Entwicklung und Charakterisierung bispezifischer Antikörper-Derivate zur Immuntherapie CD19-positiver Leukämien und Lymphome:
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| adam_text | Titel: Entwicklung und Charakterisierung bispezifischer Antikörper-Derivate zur Immuntherapie CD19-positiv
Autor: Kellner, Christian
Jahr: 2009
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis Seite
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
1.1 Abstract 1
1.2 Zusammenfassung 2
2 EINLEITUNG 3
2.1 Lymphome und Leukämien 3
2.1.1 Lymphome und Leukämien der B-Zellreihe 4
2.1.1.1 Hodgkin-Lymphome 5
2.1.1.2 Non-Hodgkin-Lymphome 6
2.1.1.3 Chronische lymphozytische Leukämie der B-Zellreihe (B-CLL) 8
2.1.1.4 Akute lymphoblastische Leukämie der B-Zellreihe (B-ALL) 11
2.1.2 Nebenwirkungen konventioneller Therapieansätze 12
2.2 Antikörper-basierte Strategien in der Krebstherapie 14
2.2.1 Wirkmechanismen therapeutischer Antikörper 14
2.2.2 Antikörper als Vehikel 17
2.2.3 Antikörper in der Therapie hämatologischer Neoplasien 19
2.2.4 Limitierungen monoklonaler Antikörper 22
2.3 Bispezifische Antikörper als Immuntherapeutika 23
2.3.1 Bispezifische Antikörper zur Rekrutierung von Effektorzellen 23
2.3.2 Klassische Formate bispezifischer Antikörper 24
2.3.3 Rekombinante bispezifische Antikörper-Derivate 26
2.3.4 Limitierungen rekombinanter bispezifischer Antikörper-Derivate 30
2.4 Zielstrukturen auf Effektorzellen 31
2.4.1 Auswahl der Effektorzellpopulation durch Wahl der Zielstruktur 31
2.4.2 Der Fcy-Rezeptor III (CD16) auf NK-Zellen und Makrophagen 32
2.5 Zielstrukturen auf Tumorzellen für eine Antikörper-basierte Therapie 33
2.5.1 Allgemeine Anforderungen für Zielantigene auf Tumorzellen 33
2.5.2 Zielstrukturen auf B-lymphoiden Neoplasien 34
2.5.3 CD19 als Zielstruktur zur Immuntherapie B-lymphoider Neoplasien 36
I
Inhaltsverzeichnis
PROBLEMSTELLUNG
38
39
39
42
43
46
4 ERGEBNISSE
4.1 Herstellung und Charakterisierung rekombinanter bispezifischer
Fab-scFv Fusionsproteine gegen CD19 und CD16 39
4.1.1 Konstruktion der Expressionsvektoren für den bstb [Fab19xds19xds16]
und den bsbb [Fab19xds16]
4.1.2 Expression und Aufreinigung des bstb [Fab19xds19xds16] und des
bsbb[Fab19xds16]
4.1.3 Analyse der Bindungseigenschaften des bstb [Fab19xds19xds16] und
desbsbb[Fab19xds16]
4.1.4 Analyse der Bindungsstärken des bstb [Fab19xds19xds16] und des
bsbb[Fab19xds16]
4.1.4.1 Bestimmung der Gleichgewichtskonstante (Ko) 4°
4.1.4.2 Bestimmung der Retentionszeit auf Antigen-positiven Zellen in vitro 47
4.1.5 Bestimmung der Stabilität des bstb [Fab19xds19xds16] und des bsbb
[Fab19xds16] in humanem Serum in vitro 49
4.1.6 Untersuchungen zur Vermittlung der zellulären Zytotoxizität durch den
bstb [Fab19xds19xds16] und den bsbb [Fab19xds16l in vitro 50
4.1.6.1 Analyse der Antigen-spezifischen zellulären-Zytotoxtzität des bstb
[Fab19xds19xds16] und des bsbb [Fab19xds16] 51
4.1.6.2 Vergleichende Analyse des ADCC-Potentials der Antikörper-Derivate
bstb [Fab19xds19xds16], bsbb Fab[19xds16] und bsscFv [19x16] 53
4.1.6.3 Zytotoxische Aktivität des bstb [Fab19xds19xds16] und des bsbb
[Fab19xds16] gegenüber primären Tumorzellen 55
4.2 Herstellung und funktionelle Charakterisierung des bispezifischen
single-chain Fv triple-bodys ds[19x16x19] 57
4.2.1 Herstellung eines Expressionsvektors für den sctb ds[19x16x19] 57
4.2.2 Bindungsstudien mit dem «spezifischen sctb [33xds16xds19] zur
Analyse der Funktionalität des single-chain Fv triple-body Formats 58
4.2.3 Eukaryotische Expression und Aufreinigung des sctb ds[19x16x19] 60
4.2.4 Analyse der Bindungseigenschaften des sctb ds[19x1619] 61
4.2.5 Vergleich der Bindungsstärken des sctb ds[19x16x19] und des
bsscFv ds(19x16] 63
Inhaltsverzeichnis
4.2.5.1 Bestimmung der Gleichgewichtskonstante (KD) 63
4.2.5.2 Kompetitive Inhibition des parentalen CD19 Antikörpers 64
4.2.5.3 Bestimmung der Zelloberflächenretention in vitro 66
4.2.6 Bestimmung der Stabilität des sctb ds[19x16x19] und des bsscFv
ds[19x16] in humanem Serum in vitro 67
4.2.7 Bestimmung der Plasmaretention des sctb ds[19x16x19] und des
bsscFv ds[19x16] in Mäusen 68
4.2.8 Untersuchungen zur Vermittlung der zellulären Zytotoxizität durch den
sctb ds[19x16x19] und den bsscFv ds[19x16] 70
4.2.8.1 Nachweis der Antigen-spezifischen Induktion der zellulären Zytotoxi-
zität durch den sctb ds[19x16x19] 70
4.2.8.2 Vergleichende Untersuchungen zur Vermittlung der zellulären Zytotoxi-
zität durch den sctb ds[19x16x19] und den bsscFv ds[19x16] 72
4.2.8.3 Zytotoxische Aktivität des sctb ds[19x16x19] und des bsscFv ds[19x16]
gegen primäre Leukämie- und Lymphomzellen 74
5 DISKUSSION 78
6 MATERIAL UND METHODEN 91
6.1 Materialien 91
6.1.1 Chemikalien und Enzyme 91
6.1.2 Allgemeine Puffer und Lösungen 91
6.1.3 Vektoren 91
6.1.4 Oligonukleotide 91
6.1.5 Bakterienstämme 93
6.1.6 Zellkulturmedien 93
6.1.7 Zelllinien 93
6.1.8 Mäuse 94
6.1.9 Antikörper 94
6.2 Methoden 95
6.2.1 Allgemeine Methoden 95
6.2.2 Klonierungen 95
6.2.2.1 Herstellung der Expressionsvektoren für die bispezifischen Fab-scFv
Fusionsproteine 95
Inhaltsverzeichnis
6.2.2.2 Herstellung der Expressionsvektoren für die scFv triple-bodies 97
6.2.3 Expression der rekombinanten Antikörper-Derivate und der GFP- und
RFP- Fusionsproteine in 293T Zellen 98
6.2.4 Aufreinigung monoklonaler Antikörper aus Hybridomen 99
6.2.5 SDS-PAGE und Western-Transfer Experimente 99
6.2.6 Durchflusszytometrische Methoden 99
6.2.6.1 Nachweis der spezifischen und simultanen Bindung 100
6.2.6.2 Bestimmung der Gleichgewichtskonstante (Kd) 100
6.2.6.3 Bestimmung der Serumstabilität in vitro 101
6.2.6.4 Bestimmung der Zelloberflächenretention in vitro 101
6.2.6.5 Kompetitive Inhibition der Bindung des parentalen Antikörpers 4G7 102
6.2.7 Bestimmung der Plasmaretention in Mäusen 102
6.2.8 Isolierung mononukleärer Zellen (MNCs) 102
6.2.9 Zytotoxizitätsexperimente 103
6.2.10 Graphische Auswertung und statistische Analysen 103
7 LITERATUR 105
8 WEITERE INFORMATIONSQUELLEN UND INTERNETSEITEN 121
9 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 122
10 EIGENE VERÖFFENTLICHUNGEN 124
IV
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| spelling | Kellner, Christian 1976- Verfasser (DE-588)137154259 aut Entwicklung und Charakterisierung bispezifischer Antikörper-Derivate zur Immuntherapie CD19-positiver Leukämien und Lymphome von Christian Kellner [2009] VII, 884 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2008 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek gewährleistet Antigen CD19 (DE-588)4576107-3 gnd rswk-swf Leukämie (DE-588)4035487-8 gnd rswk-swf Immuntherapie (DE-588)4026640-0 gnd rswk-swf Lymphom (DE-588)4036760-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Leukämie (DE-588)4035487-8 s Immuntherapie (DE-588)4026640-0 s Antigen CD19 (DE-588)4576107-3 s DE-604 Lymphom (DE-588)4036760-5 s Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus-12358 https://open.fau.de/handle/openfau/780 Verlag kostenfrei Volltext https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus-12358 Resolvingsystem http://d-nb.info/992510678/34 HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=017068555&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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