Validierung molekular-zytogenetischer Techniken für den Nachweis chromosomaler Veränderungen bei akut lymphatischer Leukämie (ALL):
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| Format: | Buch |
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1997
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| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1998 (Nicht für den Austausch) |
| Beschreibung: | 139 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERUNGEN. 1
NOMENKLATUR. 2
DANKSAGUNG. 3
1. EINLEITUNG. 4
1.1 EINFUEHRUNG IN DIE TUMORGENETIK. 4
1.2 PROTO-ONKOGENE UND TUMORSUPRESSORGENE. 5
1.2.1 PROTO-ONKOGENE. 5
1.2.2 TUMORSUPRESSORGENE. 6
DAS RETINOBLASTOMGEN. 6
DAS PI6-GEN
. 7
DAS P53-GEN. 8
1.2.3 SCHRITTWEISE ENTSTEHUNG UND PROGRESSION VON TUMOREN AM BEISPIEL
DES
KOLON-KARZINOMS. 9
1.3 ENSTEHUNG VON LEUKAEMIEN. 11
1.3.1 STRUKTURE ILE VERAENDERUNGEN IN AKUTEN LYMPHATISCHEN LEUKAEMIEN. 13
1.3.1.1 TRANSLOKATIONEN UND DELETIONEN BEI ALL. 13
1.3.1.2 DIE T(9;22)-TRANSLOKATION. 13
1.3.1.3 DIE T(L;19)-TRANSLOKATION. 14
1.3.2 NUMERISCHE CHROMOSOMALE VERAENDERUNGEN IN AKUTEN LYMPHATISCHEN
LEUKAEMIEN. 15
1.3.2.1 EINTEILUNG DER ALL NACH NUMERISCHEN VERAENDERUNGEN. 15
1.4 ANALYSEVERFAHREN ZUR DETEKTION VON CHROMOSOMALEN ABERRATIONEN. 16
1.4.1 DIE CHROMOSOMENBAENDERUNG. 16
1.4.2 DIE FLUORESZENZ-IN SITU HYBRIDISIERUNG. 17
1.4.3 DIE INTERPHASE-ZYTOGENETIK. 18
1.4.4 DIE VIELFARBENHYBRIDISIERUNG. 19
1.4.5 DIE VERGLEICHENDE GENOMISCHE HYBRIDISIERUNG (CGH). 20
1.5 ZIELE DIESER ARBEIT. 23
1.5.1 DIE INTERPHASE-ZYTOGENETIK. 23
1.5.2 DIE CGH. 24
2. MATERIAL UND METHODEN. 26
2.1 MATERIAL. 26
2.1.1 DNA-SONDEN. 26
2.1.2 TUMORMATERIAL UND ZELLINIEN. 27
2.1.3 REPORTERMOLEKUELE. 29
2.1.4 NUKLEOTIDE. 29
2.1.5 FLUOROCHROME UND ANTIKOERPER. 29
2.1.6 ENZYME. 30
2.1.7 DNA. 30
2.1.8 COMPUTER-UND KAMERASYSTEME. 30
2.1.9 FILTER. 30
2.1.10 CHEMIKALIEN. 31
2.2 METHODEN. 33
2.2.1 CHROMOSOMENSPREITUNGEN. 33
CHROMOSOMENSPREITUNGEN AUS PERIPHEREM BLUT. 33
CHROMOSOMENSPREITUNGEN AUS FIXIERTEM TUMORMATERIAL. 33
CHROMOSOMENSPREITUNGEN AUS DER LEUKAEMIEZELLINIE 697. 33
2.2.2 PRAEPARATION VON PLASMID UND COSMID DNA AUS BAKTERIEN. 34
2.2.3 PRAEPARATION DER GENOMISCHEN KONTROLL-DNA FUER DIE CGH. 34
PHENOLEXTRAKTION. 35
MESSUNG DER DNA-KONZENTRATION. 35
2.2.4 YAC-PRAEPARATION. 35
BESTIMMUNG DER ZELLDICHTE. 35
AUFARBEITUNG DER YAC-AGAROSEBLOECKCHEN. 36
PULSFELD-GELELEKROPHORESE. 36
DOP-PCR. 37
38
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2.2.5 NICK-TRANSLATION.
ABTRENNUNG VON NUKLEOTIDEN UEBER EINE SEPHADEXSAEULE.
GELELEKTROPHORESE.
2.2.6 NICHT-RADIOAKTIVE FLUORESZENZ IN SITU HYBRIDISIERUNG (FISH).
AMPLIFIKATION VON FLUORESZENZSIGNALEN.
2.2.7 ZUSAMMENSTELLUNG DER DNA- SONDEN.
SONDENZUSAMMENSTELLUNG FLIR DIE CDKN2 (PLOE)-STUDIE.
SONDENZUSAMMENSTELLUNG ZUM NACHWEIS DER TRANSLOKATION T(L;19).
2.2.8 DIE VIELFARBEN-HYBRIDISIERUNG.
A) DIE KOMBINATORISCHE TECHNIK.
B) DIE MISCHUNGSVERHAELTNIS-TECHNIK.
2.2.9 BERECHNUNG DER SCHWELLWERTE ("CUT-OFF LEVEL").
2.2.10 DIE FLUORESZENSMIKROSKOPIE.
DIREKTAUFNAHMEN.
BILDANALYSE UND FEHLFARBENZUTEILUNG.
2.2.11 AUSWERTUNG DER INTERPHASE-SIGNALE.
2.2.12 DIE CGH ("COMPARATIVE GENOMIC HYBRIDIZATION").
2.2.13 DIGITALE BILDANALYSE UND AUSWERTUNGSPROGRAMME FUER DIE CGH.
A) CGH-HD (CGH-HEIDELBERG).
B) APPLIED IMAGING (AI).
3. ERGEBNISSE UND INTERPRETATION.
DIE INTERPHASE-ZYTOGENETIK BEI ALL.
3.1 NACHWEIS STRUKTURELLER VERAENDERUNGEN IM INTERPHASE-ZELLKEM.
3.1.1 INTERPHASE-STUDIE DES CDKN2 (P 16)-GENS AUF CHROMOSOM 9P21 IN 30
AL L-.
FAELLEN.
3.1.2 ERSTELLUNG EINES DNA-SONDENSATZES, DER DIE BRUCHPUNKTREGION DER .
TRANSLOKATION T(L;19)(Q23 ;P 13) AUF CHROMOSOM 19PL 3 UEBERSPANNT.
3.2 DIE VIELFARBENHYBRIDISIERUNG.
3.2.1 QUANTITATIVE AUSWERTUNG DER INTERPHASE-ZYTOGENETIK VON 40
ALL-FAELLEN.
3.2.2 VERGLEICH DER ERGEBNISSE AUS DER INTERPHASE-ZYTOGENETIK- STUDIE
MIT DEM
KARYOTYP.
3.2.3 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE DER BAENDERUNGSANALYSE UND DER
INTERPHASE-ZYTOGENETIK.
3.3 DIE VERGLEICHENDE GENOMISCHE HYBRIDISIERUNG (CGH).
3.3.1 EINE CGH-AUSWERTUNG VON 16 ALL-FAELLEN.
3.3.2 ANALYSE DER CGH.
3.3.3 ERGEBNISSE DER CGH-HD AUSWERTUNG.
3.3.4 VERGLEICH DER CHROMOSOMALEN ABERRATIONEN MITTELS BAENDERUNGSANALYSE
UND
CGH.
3.3.5 UEBEREINSTIMMUNG DER CGH-HD ERGEBNISSE MIT DEN DATEN DER
BAENDERUNGSANALYSE.
3.3.6 CGH-AUSWERTUNG AM APPLIED IMAGING/CYTOVISION SYSTEM.
3.3.7 ZUSAMMENFASSSUNG DER ERGEBNISSE IM VERGLEICH DER BEIDEN
ANGEWENDETEN
CGH-AUSWERTUNGSPROGRAMME AI UND CGH-HD.
4. DISKUSSION.
4.1 DIE INTERPHASE-ZYTOGENETIK.
4.1.1 CDKN2 (P 16)-DEIETIONSSTUDIE IN INTERPHASEKEMEN VON 30 ALL-FAELLEN.
4.1.2 DETEKTION DER BRUCHPUNKTREGION T(L;19)(Q23;PL3) IN EINER
LEUKAEMIEZELLINIE
MIT EINEM COSMIDSONDENSATZ.
4.1.3 DIEVIELFARBEN- IN SITU HYBRIDISIERUNG.
4.1.4 EINE INTERPHASE-ZYTOGENETIK STUDIE AN 40 ALL-FAELLEN MIT EINEM
AUSGEWAEHLTEN
DNA-SONDENSATZ.
4.2 VERGLEICH DER CHROMOSOMALEN VERAENDERUNGEN, DIE DURCH DIE BAENDERUNGS
ANALYSE DIAGNOSTIZIERT WURDEN UND DEN ERGEBNISSEN DER INTERPHASE-FISH.
4.3 DIE VERGLEICHENDE GENOMISCHE HYBRIDISIERUNG (CGH).
4.3.1 DISKUSSION DER ERGEBNISSE DER CGH-ANALYSEN MIT DER ZUR VERFUEGUNG
STEHENDEN COMPUTERSOFTWARE.
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INHALTSVERZEICHNIS
4.4 ZUKUNFTSPERSPEKTIVEN. 123
5. ZUSAMMENFASSUNG. 125
6. LITERATURVERZEICHNIS. 126
7. ANHANG. 138 |
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