Effekte von Curcumin auf Genexpression und Funktion proinflammatorisch aktivierter Mikroglia:
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS I
1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 NEURODEGENERATIVE ERKRANKUNGEN .. 3
2.2 IMMUNSYSTEM DES ZNS...; . 3
2J MIKROGLIA 1 ........ 4
2.3.1 MECHANISMEN PRO INFLAMMATORISCHER MIKROGLIA-AKTIVIERUNG 4
2.3.2 ROLLE DER MIKROGLIA IN NEURODEGENERATIVEN ERKRANKUNGEN 5
2.4 CURCUMIN 6
2.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT.. 8
3 MATERIAL 9
3.1 GERAETE 9
3.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN . . 10
3.3 CHEMIKALIEN 11
3.4 MEDIEN UND SUPPLEMENTE 11
3.5 PUFFER UND LOESUNGEN . 11
3.6 KIT-SYSTEME *.* 12
3.7 ZELLLINIEN 12
3.8 OLIGONUKLEOTIDE 13
3.9 SOFTWARE 13
4 METHODEN 14
4.1 UEBERBLICK UEBER DIE ABFOLGE DER EXPERIMENTELLEN SCHRITTE 14
4.2 ZELLKULTUR 14
4.2.1 MURINE MIKROGLIA-ZELLLINIE BV-2 15
4.2.2 MURINE 661W PHOTOREZEPTOR-ZELLLINIE 15
4.2.3 MURINE MAKROPHAGEN-ZELLLINIE RAW 264.7 15
4.2.4 KONSERVIERUNG UND AUFTAUEN DER ZELLEN 15
4.2.5 SPLITTUNG DER ZELLKULTUREN 15
4.2.6 ZELLZAHLBESTIMMUNG UND AUSSAAT 16
4.2.7 STIMULATION 16
4.2.8 ZELLEMTE UND GEWINNUNG VON ZELLUEBERSTAENDEN 16
4J FUNKTIONSASSAVS 17
4.3.1 STICKSTOFFMONOXID ASSAV 17
4.3.2 LAKTAT-DEHVDROGENASE AKTIVITAETSASSAY 18
4.4 RNA-LSO!IERUNG........... 19
4.5 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG UND QUALITAETSKONTROLLE VON RNA
............................................................ 19
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INHALTSVERZEICHNIS 11^
4.6 REVERSE TRANSKRIPTION .. 20
4.7 DNA-MIKROARRAV ANALYSE ~ .. 20
4.8 TAQMAN QUANTITATIVE REAL-TIME RT-PCR 21
4.9 STATISTISCHE DATENAUSWERTUNG - - 24
5 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNISSE 25
5.1 GENOMWEITER EFFEKT DES CURCUMIN AUF BV-2 MLKROGLIA .. 25
5.1.1 BESTIMMUNG DER GENEXPRESSION DURCH MICROARRAY-ANALYSE 25
5.1.2 BIOSTATISTISCHE AUSWERTUNG DER MICROARRAY-DATEN (VIA SAM) 25
5.1.3 GENOMWEITE AENDERUNG DER GENEXPRESSION NACH STIMULATION MIT
CURCUMIN 26
52 DIFFERENTIELLE EXPRESSION AUSGEWAEHLTER ZIELGENE DES
CURCUMIN........................................................... 27
5.2.1 VALIDIERUNG SIGNIFIKANT REGULIERTER GENE DURCH REAL-TIME QRT-PCR
27
5.2.2 HOCHREGULIERANG DER GENEXPRESSION NACH STIMULATION MIT CURCUMIN 27
5.2.3 REDUZIERUNG DER GENEXPRESSION NACH STIMULATION MIT CURCUMIN 28
53 EINFLUSS VON CURCUMIN AUF ZELLMORPHOLOGIE AKTIVIERTER RAW-MAKROPHAGEN
30
5.4 WIRKUNG DES CURCUMIN AUF FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN AKTIVIERTER
RAW-MAKROPHAGEN 31
5.4.1 EINFLUSS VON CURCUMIN AUF STICKSTOFFMONOXID-FREISETZUNG
AKTIVIERTER RAW-MAKROPHAGEN 31
5.4.2 INKUBATION VON 661W PHOTOREZEPTORZELLEN MIT MKM 32
5.4.3 EFFEKT DES MKM AUF DIE MORPHOLOGIE VON 661 V ZELLEN 32
5.4.4 EFFEKT DES MKM AUF DIE LAKTAT-DEHYDROGENASE-FREISETZUNG DURCH 661W
PHOTOREZEPTORZELLEN 33
6 DISKUSSION 35
6.1 IMMUNMODULIERENDE WIRKUNG VON CURCUMIN AUF DAS TRANSKRIPTOM
AKTIVIERTER BV-2 MIKROGLIA.. 35
6.1.1 CURCUMIN INDUZIERT DIE EXPRESSION ANTIINFLAMMATORISCHER UND
NEUROPROTEKTIVER GEN-CLUSTER IN
AKTIVIERTER BV-2 MIKROGLIA 35
6.1.2 CURCUMIN SUPPRIMIERT DIE EXPRESSIONPROINFLAMMATORISCHERGENE
INAKTIVIERTEN BV-2 MIKROGLIA.. 37
6.2 CURCUMIN REDUZIERT NEUROTOXIZITAET AKTIVIERTER RAW-MAKROPHAGEN 38
6J AUSBLICK ..... 38
7 ZUSAMMENFASSUNG 39
8 LITERATURVERZEICHNIS 40
9 ANHANG 45
9.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS .. 45
92
TABELLENVERZEICHNIS...................................................................................................................................
45
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