Charakterisierung der antagonistischen Wirkung von argininreichen Hexapeptiden am Vanilloidrezeptor von Hinterwurzelganglienneuronen adulter Ratten in Zellkultur mittels Calcium Imaging:
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung
1.1 Schmerz 6
1.1.1 Definition 6
1.1.2 Nozizeptoren 7
1.2 DRG Neurone 9
1.3 Capsaicin 11
1.4 Vanilloidrezeptor 14
1.5 Stimulation vanilloidempfindlicher Neurone 16
1.6 Antagonisten 19
1.6.1 Capsazepin 19
1.6.2 Ruthenium Rot und lodo Resiniferatoxin (IRTX) 20
1.6.3 Argininreiche Hexapeptide 20
1.7 Zielsetzung 22
2 Material und Methode
2.1 Herstellen der Zellkultur 23
2.1.1 Tiere und Tierhaltung 23
2.1.2 Allgemeine Arbeitstechniken 23
2.1.3 Präparation und Anlegen der Zellkultur 25
2.2 Calcium Analytik 27
2.2.1 Einführung 27
2.2.2 Exzitation und Emission 27
2.2.3 Fluoreszenzfarbstoffe 28
2.2.4 Der Fluoreszenzfarbstoff Fura-2 28
2.2.5 Die Acetoxymethylester (AM-Ester) Beladungstechnik 30
2.2.6 Allgemeine Probleme mit Fluoreszenzfarbstoffen 32
2.2.7 Die Ratiometrische Messmethode 33
2.2.8 Isolektin B4 35
2.2.9 Calcium Kalibrierung 36
3
2.3 Meßstand 37
2.3.1 Mikroskopie 37
2.3.1.1 Fluoreszenz in der Mikroskopie 37
2.3.1.2 Filter und Strahlteiler für die Mikroskopie 37
2.3.1.3 Strahlengang 39
2.3.2 Aufbau des Messstandes 40
2.3.3 Pumpsystem 40
2.3.4 Messkammer 41
2.3.5 Monochromator 41
2.3.6 Strahlengang 42
2.3.7 Datenaufnahme und Verarbeitung 42
2.3.8 Durchführung der Calcium Messung 43
2.3.8.1 Auffinden der Zellen 43
2.3.8.2 Stimulation der Zellen 43
2.3.9 Datenvisualisierung und Auswertung 44
2.3.9.1 Statistische Berechnungen 44
2.3.9.2 Schild Plot 45
3 Ergebnisse
3.1 Ergebnisse Versuchsdurchführung 47
3.2 Ergebnisse Konzentrations-Wirkungs-Kurven 50
3.3 Ergebnisse Schild-Plot 53
3.4 Ergebnisse Isolektin B4 55
3.5 Ergebnisse Kalibration 57
4 Diskussion 59
5 Zusammenfassung 65
6 Literaturverzeichnis 68
7 Anhang 74
4
|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung
1.1 Schmerz 6
1.1.1 Definition 6
1.1.2 Nozizeptoren 7
1.2 DRG Neurone 9
1.3 Capsaicin 11
1.4 Vanilloidrezeptor 14
1.5 Stimulation vanilloidempfindlicher Neurone 16
1.6 Antagonisten 19
1.6.1 Capsazepin 19
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1.6.3 Argininreiche Hexapeptide 20
1.7 Zielsetzung 22
2 Material und Methode
2.1 Herstellen der Zellkultur 23
2.1.1 Tiere und Tierhaltung 23
2.1.2 Allgemeine Arbeitstechniken 23
2.1.3 Präparation und Anlegen der Zellkultur 25
2.2 Calcium Analytik 27
2.2.1 Einführung 27
2.2.2 Exzitation und Emission 27
2.2.3 Fluoreszenzfarbstoffe 28
2.2.4 Der Fluoreszenzfarbstoff Fura-2 28
2.2.5 Die Acetoxymethylester (AM-Ester) Beladungstechnik 30
2.2.6 Allgemeine Probleme mit Fluoreszenzfarbstoffen 32
2.2.7 Die Ratiometrische Messmethode 33
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2.3 Meßstand 37
2.3.1 Mikroskopie 37
2.3.1.1 Fluoreszenz in der Mikroskopie 37
2.3.1.2 Filter und Strahlteiler für die Mikroskopie 37
2.3.1.3 Strahlengang 39
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2.3.6 Strahlengang 42
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2.3.8 Durchführung der Calcium Messung 43
2.3.8.1 Auffinden der Zellen 43
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2.3.9 Datenvisualisierung und Auswertung 44
2.3.9.1 Statistische Berechnungen 44
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