Charakterisierung von Immunophilinen in Monocyten:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
1
1.
EINLEITUNG
3
1.1
EIGENSCHAFTEN
UND
WIRKUNGSWEISE
DER
TMMUNSUPPRESSIVA
3
CYCLOSPORIN
A
UND
FK506
1.2
IMMUNOPHILINE:
ZELLULAERE
BINDUNGSPROTEINE
DER
IMMUN
4
SUPPRESSIVA
1.3
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
ZINKFINGER-FAMILIE
7
1.4
BIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
DER
TMMUNSUPPRESSIVA
FUER
8
MAKROPHAGEN
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
11
2.1
MATERIAL
11
2.1.1
VERSUCHSTIERE
UND
ZELLINIEN
11
2.1.2
MEDIENBESTANDTEILE
11
2.1.3
ANTIBIOTIKA
11
2.1.4
CHEMIKALIEN
11
2.1.5
SAEULENMATERIAL
UND
AFFINITAETSMATRIZES
12
2.1.6
ANTIKOERPER
12
2.1.7
HYBRIDISATIONSMITTEL
13
2.1.8
ARBEITSGERAETE
UND
HILFSMITTEL
13
2.1.9
MEDIEN
14
2.2
METHODEN
15
2.2.1
GEWINNUNG
VON
MAKROPHAGEN
AUS
DEM
PERITONEUM
VON
15
NMRI-MAEUSEN
UND
MAKROPHAGENBEHANDLUNG
2.2.2
INHIBITIONS-ELISA
16
2.2.3
ZELLKULTUR
DER
ZELLINIEN
18
2.2.4
AUFSCHLUSS DER
ZELLEN
UND
FRAKTIONIERTE
ZENTRIFUGATION
18
2.2.5
ISOLIERUNG
VON
PROTEINEN
AUS
DER
KEMFRAKTION
19
2.2.6
ANALYSE
DER
PROTEINE
19
2.2.6.1
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
19
2.2.6.2
DISKONTINUIERLICHE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
VON
20
DENATURIERTEN
PROTEINEN
(SDS-PAGE)
2.26.3
COOMASSIE-FAERBUNG
21
2.2.6.4
SILBERFAERBUNG
VON
PAA-GELEN
21
2.2.6.5
WESTERN
BLOT-ANALYSE
22
2.2.7
BESTIMMUNG
DER
PEPTIDYL-PROLYL
DS-TRANS
ISOMERASE-AKTIVITAET
23
2.2.8
BESTIMMUNG
DER
LACTATDEHYDROGENASE-AKTIVITAET
27
2.2.9
NATIVE
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
27
2.2.9.1
GELFILTRATION
27
2.2.9.2
HYDROPHOBE
CHROMATOGRAPHIE
28
2.2.9.3
LONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE 28
2.2.9,4
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
AF-BLUE
SAEULENMATERIAL
29
2.2.9.5
METALLIONEN-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
29
2.2.10
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
TRICHLORESSIGSAEURE
30
2.2.11
HIGH
PERFORMANCE
LIQUID
CHROMATOGRAPHY
(HPLC)
30
2.2.12
DNA-BINDUNGSASSAY
UND
IMMUNODOT-BLOT
31
2.2.13
"SOUTH-WESTERN
BLOT"
ANALYSE
32
2.2.14
"MOLECULAR
MODELLING"
32
2.2.15
FAERBUNG
VON
ZN
2
*
BINDENDEN
PROTEINEN
MIT
"STAINS
ALL"
33
3.
ERGEBNISSE
34
3.1
NACHWEIS
VON
IMMUNOPHILINEN
IN
MONOCYTEN
UND
MAKROPHAGEN
34
3.1.1
PERITONEALMAKROPHAGEN
34
3.1.2
H4-7
35
3.1.3
U937
35
3.2
INTRAZELLULAERE
VERTEILUNG
DER
IMMUNOPHILINE
IN
MONOCYTEN
UND
36
MAKROPHAGEN
3.3
NACHWEIS
VON
FKBP
UND
CYCLOPHILIN
AUS
DEM
CYTOSOL
VON
38
H4-7
ZELLEN
3.4
REINIGUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
CCYP
AUS
H4-7
ZELLEN
41
3.4.1
REINIGUNG
VON
CCYP
41
3.4.2
CHARAKTERISIERUNG
VON
CCYP
42
3.5
ISOLIERUNG
EINES
8KD
CYP-ASSOZIATIONSPROTEINS
AUS
DEM
43
CYTOSOL
VON
H4-7
ZELLEN
3.6
ENZYMOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
NUKLEAEREN
45
IMMUNOPHILINS
AUS
H4-7
ZELLEN
3.7
INHIBIERUNG
DER
PPIASE
AKTIVITAET
DER
CYCLOPHILINE
AUS
46
H4-7
ZELLEN
DURCH
ZINK-IONEN
3.8
ZEITKINETIK
DER
PPIASE
INHIBITION
DURCH
ZINK-IONEN
47
3.9
CHARAKTERISIERUNG
VON
CYP
DURCH
METALLIONEN-AFFINITAETS
48
CHROMATOGRAPHIE
3.10
REAKTIVIERUNG
DER
PPIASE
AKTIVITAET
NACH
ZNCIJ-LNHIBIERUNG
49
DURCH
1,10-PHENANTHROLIN
3.11
UEBERPRUEFUNG
ANDERER
ZWEIWERTIGER
KATIONEN
AUF
WECHSEL
49
WIRKUNGEN
MIT
DER
PPIASE
AKTIVITAET
VON
NCYP
AUS
H4-7
ZELLEN
3.12
INHIBIERUNG
DER
PPIASE
AKTIVITAET
DER
CYCLOPHILINE
ANDERER
50
ZELLEN
DURCH
ZINK-IONEN
3.13
DNA-BINDUNGSASSAY
51
3.14
"SOUTH-WESTERN
BLOT"
ANALYSE
VON
CYP
AUS
H4-7
ZELLEN
51
3.15
ZN
2+
-BINDUNGSSTELLEN
DES
CYP
MOLEKUELS
3.16
"MOLECULAR
MODELLING"
3.17
EINFLUSS
VON
IMMUNSUPPRESSIVA
AUF
DEN
EICOSANOID
METABOLISMUS
VON
MAUS-PERITONEALMAKROPHAGEN
4.
DISKUSSION
4.1
MULTIFUNKTIONALITAET DER
CYCLOPHILIN-FAMILIE
4.2
PHYSIOLOGISCHE
ROLLE
DER
IMMUNOPHILINE
4.3
BETEILIGUNG
VON
CYCLOPHILINEN
AN
DER
ZELLULAEREN ZINK
HOMOEOSTASIS
UND
AN
"SHUTTLING"
PROZESSEN
4.4
AEHNLICHKEITEN
DER
CYCLOPHILINE
MIT
ZINKFINGER-TRANSKRIPTIONS
59
FAKTOREN
4.5
BETEILIGUNG
DER
CYCLOPHILINE
AN
ANDEREN
ZELLULAEREN
PROZESSEN
61
8
3
8
8
8
8
8
LITERATURVERZEICHNIS
64 |
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