Histologische Beurteilung der in vivo Knochenneubildung besiedelter Konstrukte nach osteogener Stimulation und Beimpfung mit vaskulärem endothelialem Wachstumsfaktor (VEGF) im Mausmodell:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
4
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 7
1.1. TISSUE ENGINEERING 7
1.1.1. GESCHICHTE UND KLINISCHE NOTWENDIGKEIT DES TISSUE ENGINEERINGS 8
1.1.2. STAMMZELLEN 9
1.1.3. LEITSCHIENEN 13
1.1.4. OSTEOGENE STIMULATION UND WACHSTUMSFAKTOREN 18
1.1.4.1. WACHSTUMSFAKTOREN 18
1.1.4.2. OSTEOGENE STIMULATION 21
1.1.5. KULTIVIERUNG 22
1.1.5.1. STATISCHE KULTIVIERUNG 23
1.1.5.2. DYNAMISCHE KULTIVIERUNG 23
1.1.6. IN VIVO MODELLE 25
1.1.6.1. ORTHOTOPE IMPLANTATION 26
1.1.6.2. EKTOPE IMPLANTATION 27
1.1.7. HISTOLOGISCHER NACHWEIS 28
1.2. AUFGABENSTELLUNG 30
2. MATERIAL UND METHODEN 31
2.1. ZELLKULTUR 31
2.1.1. ZELLEN 31
2.1.2. MEDIEN UND ZELLEXPANSION 31
2.2. INKUBATION DER LEITSCHIENEN IN VITRO 32
2.2.1. LEITSCHIENEN 32
2.2.2. BESIEDELUNG DER LEITSCHIENEN 32
2.2.3. KULTIVIERUNG DER LEITSCHIENEN 33
2.2.3.1. KULTIVIERUNG UNBESIEDELTER LEITSCHIENEN 33
2.2.3.2. KULTIVIERUNG BESIEDELTER LEITSCHIENEN OHNE OSTEOGENE
STIMULATION 33
2.2.3.3. KULTIVIERUNG BESIEDELTER LEITSCHIENEN MIT OSTEOGENER
STIMULATION.. 34
2.2.3.4. KULTIVIERUNG BESIEDELTER LEITSCHIENEN MIT OSTEOGENER
STIMULATION UND
VEGF 34
2.3. TIERVERSUCHE 34
2.3.1. IMPLANTATION DER LEITSCHIENEN 36
2.3.1.1. ANAESTHESIE 36
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS 5
2.3.1.2. OPERATIVES EINBRINGEN DER LEITSCHIENEN 36
2.3.2. EXPLANTATION DER LEITSCHIENEN UND ORGANENTNAHME 37
2.4. HISTOLOGISCHE AUSWERTUNG 39
2.4.1. MMA-EINBETTUNG 39
2.4.1.1. ANFERTIGUNG HISTOLOGISCHER SCHNITTE UND ERSTELLEN DER
OBJEKTTRAEGER 40
2.4.1.2. HISTOLOGISCHE FAERBUNG DER DUENNSCHNITTE 41
2.4.2. HERSTELLUNG ENTKALKTER PROBEN 41
2.4.2.1. KNOCHENENTKALKUNG UND ANFERTIGEN VON KRYOSCHNITTEN 41
2.4.2.2. HISTOLOGISCHE FAERBUNG DER KRYOSCHNITTE 42
2.4.3. HISTOLOGISCHE AUSWERTUNG DER GEFAERBTEN OBJEKTE 42
2.4.4. MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG 44
3. ERGEBNISSE 45
3.1. EFFIZIENZ DER LEITSCHIENENBESIEDELUNG 45
3.2. VERSUCHSTIERE 46
3.3. HISTOLOGISCHE AUSWERTUNG 46
3.3.1. ERGEBNISSE NACH 2-WOECHIGER IMPLANTATIONSDAUER IN VIVO 48
3.3.1.1. LEITSCHIENENSTROMA UND GRANULATIONSGEWEBE NACH 2 WOCHEN 50
3.3.1.2. BLUTGEFAESSE NACH 2 WOCHEN 51
3.3.1.3. MEHRKERNIGE RIESENZELLEN NACH 2 WOCHEN 53
3.3.1.4. FETTGEWEBE UND NEKROSEN NACH 2 WOCHEN 55
3.3.2. ERGEBNISSE NACH 12-WOECHIGER IMPLANTATION IN VIVO 56
3.3.2.1. LEITSCHIENENSTROMA UND GRANULATIONSGEWEBE NACH 12 WOCHEN.... 58
3.3.2.2. BLUTGEFAESSE NACH 12 WOCHEN 59
3.3.2.3. MEHRKERNIGE RIESENZELLEN NACH 12 WOCHEN 61
3.3.2.4. FETTGEWEBE UND NEKROSEN NACH 12 WOCHEN 63
4. DISKUSSION 65
4.1. METHODIK 65
4.1.1. VERWENDUNG VON STAMMZELLEN, EXPANSION UND ZELLDIFFERENZIERUNG 65
4.1.2. FREISETZUNG UND WIRKUNG VON VEGF 67
4.1.3. LEITSCHIENENWAHL UND EINFLUSS VON BEIMPFUNGS- UND
KULTIVIERUNGSFORM 69
4.1.4. UNTERSUCHUNG IM TIERMODELL UND IMPLANTATIONSFORM 72
4.1.5. HISTOLOGISCHE SCHNITTE UND FAERBUNGEN 73
4.2. ERGEBNISSE 74
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
4.3. SCHLUSSFOLGERUNG 83
ZUSAMMENFASSUNG 84
LITERATURVERZEICHNIS 86
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 102
ANHANG 103
DANKSAGUNG 108
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