Die Rolle der Transkriptionsfaktoren HIF-1 (hypoxia-inducible factor-1) und HSF-1 (heat shock factor-1) bei der Stressanpassung von Daphnia pulex:
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| Veröffentlicht: |
Münster
2017
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| adam_text | Titel: Die Rolle der Transkriptionsfaktoren HIF-1 (hypoxia-inducible factor-1) und HSF-1 (heat shock factor
Autor: Klumpen, Eva
Jahr: 2017
Inhaltsverzeichnis
I ABBILDUNGSVERZEICHNIS...................................................................................................................................6
II TABELLENVERZEICHNIS.......................................................................................................................................7
III ZUSAMMENFASSUNG........................................................................................................................................8
IV SUMMARY.......................................................................................................................................................10
1 EINLEITUNG..................................................................................................................................................12
2 MATERIAL UND METHODEN.........................................................................................................................22
2.1 Tiere.............................................................................................................................................................22
2.2 Inkubationen unter Stressbedingungen (Hitze, Wasserstoffperoxid und Hunger)..........................................22
2.3 Bestimmung von Sauerstoffradikalen (Reactive oxygen species, ROS)............................................................23
2.4 Bestimmung der zellulären Glutathionkonzentration (GSH) bei Hitze und H202-Inkubationen......................24
2.5 Quantifizierung der Transkriptionsfaktoren HIF-1 und HSF-1......................................................................24
2.5.1 Kernextraktion....................................................................................................................................24
2.5.2 Western Blot.......................................................................................................................................26
2.6 Bioinformatische Analyse.............................................................................................................................28
2.7 Weiter Experimente unter Hungerbedingungen............................................................................................29
2.7.1 Ãœberlebensstudie................................................................................................................................29
2.7.2 Bestimmung der Reservestoffe und Metaboliten...............................................................................30
2.7.3 Physiologische Parameter..................................................................................................................32
2.7.4 mRNA-Expression bestimmter Stoffwechselgene...............................................................................34
2.8 Daten und Auswertung:...............................................................................................................................37
3 ERGEBNISSE..................................................................................................................................................38
3.1 Oxidativer Stress..........................................................................................................................................38
3.1.1 Bioinformatische Analysen.................................................................................................................38
3.1.2 ROS und Glutathion............................................................................................................................46
3.1.3 ROS, HIF-1 und HSF-1..........................................................................................................................48
3.2 Hunger-Stress..............................................................................................................................................51
3.2.1 Verschiedene physiologische Parameter von D. pulex unter Hungerbedingungen............................51
3.2.2 Der Einfluss von Hunger auf die Konzentration metabolischer Intermediate.....................................53
3.2.3 HIF-la Kerntranslokation unter Hungerbedingungen........................................................................54
3.2.4 Expression verschiedener Stoff wechselgene unter Hungerbedingungen...........................................55
4 DISKUSSION..................................................................................................................................................60
4.1 ROS und das Glutathion-Redoxpuffersystem................................................................................................60
4.2 ROS, HIF-1 und HSF-1...................................................................................................................................61
4.3 ROS, HIF-1, HSF-1 und Gen-Expression..........................................................................................................62
4.4 Die Hitzestressantwort von d. pulex.............................................................................................................63
4.5 Kurzes Zwischenfazit....................................................................................................................................64
4.6 Langfristige Hungerbedingungen: Mobilisierung von Energiereserven und metabolischer Umbau................64
4.7 Hungerstoffwechsel und HIF-1....................................................................................................................66
4.8 HIF-1-Zielgene und Stoffwechsel-Anpassungen............................................................................................67
5 REFERENZEN:................................................................................................................................................72
V LEBENSLAUF.....................................................................................................................................................80
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