Einfluss einer intrazellulären Infektion mit Staphylococcus aureus auf das Wachstum, den Metabolismus und die Zytokinsekretion von Glioblastomzellen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Jena
[2021]
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1.
ZUSAMMENFASSUNG
..........................................................................................................
5
2.
EINLEITUNG
............................................................................................................................
7
2.
1
GLIOBLASTOMA
MULTIFORME
..........................................................................................................................................
7
2.2
A
STROZYTEN
......................................................................................................................................
8
2.3
S
TAPHYLOCOCCUS
AUREUS
...............................................................................................................
9
2.3.1
INTERNALISIERUNG
VON
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
............................................................................
10
2.3.2
SMALL
COLONY
VARIANTS
(SCV)
.............................................................................................
11
2.4
I
NTRAZELLULAERE
S
IGNALWEGE
NACH
S.
AL
/
REUS
-I
NFEKTION
IN
W
IRTSZELLEN
................................
12
2.5
P
ROLIFERATIONSFAKTOREN
.............................................................................................................
14
2.6
M
ETABOLITE
.....................................................................................................................................
15
2.6.1
GLUKOSE
........................................................................................................
16
2.6.2
LAKTAT
........................................................................................................................................
16
2.6.3
GLUTAMIN
...................................................................................................................................
17
2.6.4
AMMONIUM
................................................................................................................................
17
2.7
Z
YTOKINE
..........................................................................................................................................
17
2.7.1
INTERLEUKIN
1
BETA
.............................................................................................
18
2.7.2
LNTERLEUKIN-6
..............................................................................................................................
18
2.7.3
LNTERLEUKIN-8
..............................................................................................................................
19
3.
ZIELE
DER
ARBEIT
..............................................................................................................
20
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
..............................................................................................
22
4.1
M
ATERIAL
................................................................................................................
22
4.1.1
CHEMIKALIEN
..............................................................................................................................
22
4.1.2
HERGESTELLTE
LOESUNGEN
.............................................................................................
23
4.1.3
KITS
............................................................................................................................................
23
4.1.4
VERBRAUCHSMATERIALIEN
..............................................................................................
24
4.7.5
GERAETE
...................................................................................................................
24
4.1.6
PROGRAMME
...............................................................................................................................
28
4.1.7
ANTIKOERPER
.................................................................................................................................
28
4.1.8
HUMANE
PRIMER.
.........................................................................................................................
27
4.2
M
ETHODEN
................................................................................................................
28
4.2.7
PATIENTENDATEN
...........................................................................................................................
28
4.2.2
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.........................................................................................
28
4.2.2.1
HERSTELLUNG
DER
PRIMAERKULTUREN
....................................................................................................
28
4.2.2.2
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
.................................................................................................................
29
4.2.2.3
KULTIVIERUNG
DER
HUMANEN
ASTROZYTEN
(HBA)
...............................................................................
29
4.2.2.4
MANUELLE
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
..............................................................................................
29
4.2.2.5
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
....................................................................................................................
30
4.2.2.6
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.....................................................................................................................
30
4.2.3
MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN
......................................................................................................
30
4.2.3.1
HERSTELLEN
DER
BAKTERIENIMPFKULTUR
...............................................................................................
30
4.2.3.2
BESTIMMUNG
DER
OPTIMALEN
MULTIPLICITY
OF
INFECTION
(MOI)
...........................................................
31
4.2.3.3
FLUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTING
(FACS)-ANALYSE
................................................................
32
4.2.3.4
INFEKTION
DER
GLIOBLASTOMZELLEN
UND
HBA
MIT
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
.........................................
33
4.2.3.5
LYSE
DER
INFIZIERTEN
GLIOBLASTOMZELLEN
UND
HBA
..........................................................................
34
4.2.3.6
AUSWERTUNG
DER
SCHAFBLUTAGARPLATTEN
..........................................................................................
34
4.
2.
4
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
...............................................................................................
34
4.2.4.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
.............................................................................................................
34
4.2.4.2
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
...........................................................................
35
4.2.5
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
...............................................................................................
36
4.2.5.1
RNA-EXTRAKTION
..............................................................................................................................
36
4.2.5.2
CDNA-SYNTHESE
.............................................................................................................................
37
4.2.5.3
QUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(QPCR)
..........................................................................
37
4.2.6
BIOCHEMISCHE
METHODEN
..........................................................................................................
38
4.2.6.1
METABOLITE
......................................................................................................................................
38
4.2.
7
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
...........................................................................................................
39
5.
ERGEBNISSE
.........................................................................................................................
40
5.1
C
HARAKTERISIERUNG
DER
PRIMAEREN
G
LIOBLASTOMZELLKULTUREN
...............................................
40
5.2
I
NFEKTION
DER
G
LIOBLASTOMZELLKULTUREN
..................................................................................
41
5.2.1
EINSTELLUNG
DER
OPTIMALEN
MULTIPLICITY
OF
INFECTION
(MOI)
............................................................
41
5.2.2
NACHWEIS
DER
INTERNALISIERUNG
DER
BAKTERIEN
.............................................................................
42
5.2.3
VERLAUF
DER
INFEKTION
..................................................................................................................
44
5.2.4
VORHANDENSEIN
VON
SMALL
COLONY
VARIANTS
(SCV)
....................................................................
47
5.3
W
ACHSTUMSVERHALTEN
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
........................................................................
49
5.4
M
ETABOLISMUS
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.......................................................................................
55
5.4.1
GLUKOSE
UND
LAKTAT
....................................................................................................................
55
5.4.2
GLUTAMIN
UND
AMMONIUM
..........................................................................................................
59
5.5
Z
YTOKINSEKRETION
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
................................................................................
64
5.5.1
INTERLEUKIN
1
BETA
.......................................................................................................................
65
5.5.2
LNTERLEUKIN-6
...............................................................................................................................
65
5.5.3
LNTERLEUKIN-8
...............................................................................................................................
67
6.
DISKUSSION
..........................................................................................................................
69
6.1
I
NFEKTION
DER
G
LIOBLASTOMZELLKULTUREN
..................................................................................
70
6.1.1
NACHWEIS
DER
INTERNALISIERUNG
DER
BAKTERIEN
.............................................................................
70
6.1.2
VERLAUF
DER
INFEKTION
...................................................................................................................
73
6.1.3
VORHANDENSEIN
VON
SMALL
COLONY
VARIANTS
(SCV)
......................................................................
75
6.2
W
ACHSTUMSVERHALTEN
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
........................................................................
77
6.3
M
ETABOLISMUS
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
........................................................................................
81
6.4
Z
YTOKINSEKRETION
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.................................................................................
90
7.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
...................................................................................................
96
8.
LITERATURVERZEICHNIS
....................................................................................................
98
9.
ANHANG
................................................................................................................................
112
A.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
..................................................................................................................
112
B.
TABELLENVERZEICHNIS
......................................................................................................................
113
C.
FORMELVERZEICHNIS
........................................................................................................................
113
D.
DANKSAGUNG
.................................................................................................................................
114
E.
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
.............................................................................................................
115
4
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
5
2.
EINLEITUNG
.
7
2.
1
GLIOBLASTOMA
MULTIFORME
.
7
2.2
A
STROZYTEN
.
8
2.3
S
TAPHYLOCOCCUS
AUREUS
.
9
2.3.1
INTERNALISIERUNG
VON
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
.
10
2.3.2
SMALL
COLONY
VARIANTS
(SCV)
.
11
2.4
I
NTRAZELLULAERE
S
IGNALWEGE
NACH
S.
AL
/
REUS
-I
NFEKTION
IN
W
IRTSZELLEN
.
12
2.5
P
ROLIFERATIONSFAKTOREN
.
14
2.6
M
ETABOLITE
.
15
2.6.1
GLUKOSE
.
16
2.6.2
LAKTAT
.
16
2.6.3
GLUTAMIN
.
17
2.6.4
AMMONIUM
.
17
2.7
Z
YTOKINE
.
17
2.7.1
INTERLEUKIN
1
BETA
.
18
2.7.2
LNTERLEUKIN-6
.
18
2.7.3
LNTERLEUKIN-8
.
19
3.
ZIELE
DER
ARBEIT
.
20
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
22
4.1
M
ATERIAL
.
22
4.1.1
CHEMIKALIEN
.
22
4.1.2
HERGESTELLTE
LOESUNGEN
.
23
4.1.3
KITS
.
23
4.1.4
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
24
4.7.5
GERAETE
.
24
4.1.6
PROGRAMME
.
28
4.1.7
ANTIKOERPER
.
28
4.1.8
HUMANE
PRIMER.
.
27
4.2
M
ETHODEN
.
28
4.2.7
PATIENTENDATEN
.
28
4.2.2
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
28
4.2.2.1
HERSTELLUNG
DER
PRIMAERKULTUREN
.
28
4.2.2.2
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
.
29
4.2.2.3
KULTIVIERUNG
DER
HUMANEN
ASTROZYTEN
(HBA)
.
29
4.2.2.4
MANUELLE
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
29
4.2.2.5
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
.
30
4.2.2.6
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
30
4.2.3
MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN
.
30
4.2.3.1
HERSTELLEN
DER
BAKTERIENIMPFKULTUR
.
30
4.2.3.2
BESTIMMUNG
DER
OPTIMALEN
MULTIPLICITY
OF
INFECTION
(MOI)
.
31
4.2.3.3
FLUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTING
(FACS)-ANALYSE
.
32
4.2.3.4
INFEKTION
DER
GLIOBLASTOMZELLEN
UND
HBA
MIT
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
.
33
4.2.3.5
LYSE
DER
INFIZIERTEN
GLIOBLASTOMZELLEN
UND
HBA
.
34
4.2.3.6
AUSWERTUNG
DER
SCHAFBLUTAGARPLATTEN
.
34
4.
2.
4
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.
34
4.2.4.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
.
34
4.2.4.2
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
35
4.2.5
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
36
4.2.5.1
RNA-EXTRAKTION
.
36
4.2.5.2
CDNA-SYNTHESE
.
37
4.2.5.3
QUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(QPCR)
.
37
4.2.6
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
38
4.2.6.1
METABOLITE
.
38
4.2.
7
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
39
5.
ERGEBNISSE
.
40
5.1
C
HARAKTERISIERUNG
DER
PRIMAEREN
G
LIOBLASTOMZELLKULTUREN
.
40
5.2
I
NFEKTION
DER
G
LIOBLASTOMZELLKULTUREN
.
41
5.2.1
EINSTELLUNG
DER
OPTIMALEN
MULTIPLICITY
OF
INFECTION
(MOI)
.
41
5.2.2
NACHWEIS
DER
INTERNALISIERUNG
DER
BAKTERIEN
.
42
5.2.3
VERLAUF
DER
INFEKTION
.
44
5.2.4
VORHANDENSEIN
VON
SMALL
COLONY
VARIANTS
(SCV)
.
47
5.3
W
ACHSTUMSVERHALTEN
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.
49
5.4
M
ETABOLISMUS
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.
55
5.4.1
GLUKOSE
UND
LAKTAT
.
55
5.4.2
GLUTAMIN
UND
AMMONIUM
.
59
5.5
Z
YTOKINSEKRETION
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.
64
5.5.1
INTERLEUKIN
1
BETA
.
65
5.5.2
LNTERLEUKIN-6
.
65
5.5.3
LNTERLEUKIN-8
.
67
6.
DISKUSSION
.
69
6.1
I
NFEKTION
DER
G
LIOBLASTOMZELLKULTUREN
.
70
6.1.1
NACHWEIS
DER
INTERNALISIERUNG
DER
BAKTERIEN
.
70
6.1.2
VERLAUF
DER
INFEKTION
.
73
6.1.3
VORHANDENSEIN
VON
SMALL
COLONY
VARIANTS
(SCV)
.
75
6.2
W
ACHSTUMSVERHALTEN
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.
77
6.3
M
ETABOLISMUS
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.
81
6.4
Z
YTOKINSEKRETION
DER
G
LIOBLASTOMZELLEN
.
90
7.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
96
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
98
9.
ANHANG
.
112
A.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
112
B.
TABELLENVERZEICHNIS
.
113
C.
FORMELVERZEICHNIS
.
113
D.
DANKSAGUNG
.
114
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EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
.
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