Die Regulation der Genexpression von dnaB, dnaT und anderen Replikationsgenen von Escherichia coli:
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I NHALTSVKRZHCHN1S
ABKUERZUNGEN
I. EINLEITUNG 1
1. DIE DNA-REPLIKATION IN
ESCHERICHIA COLI 1
1.1.
DIE INITIATION DER REPLIKATION 1
L. 2. DIE ELONGATION DER REPLIKATION 2
1. 3. DIE TERMINATION DER REPLIKATION 4
2. DIE DNA-POLYMERASEN VON
E. COLI 4
2. 1. DIE DNA-POLYMERASE I 5
2. 2. DIE DNA-POLYMERASE II 5
2. 3. DAS DNA-POLYMERASE III-HOLOENZYM 6
3. WEITERE REPLIKATIONSPROTEINE VON
E. COLI 8
3. 1. DAS DNAA-PROTEIN 8
3. 2. DIE DNAB-HELIKASE 9
3. 3. DAS DNAC-PROTEIN 10
3. 4. DAS DNAT-PROTEIN 11
4.
DIE REGULATION VON REPLIKATIONSGENEN
4. 1. DAS DNAB-GEN
4. 2. DAS DNATC-OPERON
4. 3. DAS DNAZX-GEN
4. 4. DAS POLA-GEN
4. 5. DIE INDUZIERBARKEIT VON REPLIKATIONSGENEN DURCH NICHTCODIERENDE
DNA-SCHAEDEN
12
12
12
13
14
15
II. MATERIAL UND METHODEN
16
5. BAKTERIENSTAEMME, PHAGEN UND PLASMIDE 16
6. MATERIAL UND METHODEN FUER BAKTERIENGENETISCHE ARBEITEN 20
6.1.
MEDIEN UND CHEMIKALIEN 20
6. 2. METHODEN 23
6. 2. 1. STAMMHALTUNG 23
6. 2. 2. UEBERPRUEFUNG GENETISCHER MARKER 23
6. 2. 3. STAMMKONSTRUKTION MIT DEM PHAGEN PI 24
6. 2. 4. EMS-MUTAGENESE 25
7. UNTERSUCHUNG DER PROMOTORAKTIVITAET MIT HILFE VON /ACZ-FUSIONEN 25
7. 1. CHROMOSPOT-TEST (MODIFIZIERT NACH QUILLARDET U. HOFNUNG
1985) 25
7. 2. SS-GALACTOSIDASE-ASSAY (NACH MILLER 1972) 26
7. 2. 1. MEDIEN UND CHEMIKALIEN 26
7. 2. 2. DURCHFUEHRUNG 27
7. 2. 3. DARSTELLUNG DES ZEITLICHEN VERLAUFS DER SS-GALACTOSIDASE-AKTIVI-
TAET NACH EINWIRKUNG VON AGENZIEN 27
7. 2. 4. DARSTELLUNG DES ZEITLICHEN VERLAUFS DER SS-GALACTOSIDASE-AKTIVI-
TAET NACH UV-BESTRAHLUNG 28
7. 3. TESTSUBSTANZEN 28
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/941709639
8. MATERIAL UND METHODEN FUER GENTECHNISCHE ARBEITEN 28
8. 1. STANDARDLOESUNGEN (NACH SAMBROOK ET AL. 1989) 28
8. 2. ISOLATION VON NUCLEINSAEUREN 29
8. 2. 1. MINIPRAEPARATION VON PLASMID-DNA (MODIFIZIERT NACH BIRN-
BOIM U. DOLY 1979) 29
8. 2. 2. PLASMID-MIDIPRAEPARATION 30
8. 2. 3. ISOLATION CHROMOSOMALER DNA (MODIFIZIERT NACH
SILHAVY ET
AL. 1989) 30
8. 2. 4. ISOLATION VON GESAMT-RNA (NACH BROSIUS ET AL. 1982) 31
8. 3. PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUCLEINSAEUREN 31
8. 4. ENZYMATISCHE REAKTIONEN 32
8. 5. TRANSFORMATION (NACH MANDEL U. HIGA 1970) 33
8. 6. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON NUCLEINSAEUREN IN AGAROSEGELEN
34
8. 7. SOUTHEM-TRANSFER ( NACH SMITH U. SUMMERS 1980) 34
8. 8. NICHTRADIOAKTIVE DNA-MARKIERUNG. HYBRIDISIERUNG UND IMMUNOLOGI
SCHER NACHWEIS 35
8. 9. PLASMIDSEQUENZIERUNG NACH DER DIDESOXY-METHODE 35
8.10. PROMOTOR-KARTIERUNG DURCH S1-ANALYSE 35
8. 10. 1. LOESUNGEN UND CHEMIKALIEN 35
8. 10. 2. RADIOAKTIVE 5'-ENDMARKIERUNG VON DUEA-FRAGMENTEN 36
8. 10. 3. SL-MAPPING 36
8.11. DENATURIERENDE PAA-HAMSTOFF-GELELEKTROPHORESE 37
III. ERGEBNISSE 38
9. DIE REGULATION DER DNASS-GENEXPRESSION 38
9.1. KONSTRUKTION EINER TRANSLATIONALEN
DNAB'-'LACZ-VM\ON 38
9. 1. 1. SUBKLONIERUNG UND RESTRIKTIONSKARTIERUNG DER
DNAB-REGION AUS
PRLM 31 38
9.1.2.
KONSTRUKTION EINES C/NASS-'/ACZ-FUSIONSPLASMIDS 39
9. 1. 3. INTEGRATION DER
DNAB'-'LACZ-FUSION IN DEN ATTB-ON DES CHROMO
SOMS 39
9. 2. DER EINFLUSS DER TEMPERATUR AUF DIE DNASS-GENEXPRESSION 42
9. 2. 1. DIE EXPRESSION DER
DNAB'-'LACZ-FUSION BEI VERSCHIEDENEN TEM
PERATUREN 42
9. 2. 2. DER EINFLUSS EINES HITZESCHOCKS AUF DIE EXPRESSION DER
DNAB'-
'/ACZ-FUSION 43
9. 3. DER EINFLUSS CHEMISCHER STRESSFAKTOREN AUF DIE
DNAB-GENEXPRESSION 44
9. 3. 1. VORUNTERSUCHUNGEN MIT DEM CHROMOSPOT-TEST 44
9. 3. 2. DER EINFLUSS DNA-SCHAEDIGENDER AGENZIEN AUF DIE
DNAB-GEN
EXPRESSION 44
9. 3. 2. 1. INDUKTION DER DNASS'-'/ACZ-FUSION IM WILDTYP 44
9. 3. 2. 2. INDUKTION DER
DNAB'-'LACZ-FUSION IN DER RECA/-MUTANTE 48
9. 3. 2. 3. INDUKTION DER
DNAB'-'LACZ-FUSION IN DER UVRALOE-MUTANTE 50
9. 3. 2. 4. VERGLEICH DER INDUKTIONSWERTE 52
9. 3. 3. DER EINFLUSS VON GYRASE-INHIBITOREN AUF DIE DNASS-GENEXPRES-
SION 53
9. 3. 3. 1. INDUKTION DER
DNAB - '/ACZ-FUSION DURCH INHIBITOREN DER SS-UNTER-
EINHEIT DER GYRASE 53
9. 3. 3. 2. DAS AUSBLEIBEN DER INDUKTION DURCH INHIBITOREN DER
A-UNTEREIN-
HEIT DER GYRASE 55
9. 4. DER EINFLUSS VON UV-STRAHLUNG AUF DIE DNASS-GENEXPRESSION 57
9. 4. 1. INDUKTION DER DNAB'-'LACZ-FUSION IM WILDTYP 57
9. 4. 2. INDUKTION DER
DNAB'-'LACZ-FUSION IN DER IVCA /-MUTANTE 59
9. 4. 5. INDUKTION DER D/JASS'-'/ACZ-FUSION IN DER T/VRA/6-MUTANTE 59
9. 4. 4. VERGLEICH DER INDUKTIONSWERTE 60
9. 5. DER EINFLUSS VON PI-PHAGEN AUF DIE DNASS-GENEXPRESSION 61
9. 6. DER EINFLUSS DES DNAA-PROTEINS AUF DIE DNASS-GENEXPRESSION 62
9. 7. DIE REGULATION DER TRANSKRIPTION DES DNAB-GENS 64
9. 7. 1. SEQUENZANALYSE DER 5'-REGION DES
DNAB-GENS 64
9. 7. 1. 1. KLONIERUNG DER DNASS-PROMOTORREGION IN DEN SEQUENZIERUNGS
VEKTOR PGEM -7ZF( + ) 64
9.1.
1. 2. PLASMIDSEQUENZIERUNG 65
9.1.
1. 3. COMPUTERANALYSE DER DNA-SEQUENZ 65
9. 7. 2. S1-ANALYSE DER 5-REGION DES
DNAB-GENS 65
9. 8. DIE ISOLATION VON MUTANTEN MIT ERHOEHTER DNASS-GENEXPRESSION 67
10. DIE REGULATION DER
DNAT-GENEXPRESSION 68
10.1. KONSTRUKTION EINER TRANSLATIONALEN
DNAT- '/ACZFUSION 68
10. 1. 1. KONSTRUKTION EINES T/NA/'-'/ACZ-FUSIONSPLASMIDS 68
10. 1. 2. INTEGRATION DER
DNAT-'LACZ-F'IMON IN DEN ATTB-ORT DES CHROMO
SOMS 69
10. 2. DER EINFLUSS EINES HITZESCHOCKS AUF DIE C/NAT-GENEXPRESSION 71
10. 3. DER EINFLUSS CHEMISCHER STRESSFAKTOREN AUF DIE DNAT-GENEXPRES
SION 73
10. 3. I. VORUNTERSUCHUNGEN MIT DEM CHROMOSPOT-TEST 73
10. 3. 2. DER EINFLUSS DNA-SCHAEDIGENDER AGENZIEN AUF DIE
DNAT-GEN
EXPRESSION 73
10. 3. 2. 1. INDUKTION DER CFNAT-'/ACZ-FUSION IM WILDTYP 73
10. 3. 2. 2. INDUKTION DER
DNAT-LACZ-FUSION IN DER RECA /-MUTANTE 75
10. 3. 2. 3. VERGLEICH DER INDUKTIONSWERTE 77
10. 4. DER EINFLUSS VON UV-STRAHLUNG AUF DIE
DNAT-GENEXPRESSION 78
10. 4. 1. INDUKTION DER DNAT- LACZ-FUSION IM WILDTYP 78
10. 4. 2. INDUKTION DER DNAT-'/ACZ-FUSION IN DER
RCCA /-MUTANTE 80
10. 4. 3. VERGLEICH DER INDUKTIONSWERTE 80
11. DER EINFLUSS DES DNAA-PROTEINS AUF DIE CZ/TAZA-GENEXPRESSION 81
12. DER EINFLUSS DES DNAA-PROTEINS AUF DIE
POIA-GENEXPRESSION 84
12. 1. KONSTRUKTION EINER /POS-MUTANTE IM KA 10-HINTERGRUND 84
12. 2. VERGLEICH DES EINFLUSSES VON DNAA-UEBERPRODUKTION AUF DIE
POIA-
GENEXPRESSION IM WILDTYP UND IN DER /POS-MUTANTE 84
IV. DISKUSSION 88
13. ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 88
13. 1. DAS
DNAB-GEN 88
13. 2. DAS
DNAT-GEN 89
13. 3. DAS
DNAZX-GEN 89
13. 4. DAS
POIA-GEN 89
14. DIE TEMPERATURABHAENGIGKEIT DER EXPRESSION DES
DNAB- UND DES DNAT-GENS 90
14. 1. DIE EXPRESSION DER DNAB'-'LACZ-FUSION IST UNTER
HITZESCHOCKBEDINGUN
GEN HERABGESETZT 90
14. 2. DIE EXPRESSION DES
DNAT-GENS WIRD DURCH HITZESCHOCK LEICHT ERHOEHT 91
15. DIE INDUKTION DER
DNAB- UND DER DNAT-GENEXPRESSION DURCH NICHTCODIERENDE
DNA-SCHAEDEN
93
15. 1. DIE INDUKTION DES
DNAB-GCNS 93
15. 2. DIE INDUKTION DES DNATC-OPERONS 95
15. 3. DIE MOEGLICHE BEDEUTUNG EINER ERHOEHTEN EXPRESSION DES
DNAB-GENS UND
DES DNATC-OPERONS NACH REPLIKATIONSBLOCKIERENDER DNA-SCHAEDIGUNG 96
16. DER EINFLUSS VON GYRASE-INHIBITOREN AUF DIE EXPRESSION DES
DNAB-GENS 98
17. DER EINFLUSS VON PI-PHAGEN AUF DIE EXPRESSION DES DNASS-GENS 100
18. DIE REGULATION DER TRANSKRIPTION DES
DNAB-GENS 101
19. DIE ISOLATION VON MUTANTEN MIT ERHOEHTER DNASS-GENEXPRESSION 102
20. DER EINFLUSS DES DNAA-PROTEINS AUF DIE EXPRESSION VON
REPLIKATIONSPROTEINEN 103
20.1. DER EINFLUSS VON DNAA-UEBERPRODUKTION AUF DAS DNAB-GEN 103
20. 2. DER EINFLUSS VON DNAA-UEBERPRODUKTION AUF DAS DNAZX-GTN 104
20.3. DIE ERHOEHUNG DER POIA-GENEXPRESSION DURCH DNAA-UEBERPRODUKTION
UND DAS RPOS-REGULON 105
V. ZUSAMMENFASSUNG 108
ANHANG
ABB. 32: NUCLEOTID-SEQUENZ DES DNAB-GENS
LITERATUR |
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| topic_facet | Genregulation Gen Escherichia coli Replikation Hochschulschrift |
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