Studien zur Regulation des kernkodierten AtpC-Gens aus Spinat (Spinacia oleracea L.):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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| adam_text | 0 STUDIEN ZUR REGULATION DES KERNKODIERTEN ATPC-GENS AUS SPINAT
(SPINACIA OLERACEA L.) INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES
DOKTORGRADES DER FAKULTAET FUER BIOLOGIE DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN VORGELEGT VON MARTIN LANDSBERGER
AUS MUENCHEN JANUAR 1999 INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 7 1. EINLEITUNG 9 2. MATERIAL UND METHODEN 20 2.1.
MATERIAL 20 2.1.1. CHEMIKALIEN 20 2.1.2. ENZYME 20 2.1.3.
MOLEKULARGEWICHTE UND GROESSENSTANDARDS 21 2.1.4. ANTIKOERPER : 21 2.1.5.
BAKTERIENSTAEMME UND PHAGEN 21 2.1.6. PLASMIDE 21 2.1.7. SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE 22 2.1.8. PFLANZENMATERIAL 23 2.1.9. MEDIEN UND LOESUNGEN
ZUR ANZUCHT VON BAKTERIEN UND PHAGEN 23 2.1.10. MEDIEN UND LOESUNGEN ZUR
KULTIVIERUNG VON PFLANZEN 25 2.1.11. ALLGEMEINE PUFFER UND LOESUNGEN 26
2.2. METHODEN 26 2.2.1. ALLGEMEINE MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 26
2.2.2. METHODEN FUER MODIFIKATION UND ANALYSE VON DNS 27 2.2.2.1.
ISOLIERUNG VON PLASMID-DNS NACH BIRNBOIM UND DOLY (1979) 27 2.2.2.2.
LIGATION VON DNS 28 2.2.2.3. PRAEPARATION VON KOMPETENTEN E. CO/Z -ZELLEN
NACH DER CACL 2 -METHODE . 28 2.2.2.4. TRANSFORMATION VON E. COLI DH5A
28 2.2.2.5. ISOLIERUNG VON PFLANZLICHER GESAMT-DNS NACH FULTON ET AL.
(1995) ... 29 2.2.2.6. ISOLIERUNG VON PHAGEN-DNS 30 2.2.2.7. SICHTEN VON
CDNA-BIBLIOTHEKEN NACH BENTON UND DAVIS (1977) 30 INHALTSVERZEICHNIS . 4
2.2.2.8. KOLONIEHYBRIDISIERUNG (MODIFIZIERT NACH GRUNSTEIN UND HOGNESS,
1975) 31 2.2.2.9. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNS NACH FEINBERG UND
VOGELSTEIN (1983) 31 2.2.2.10. HYBRIDISIERUNG VON FILTERN MIT
IMMOBILISIERTEN NUKLEINSAEUREN 31 2.2.2.11. AMPLIFIZIERUNG VON DNS MIT
DER POLYMERASENKETTEN- REAKTION (PCR) 32 2.2.3. METHODEN FUER
MODIFIKATION UND ANALYSE VON RNS 32 2.2.3.1. ISOLIERUNG VON GESAMT-RNS
NACH CHOMCZYNSKI UND SACCHI (1987) .. 32 2.2.3.2. ISOLIERUNG VON POLYA +
-RNS 33 2.2.3.3. IN V/FR-O-TRANSKRIPTION VON RNS 33 2.2.3.4. SYNTHESE
VON CDNS DURCH REVERSE TRANSKRIPTION VON POLYA + -RNS ... 33 2.2.4.
ANALYSE VON PROTEINEN 34 2.2.4.1. ALLGEMEINE METHODEN FUER DIE ANALYSE
VON PROTEINEN 34 2.2.4.2. KONSTRUKTION UND UEBEREXPRESSION VON
GST-FUSIONSPROTEINEN IN E. COLI * 34 2.2.4.3. REINIGUNG VON
GST-FUSIONSPROTEINEN 35 2.2.4.4. NACHWEIS VON
PROTEIN/RNS-WECHSELWIRKUNGEN ( NORTHWESTERN ) ... 35 2.2.4.5.
PRAEPARATION VON POLYKLONALEN ANTIKOERPERN ANTI-RGGNTP 35 2.2.4.6.
ANREICHERUNG DER LOESLICHEN PROTEINFRAKTION AUS PFLANZENGEWEBE .... 36
2.2.4.7. PRAEPARATION VON GESAMTPROTEINEXTRAKTEN AUS PFLANZENGEWEBE 36
2.2.4.8. ISOLIERUNG DER PLASTIDAEREN ATP-SYNTHASE NACH NELSON ET AL.
(1980, MODIFIZIERT) 37 2.2.5. HERSTELLUNG VON TRANSGENEM
PFLANZENMATERIAL 38 2.2.5.1. KONJUGATIVER PLASMIDTRANSFER VON E. COLI IN
A. TUMEFACIENS NACH BEVAN (1984) 38 2.2.5.2. TRANSFORMATION MIT DER
LEAF-DISC -METHODE NACH HORSCH ET AL. (1985) 39 2.2.5.3. TRANSIENTE
TRANSFORMATION VON TABAKPROTOPLASTEN NACH KOOP ETAL. (1996) 39 2.2.6.
COMPUTERANALYSEN 40 INHALTSVERZEICHNIS 3. ERGEBNISSE 41 3.1. STUDIEN ZUR
EXPRESSION DES ,4/PC-GENS AUS SPINAT 41 3.1.1.
KLONIERUNGDER^RPC-PROMOTORKONSTRUKTIONEN 41 3.1.2. NACHWEIS DER
TRANSGENITAET 43 3.1.3. PHAENOTYPISCHE AUSPRAEGUNG IN TRANSGENEM TABAK 45
3.1.4. ANALYSE DER AKKUMULATION DER ATPC-MKNS IN TRANSGENEM TABAK 45
3.1.4.1. NACHWEIS DER EXPRESSION UEBER RNS/DNS-HYBRIDISIERUNG 45 3.1.4.2.
NACHWEIS DER EXPRESSION UEBER RT-PCR UND DNS/DNS- HYBRIDISIERUNG 46
3.1.5. NACHWEIS DER Y-UNTEREINHEIT IN TRANSGENEM TABAK DURCH ANTIKOERPER
48 3.1.6. KLONIERUNG EINER GENOMISCHEN SEQUENZ VON ATPC AUS N. TABACUM
49 3.1.7. PHYLOGENETISCHE ASPEKTE 51 3.2. ISOLIERUNG VON GENEN FUER
NUKLEARE REGULATIONSPROTEINE 55 3.2.1. KLONIERUNG DER CDNS RGGA FUER DAS
PROTEIN RGGNTP AUS N. TABACUM 55 3.2.2. ISOLIERUNG DES GENS RGGA DES
HOMOLOGEN PROTEINS AUS A. THALIANA 57 3.2.3. ANALYSE DER KOPIENZAHL VON
RGGA IM GENOM VON A. THALIANA 60 3.2.4. VERGLEICHENDE ANALYSE DER
PROTEINE RGGNTP UND RGGATHP 60 3.2.5. EXPRESSION VON RGGA WAEHREND DER
PFLANZENENTWICKLUNG 62 3.2.6. SUBZELLULAERE LOKALISATION VON RGGNTP 63
3.2.7. IN VITRO RNS-BINDESTUDIEN 64 3.2.8 WEITERE MITGLIEDER DER
RGG-PROTEINFAMILIE 66 3.2.9. IMMUNOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN MIT
ANTI-RGGNTP 71 3.2.10. KONSERVIERTE ELEMENTE IN RGGNTP 73 4. DISKUSSION
75 4.1. ANALYSE DER 5 -REGIONEN DER GENE ATPC UND ATPD 75 4.2. ANALYSE
DER 3 -REGION DES ATPC-GENS 75 4.3. DIE BEDEUTUNG DER INTRONSEQUENZEN 79
4.4. PHAENOTYPISCHE AUSWIRKUNGEN 81 4.5. DIE RGG-PROTEINFAMILIE 81
INHALTSVERZEICHNIS 5. ZUSAMMENFASSUNG 92 6. LITERATURVERZEICHNIS 94 7.
PUBLIKATIONEN 118 DANKSAGUNG 119 LEBENSLAUF 120
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