Verfügbarkeit: Tumorbiologische Aspekte des zellulären Proteins p53

Tumorbiologische Aspekte des zellulären Proteins p53:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Maacke, Heiko (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1995
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adam_text	EINLEITUNG . 7 PROBLEMSTELLUNG . 11 MATERIAL UND METHODEN . 15 1. CHEMIKALIEN, RADIOCHEMIKALIEN UND BIOCHEMIKALIEN . 15 2. PUFFER UND LOESUNGEN . 15 3. ZELLINIEN UND ZELLKULTUR . 19 4. ARRETIERUNG DER ZELLEN . 20 4.1. HERSTELLUNG VON DIALYSIERTEM FCS. 20 5. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON ZELLEN . 20 5.1. PROTEIN-MARKIERUNG MIT 35S-METHIONIN . 20 5.2 DNA MARKIERUNG MIT 3H-THYMIDIN . 21 6. NACHWEIS UND QUANTIFIZIERUNG VON PROTEINEN . 21 6.1. INDIREKTE IMMUNPRAEZIPITATION MIT PROTEIN A SEPHAROSE . 21 6.2. SDS-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE (SDS PAGE) . 21 6.3. COOMASSIE BLAU FAERBUNG NACH SDS-PAGE . 22 6.4. NACHWEIS VON PROTEINEN DURCH WESTEM-BLOT . 22 6.5. NACHWEIS RADIOAKTIV MARKIERTER PROTEINE DURCH FLUOROGRAPHIE . 23 6.6. QUANTIFIZIERUNG VON PROTEINEN DURCH DENSITOMETRIE . 23 6.7. PROTEINMENGEN BESTIMMUNG NACH LOWRY . 23 6.8. NACHWEIS VON PROTEINEN DURCH IMMUNFLUORESZENZ . 24 6.9 VERWENDETE ANTIKOERPER . 24 7. BESTIMMUNG DER ZELLULAEREN DNA UND PROTEINSYNTHESERATE . 25 8. ANALYSE VON GESAMTZELLULAERER RNA . 25 8.1. EXTRAKTION GESAMTZELLULAERER RNA . 25 8.2. GELELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON RNA . 26 8.3. TRANSFER VON RNA AUF MEMBRANEN . 26 8.4. NORTHERN BLOT HYBRIDISIERUNG . 26 8.5. MARKIERUNG DURCH "RANDOM PRIRNED OLIGO-LABELLING " . 27 9. TUMORIGENITAETS STUDIEN . 27 10. NACHWEIS VON ZYTOTOXISCHER T-ZELLEN IM "CHROM-RELEASE ASSAY" . 28 11. IN VIVO DEPLETION CD8 ODER CD4 POSITIVER T-ZELLEN . 29 12. INFEKTION MIT DEM LCM VIRUS . 29 13. IN SITU NACHWEIS VON DNA-STRANGBRUECHEN . 29 ERGEBNISSE . 31 I. FUNKTIONALITAET VON MUT P53 IN METHA TUMORZELLEN. 31 1.1. CHARAKTERISIERUNG DES ISOLEUCINENTZUGS . 31 1.1.1. ISOLEUCIN ENTZUG FUEHRT ZU EINEM DRASTISCHEN ABFALL DER DNA SYNTHESE . 31 1.1.2. RELATIVE PROTEINBIOSYNTHESE VON METHA ZELLEN IM VERLAUF DER ARRETIERUNG . 32 1.1.3. VERLAUF DER DNA SYNTHESE NACH STIMULATION ARRETIERTER METHA ZELLEN . 33 1.2. P53 EXPRESSION IM VERLAUF DER ARRETIERUNG . 34 1.2.1. P53 EXPRESSION IN ARRETIERTEN METHA ZELLEN . 34 1.2.2. VERLAUF DER P53 SYNTHESE IM VERHAELTNIS ZUR GESAMTPROTEIN UND DNA-SYNTHESE NACH STIMULATION DURCH KOMPLETTES MEDIUM . 34 1.2.3. NORTHERN BLOT ANALYSE DER P53 EXPRESSION IN ARRETIERTEN UND PROLIFERIERENDEN METHA UND 3T3 ZELLEN . 36 1.3. INHIBITION DES WIEDEREINTRITTS DER METHA ZELLEN IN DIE S-PHASE DURCH EINEN MIKROINJIZIERTEN P53 SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER . 38 1.4. ZUSAMMENFASSUNG . 39 II. IN VIVO CHARAKTERISIERUNG DES METHA TUMORS . 39 II. 1. 1X106 METHA TUMORZELLEN WACHSEN IN VIVO NICHT S.C . 40 II.2 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNG DES DURCH 1X107 METHA ZELLEN S.C. INDUZIERTEN TUMORS . 40 II.3. TUMORWACHSTUM NACH DEPLETION VON CD4 UND CD8 POSITIVEN T-LYMPHOZYTEN . 42 II.4. TRANSPLANTIERTER METHA ASZITES TUMOR FUHRT AUCH S.C. ZU TUMORWACHSTUM . 44 II.5. NACHWEIS DER M-CSF SYNTHESE DURCH METHA ZELLEN. 44 II.6 VERSUCH DES IN VITRO NACHWEISES ZYTOTOXISCHER T ZELLEN . 46 II.6.1. ZYTOTOXISCHE CD8 POSITIVE T-ZELLEN SIND NICHT IN VITRO NACHWEISBAR . 46 II.6.2. NACHWEIS DER IN VITRO LYSIERBARKEIT VON LCM VIRUS INFIZIERTEN METHA ZELLEN DURCH CD8 POSITIVE LCM SPEZIFISCHE ZYTOTOXISCHE T-ZELLEN . 47 II. 7 ZUSAMMENFASSUNG . 48 III. P53 NACHWEIS IN HUMANEN PANKREAS ZELLEN . 49 III. 1. IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON P53 IN HUMANEN PANKREAS-KARZINOMZELLINIEN . 50 III. 2. WESTERN-BLOT ANALYSE DER P53 EXPRESSION IN ETABLIERTEN HUMANEN PANKREAS-KARZINOM ZELLINIEN . 51 III. 3. VERGLEICH WESTEM-BLOT VS. ELISA (ENZYME LINKED IMMUNO SORBENT ASSAY) . 53 III.4. P53 IN TUMORGEWEBE VON PANKREAS KARZINOMEN . 53 III.5.NACHWEIS P53 POSITIVER ZELLEN IM PANKREAS-SEKRET VON PATIENTEN MIT PANKREATITIS ODER PANKREAS KARZINOM . 55 III.6. IN SITU NACHWEIS VON APOPTOSE IN ZELLEN DES PANKREAS SEKRETS MITTELS TUNEL REAKTION . 56 1.7. ZUSAMMENFASSUNG . 57 DISKUSSION. . 58 TEILL TEIL II TEIL III . 63 ZUSAMMENFASSUNG . 67 LITERATUR . 68 DANKSAGUNG . 78
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