Molekularbiologische Charakterisierung des humanen WIPI4-Proteins im Prozess der zellulären Autophagie:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German English |
| Veröffentlicht: |
Tübingen
2019
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ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...............................................................................................................................
IV
TABELLENVERZEICHNIS
....................................................................................................................................
V
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
..............................................................................................................................
VI
ZUSAMMENFASSUNG
......................................................................................................................................
X
SUMMARY
...................................................................................................................................................
XII
1
EINLEITUNG
.............................................................................................................................................
1
1.1
DIE
AUTOPHAGIE
............................................................................................................................
1
1.2
DER
PROZESS
DER
ZELLULAEREN
AUTOPHAGIE
.....................................................................................
3
1.3
ROLLE
DER AUTOPHAGIE
IM
KONTEXT
MENSCHLICHER
ERKRANKUNGEN
................................................
5
1.4
DIE
REGULATION
DER
AUTOPHAGIE
..................................................................................................
6
1.4.1
DIE
INHIBIERUNG
DER
AUTOPHAGIE
DURCH
DEN
TORCL-SIGNALWEG.........................................
7
1.4.2
DIE
INDUKTION
DER
AUTOPHAGIE
DURCH
DEN
AMPK-SIGNALWEG............................................
10
1.4.3
DIE
ROLLE
VON
ULK1
IM
PROZESS
DER
AUTOPHAGIE
..............................................................
11
1.4.4
DIE
ROLLE
DES
PI3KC3K1
IM
PROZESS
DER
AUTOPHAGIE...
.....................................................
13
1.4.5
DIE
ROLLE
DER
HUMANEN
WIPI-PROTEINE
IM
PROZESS
DER
AUTOPHAGIE
...............................
15
1.4.6
DIE
REGULATION
DER
AUTOPHAGOSOMENENTSTEHUNG
DURCH
UBIQUITIN-AEHNLICHE
KONJUGATIONSSYSTEME
.......................................................................................................................
21
1.4.7
DIE
ROLLE
VON
ATG2
IM
PROZESS
DER
AUTOPHAGIE
..............................................................
23
1.5
DIE
WIPI1-
UND
LC3-PUNCTA-ANALYSE
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
DER
AUTOPHAGOSOMALEN
AKTIVITAET..24
1.6
DIE
FUNKTION
DER
AMPK-VERWANDTEN
KINASEN
NUAK2
UND
BRSK2
IN
METABOLISMUS,
TUMORENTWICKLUNG
UND
ZELLDIFFERENZIERUNG
..........................................................................................
27
2
ZIELSETZUNG
........................................................................................................................................
29
3
MATERIAL
UND
METHODEN
...................................................................................................................
31
3.1
MATERIAL
..........................................................................................................................................
31
3.1.1
GERAETE
...............................................................................................................................
31
3.1.2
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
..........................................................................................
32
3.1.3
ANTIKOERPER
.........................................................................................................................
34
3.1.4
SIRNAS
...............................................................................................................................
35
3.1.5
PLASMIDE
...........................................................................................................................
36
3.1.6
ZELLLINIEN
...........................................................................................................................
39
3.1.7
KOMPETENTE
E.
COLI
STAEMME
.............................................................................................
40
3.1.8
OLIGONUKLEOTIDE
................................................................................................................
40
3.1.9
MEDIEN
.............................................................................................................................
41
I
3.1.10
PUFFER
UND
LOESUNGEN
........................................................................................................
42
3.1.11
KITS
.....................................................................................................................................44
3.1.12
SOFTWARE
............................................................................................................................44
3.2
METHODEN
.......................................................................................................................................
46
3.2.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.....................................................................................
46
3.2.2
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
................................................................................................
51
3.2.3 BIOCHEMISCHE
METHODEN
..................................................................................................
58
3.2.4
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
...................................................................................................
60
4
ERGEBNISSE
...........................................................................................................................................
61
4.1
MANUSKRIPT
1
-
WIPI3
AND
WIPI4
SS-PROPELLERS
ARE
SCAFFOLDS
FOR
LKB1-AMPK-TSC
SIGNALLING
CIRCUITS
IN
THE
CONTROL
OF
AUTOPHAGY
......................................................................................................
61
4.1.1
WIPI4
UND
ATG2A
LIEGEN
IN
EINEM
KOMPLEX
VOR
.............................................................
62
4.1.2
WIPI4
INTERAGIERT
MIT
DEM
AMPKA/ULKL-KOMPLEX
.........................................................
63
4.1.3
WIPI4
N15,
D17
UND
D113
VERMITTELN
DIE
INTERAKTION
MIT
ATG2A
UND
AMPKA
............
65
4.1.4
NACH
AKTIVIERUNG
VON
AMPK
DISSOZIIERT
DIESES
ZUSAMMEN
MIT
ULK1
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
WIPI4
UND
ATG2A
........................................................................................................................
66
4.1.5
AMPK
UND
DIE
AMPK-VERWANDTEN
KINASEN
NUAK2
UND
BRSK2
STIMULIEREN
DIE
LOKALISATION
VON
WIPI4
AN
DER
AUTOPHAGOSOMALEN
MEMBRAN
........................................................
68
4.1.6
DER
ENTZUG
VON
GLUCOSE
STIMULIERT
DIE
LOKALISATION
VON
WIPI4
AN
DER
AUTOPHAGOSOMALEN
MEMBRAN
..........................................................................................................
68
4.1.7
AMPKA
VERMITTELT
DIE
LOKALISATION
VON
WIPI4
AN
DER
AUTOPHAGOSOMALEN
MEMBRAN
ALS
ANTWORT
AUF
DEN
ENTZUG
VON
GLUCOSE
...............................................................................................
69
4.1.8
WIPI1
INTERAGIERT
MIT
WIPI2B
UND
WIPI4,
NICHT
ABER
MIT
WIPI3
....................................
70
4.1.9
WIPI2
VERMITTELT
DIE
INTERAKTION
VON
WIPI1
MIT
ATG16L
................................................
71
4.1.10
WIPI3
IST
MIT
DEM
TSC-KOMPLEX
ASSOZIIERT
......................................................................
71
4.2
MANUSKRIPT
2:
WIPI
SS-PROPELLERS
FUNCTION
AS
SCAFFOLDS
FOR
STK11/LKB1-AMPK
AND
AMPK-
RELATED
KINASE
SIGNALING
IN
AUTOPHAGY
..................................................................................................
73
4.3
MANUSKRIPT
3:
THE
AMPK-RELATED
KINASES
NUAK2
AND
BRSK2
LINK
AUTOPHAGY
AND
LIPID
DROPLET
DYNAMICS
...................................................................................................................................
74
4.3.1
NUAK2
UND
BRSK2
SIND
EFFEKTOREN
DES
AUTOPHAGIE-SIGNALWEGES
.................................
75
4.3.2
NUAK2
UND
BRSK2
SIND
POSITIVE
REGULATOREN
DER
FETTSAEURESYNTHESE
...........................
78
4.3.3
NUAK2
UND
BRSK2
REGULIEREN
DIE
BIOSYNTHESE
VON
LIPID
DROPLETS
................................
79
4.3.4
ATG2A
LOKALISIERT
UNABHAENGIG
VON
NUAK2
UND
BRSK2
AN
LIPID
DROPLETS
......................
80
4.3.5
WIPI4
LOKALISIERT
UNABHAENGIG
VON
DER
INTERAKTION
MIT
ATG2A
AM
LIPID
DROPLET
..........
81
4.3.6
NUAK2/BRSK2
UND
LIPID
DROPLETS
LOKALISIEREN
IM
SELBEN
ZELLKOMPARTIMENT
..............
82
II
4.3.7
NUAK2
UND
BRSK2
BEEINFLUSSEN
ZAHLREICHE
REGULATORISCHE
FAKTOREN
DER
LIPID
DROPLET
BIOSYNTHESE
.......................................................................................................................................
83
4.4
MANUSKRIPT
4:
ACTIVATION
OF
AMPK-INDUCED
AUTOPHAGY AMELIORATES
HUNTINGTON
DISEASE
PATHOLOGY
IN
VITRO
.................................................................................................................................
86
4.4.1
DIE
AKTIVIERUNG
VON
AMPK
FUEHRT
ZUR
INDUKTION
DER
AUTOPHAGIE
IN
STHDH
Q111/QIN
UND
MEF
QIH
/
QIII
Z
E
M
EN
....................................................................................................
86
4.5
MANUSKRIPT
5:
AUTOMATED
DETECTION
OF
AUTOPHAGY
RESPONSE
USING
CELL
BASED
MICROSCOPY
ASSAYS
....................................................................................................................................................
88
4.6
MANUSKRIPT
6:
FUNCTION
OF
HUMAN
WIPI
PROTEINS
IN
AUTOPHAGOSOMAL
REJUVENATION
OF
ENDOMEMBRANES?
................................................................................................................................
91
5
DISKUSSION
..........................................................................................................................................
93
6
LITERATURVERZEICHNIS
........................................................................................................................
113
7
DARSTELLUNG
DES
EIGENANTEILS
..........................................................................................................
132
8
PUBLIKATIONEN
...................................................................................................................................
I
39
9
KONFERENZBEITRAEGE
..........................................................................................................................
I
38
10
MANUSKRIPTE
...............................................................................................................................
I
38
10.1
MANUSKRIPT
1:
WIPI3
AND
WIPI4
SS-PROPELLERS
ARE
SCAFFOLDS
FOR
LKB1-AMPK-TSC
SIGNALLING
CIRCUITS
IN
THE
CONTROL
OF
AUTOPHAGY
...................................................................................................
I
38
10.2
MANUSKRIPT
2:
WIPI
SS-PROPELLERS
FUNCTION
AS
SCAFFOLDS
FOR
STK11/LKB1-AMPK
AND
AMPK-
RELATED
KINASE
SIGNALING
IN
AUTOPHAGY
.................................................................................................
I
38
10.3
MANUSKRIPT
3:
THE
AMPK-RELATED
KINASES
NUAK2
AND
BRSK2
LINK
AUTOPHAGY
AND
LIPID
DROPLET
DYNAMICS
...............................................................................................................................
138
10.4
MANUSKRIPT
4:
ACTIVATION
OF
AMPK-INDUCED
AUTOPHAGY
AMELIORATES
HUNTINGTON
DISEASE
PATHOLOGY
IN
VITRO
..............................................................................................................................
I
38
10.5
MANUSKRIPT
5:
AUTOMATED
DETECTION
OF
AUTOPHAGY
RESPONSE
USING
CELL
BASED
MICROSCOPY
ASSAYS
.................................................................................................................................................
I
38
10.6
MANUSKRIPT
6:
FUNCTION
OF
HUMAN
WIPI
PROTEINS
IN
AUTOPHAGOSOMAL
REJUVENATION
OF
ENDOMEMBRANES?
.............................................................................................................................
138
III
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| spelling | Müller, Amelie Johanna Verfasser (DE-588)1182723527 aut Molekularbiologische Charakterisierung des humanen WIPI4-Proteins im Prozess der zellulären Autophagie vorgelegt von Amelie Johanna Müller Tübingen 2019 XIII, 138 Seiten, 143 verschieden gezählte Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Enthält Sonderabdrucke Dissertation Eberhard Karls Universität Tübingen 2019 Protein-Protein-Wechselwirkung (DE-588)4745193-2 gnd rswk-swf Autophagie Physiologie (DE-588)4441664-7 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Autophagie Physiologie (DE-588)4441664-7 s Protein-Protein-Wechselwirkung (DE-588)4745193-2 s DE-604 Eberhard Karls Universität Tübingen (DE-588)36187-2 dgg B:DE-101 application/pdf http://d-nb.info/1187542814/04 Inhaltsverzeichnis DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=031840839&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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