
MMUNFLUORESZENZ
.
57
3.4.1
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
57
3.4.1.1
ANFAERBUNG
VON
ZELLEN
.
59
3.4.1.2
ZELLSORTIERUNG
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
61
3.5
S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
.61
4
ERGEBNISSE
.63
4.1
A
NALYSE
DER
M
ALIGNITAET
DER
L
YMPHOME
DURCH
C
OPY
-N
UMBER
-V
ARIATION
-S
EQVENZ
\
ERUNG
.
63
4.2
L
YMPHOMZELLEN
STERBEN
DURCH
IRF4-UE
BEREXPRESSION
.
64
4.2.1
UEBERPRUEFUNG
DER
IRF4
EXPRESSION
DURCH
INTRAZELLULAERE
FAERBUNG
.65
4.2.2
ZELLSTERBEN
DURCH
IRF4-UEBEREXPRESSION
.68
4.2.3
ETABLIERUNG
DES
PROTOKOLLS
FUER
DIE
TRANSDUKTION
DER
ZELLLINIE
TU
.
70
4.3
E
INFLUSS
VON
IRF4-M
UTATIONEN
AUF
DIE
L
YMPHOMZELLEN
.71
4.4
E
INFLUSS
DER
IRF4-M
UTATIONEN
AUF
DIE
B-Z
ELL
-E
NTWICKLUNG
.76
4.5
A
NALYSE
DER
T
UMORGENETIK
DURCH
RNA-S
EQUENZIERUNG
.
80
4.6
A
NALYSE
DER
TUMORASSOZIIERTEN
S
IGNALWEGE
DURCH
I
NHIBITOREN
.
87
5
DISKUSSION
.
91
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
109
7
PUBLIKATIONEN
.132
8
VERZEICHNIS
DER
AKADEMISCHEN
LEHRER
.
133
9
DANKSAGUNG
.
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