Quantitative Charakterisierung des Chimärismus von Lymphozyten-Subpopulationen in Verbindung mit der Analyse der minimalen Resterkrankung zur gezielten Steuerung der Immunsuppression nach allogener Stammzelltransplantation mit reduzierter Konditionierung mit Hilfe der real time PCR Technologie:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 10
1 EINLEITUNG 11
1.1 HISTORISCHER UEBERBLICK 11
1.2 FORMEN DER KNOCHENMARKTRANSPLANTATION (KMT) 11
1.2.1 AUTOLOGE KMT 11
1.2.2 AILOGENE KMT 12
1.3 AILOGENE STAMMZELLTRANSPLANTATION 12
1.4 REDUZIERTE KONDITIONIERUNGSTHERAPIEN 13
1.5 GRAFT VERSUS HOST DISEASE (GVHD) 14
1.6 DAS REZIDIV 15
1.6.1 MOEGLICHKEITEN DER REZIDIVUEBERWACHUNG 15
1.7 MOEGLICHKEITEN, EIN DROHENDES REZIDIV ODER GVHD ZU BEEINFLUSSEN 16
1.7.1 SPENDER-LYMPHOZYTEN GABE 16
1.7.2 IMMUNSUPPRESSION 16
1.8 CHIMAERISMUSSTATUS NACH ALLOGENERSZT 17
1.8.1 BEDEUTUNG DES CHIMAERISMUSSTATUS 17
1.8.2 METHODEN ZUR CHIMAERISMUSANALYSE 18
1.9 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 20
2 MATERIAL 21
2.1 PATIENTENMATERIAL 21
2.2 REAGENZIEN 22
2.2.1 ZELLSEPARATION UND LAGERUNG 22
2.2.2 MAGNETISCHE ZELLSEPARATION 22
2.2.3 DNA-EXTRAKTION 23
2.2.4 QUANTITATIVE REAL-TIME POLYMERASEKETTENREAKTION 23
2.3 ARBEITSMATERIALIEN 23
2.4 GERAETE 24
7
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IMAGE 2
3 METHODEN 26
3.1 ZELLSEPARATION AUS NATIVEM MATERIAL 26
3.1.1 WASCHEN DER ZELLSUSPENSION 26
3.1.2 ZELLZAHL- UND VITALITAETSBESTIMMUNG 26
3.2 MAGNETSEPARATION DER IMMUNZELL-SUBPOPULATIONEN 27
3.2.1 PRINZIP DER MAGNETISCHEN ZELL SEPARATION 27
3.2.2 PROTOKOLL DER MACS SEPARATION 27
3.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS) 28
3.4 DNA-EXTRAKTION 28
3.5 CHIMAERISMUS-ANALYSE 29
3.5.1 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 29
3.5.2 REAL-TIME PCR PARAMETER 31
3.5.3 INFORMATIVE PRIMER 32
3.5.4 STANDARDVERDUENNUNGSREIHE 32
4 ERGEBNISSE 33
4.1 INFORMATIVITAET DER GENETISCHEN MARKER 33
4.2 SENSITIVITAET 34
4.3 REPRODUZIERBARKEIT 36
4.4 PRAEZISION DER REAL-TIME PCR 36
4.5 ISOLIEREN DER GENOMISCHEN DNA 37
4.6 MAGNETSEPARATION DER SUBPOPULATIONEN (MACS) 38
4.7 KLINISCHER FALL 42
5 DISKUSSION 43
5.1 METHODE 43
5.2 ANFORDERUNGEN AN DAS PROBENMATERIAL 44
5.3 ANWENDBARKEIT/INFORMATIVITAET 45
5.4 SENSITIVITAET 46
5.5 SPEZIFITAET 46
8
IMAGE 3
5.6 REINHEIT DER ZELLSUBPOPULATIOENEN 48
5.7 ARBEITSAUFWAND 48
5.8 SCHLUSSFOLGERUNG 49
6 ZUSAMMENFASSUNG 50
7 LITERATURVERZEICHNIS 52
8 LEBENSLAUF 61
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