microRNA-221 und ihr Einfluss auf Zytokin-vermittelte Signalwege im Hochrisiko-Karzinom der Prostata: = microRNA-221 and its influence on cytokine-mediated signaling pathways in high-risk prostate cancer
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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Würzburg
Juni 2016
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| adam_text | AUS DER KLINIK UND POLIKLINIK FUER UROLOGIE UND KINDERUROLOGIE
DER JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG
DIREKTOR: UNIV.-PROFESSOR DR. MED. HUBERTUS RIEDMILLER
MICRORNA-221 UND IHR EINFLUSS AUF ZYTOKIN-VERMITTELTE SIGNALWEGE
IM HOCHRISIKO-KARZINOM DER PROSTATA
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DER DOKTORWUERDE DER
MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG
VORGELEGT VON
MARKUS KARL LUDWIG KREBS
AUS SCHOELLKRIPPEN
WUERZBURG, JUNI 2016
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG..............................................................................................................
1
1.1 EPIDEMIOLOGIE DES PROSTATAKARZINOMS
................................................................
1
1.2 BEEINFLUSSUNG DER GENEXPRESSION DURCH
MICRORNA...........................................2
1.2.1 ROLLE VON MIRNA IN TUMORENTSTEHUNG UND -PROGRESSION
...........................
3
1.2.2 ROLLE VON MIRNA IM
PCA..............................................................................
4
2
FRAGESTELLUNG....................................................................................................6
3 MATERIAL UND
METHODEN...............................................................................
7
3.1
PROBENMATERIAL.......................................................................................................
7
3.1.1
PCA-ZELLLINIEN.................................................................................................7
3.1.1.1
ZELLKULTUR.................................................................................................7
3.1.1.2 RNA- UND
PROTEIN-ISOLATION....................................................................
8
3.1.2
PCA-NATIVMATERIAL.........................................................................................
9
3.2
UNTERSUCHUNGSMETHODEN.......................................................................................
9
3.2.1 MIKROSKOPISCHE
AUFNAHMEN..........................................................................9
3.2.2
PROLIFERATIONSTESTS.........................................................................................10
3.2.3 BIOINFORMATISCHE
ANALYSEVERFAHREN............................................................10
3.2.3.1
MICROARRAY-EXPERIMENT..........................................................................11
3.2.3.2 UNTERSUCHUNG DER MIR-221 -BEEINFLUSSTEN GENEXPRESSION
..................
12
3.2.3.3 VORHERSAGE VON MIR-221 -ZIELGENEN
...................................................
13
3.2.4 MRNA- UND MIRNA-BESTIMMUNG MITTELS REAL TIME-PCR
.......................
13
3.2.4.1 REVERSE
TRANSKRIPTION..........................................................................
14
3.2.4.2 REAL
TIME-PCR........................................................................................
14
3.2.5 WESTERN
BLOT.................................................................................................
16
3.2.6 SOFTWARE UND STATISTIK
..................................................................................
19
4
ERGEBNISSE............................................................................................................
20
4.1 MIR-221 -GEHALT DER
PCA-ZELLLINIEN....................................................................20
4.2 MIKROSKOPISCHE
AUFNAHMEN...............................................................................21
4.3 PROLIFERATION VON PCA-ZELLEN NACH PRE-MIR-221 -TRANSFEKTION
........................
21
4.4 MICROARRAY-UNTERSUCHUNG MIR-221 -REGULIERTER ZELLFUNKTIONEN
.......................
23
4.4.1 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER
GENEXPRESSION................................................ 24
4.4.2 BIOINFORMATISCHE ZUORDNUNG REGULIERTER SIGNALWEGE
...............................
27
4.4.2.1
INTERFEROME-DATENBANK.........................................................................28
4.4.2.2 DAVID FUNCTIONAL
ANNOTATION-ANALYSE............................................28
4.4.2.3 INGENUITY SYSTEMS-ANALYSE
..................................................................
29
4.5 VALIDIERUNG IDENTIFIZIERTER SIGNALWEGE
..............................................................
30
4.5.1 REAL
TIME-PCR.............................................................................................
31
4.5.2 WESTERN
BLOT................................................................................................
32
4.5.3
PROLIFERATIONSTESTS........................................................................................
32
4.6 VALIDIERUNG MOEGLICHER ZIELGENE VON MIR-221
................
34
4.6.1 REAL
TIME-PCR.............................................................................................
36
4.6.2 WESTERN
BLOT................................................................................................
37
4.7 EXPRESSION VON MIR-221 UND IHRER ZIELGENE IN NATIVMATERIAL
.........................
37
5
DISKUSSION..........................................................................................................
40
5.1 MIR-221 HEMMT WACHSTUM VON ANDROGEN-UNABHAENGIGEN
PCA-ZELLEN...........42
5.2 MIR-221 AKTIVIERT ZELLULAERES
STAT1-SIGNAL...................................................... 42
5.2.1 INTERFERON-INDUZIERTE GENE UND IHRE ROLLE IN NEOPLASIEN
..........................
43
5.2.2 MIR-221 UND IHRE ROLLE IM RAHMEN VON VIRUSINFEKTIONEN
......................
45
5.2.3 REGULATION VON INTERFERON-SIGNALEN DURCH MIR-221
.................................
46
5.2.4 INTERFERON-SIGNAL ALS ERKLAERUNGSANSATZ FUER DIVERGENTE
LNCAP-REAKTION 47
5.2.5 MIR-221 ALS MOEGLICHE DETERMINANTE VIRALER PCA-IMPFSTRATEGIEN
...........
47
5.3 MIR-221 REGULIERT IRF2 UND SOCS3 IN VITRO
.....................................................
50
5.3.1 IRF2 IM RAHMEN VON IMMUNABWEHR UND ONKOGENESE
............................
50
5.3.2 SOCS3 ALS REGULATOR VON STAT1-/STAT3-SIGNALWEGEN
........................
51
5.4 EXPRESSION VON IRF2 UND SOCS3 IN
PCA-PROBEN............................................53
5.5 MODELL ZUR ROLLE VON MIR-221 IM
PCA............................................................ 53
6
ZUSAMMENFASSUNG.........................................................................................
56
7
LITERATURVERZEICHNIS.......................................................................................
8
DANKSAGUNG...........................................................................................................
9 LEBENSLAUF.
|
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