Entwicklung eines Systems zur enzymatischen Triglyceridbestimmung:
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INHALT
EINLEITUNG
1
STAND
DER
TECHNIK
2
ZIEL
DER
ARBEIT
4
1
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
5
1.1
ENZYME
5
1.1.1
ALLGEMEINES
5
1.1.2
EINTEILUNG
UND
NOMENKLATUR
DER
ENZYME
6
1.1.3
LIPASEN
7
1.1.3.1
ALLGEMEINES
7
1.1.3.2
DER
MECHANISMUS
DER
LIPOLYSE
9
1.1.3.3
CHARAKTERISIERUNG
UND
SPEZIFIZIERUNG
DER
LIPASEN
10
1.1.4
GLYCERINDEHYDROGENASEN
11
1.1.5
DIE
IMMOBILISIERUNG
VON
ENZYMEN
12
1.2
COENZYME,
COSUBSTRATE
UND
PROSTHETISCHE
GRUPPEN
14
1.2.1
ALLGEMEINES
14
1.2.2
DAS
NICOTINAMIDADENINDINUCLEOTID
(NAD+)
14
1.3
FLUORESZENZ
18
1.3.1
ALLGEMEINES
18
1.3.2
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
DER
LUMINESZENZ
18
1.3.3
FLUORESZENZLOESCHUNG
21
1.4
DIE
FLIESS-INJEKTIONS-ANALYSE
23
1.4.1
ALLGEMEINES
23
1.4.2
DIE
STOPPED-FLOW-TECHNIK
24
2
EXPERIMENTELLER
TEIL
26
2.1
DIELMMOBILISIERUNG
DER
LIPASE
26
2.1.1
IMMOBILISIERUNG
DURCH
ADSORPTION
27
2.1.2
IMMOBILISIERUNG
DURCH
EINKAPSELUNG
27
2.1.2.1
CELLULOSE-ACETAT
ALS
POLYMERMATRIX
27
2.1.2.2
ACRYLAMIDGEL
ALS
POLYMERMATRIX
28
2.1.3
IMMOBILISIERUNG
DURCH
KOVALENTE
BINDUNG
AN
DAS
TRAEGERMATERIAL
29
2.1.3.1
NYLON
ALS
TRAEGERMATERIAL
29
2.1.3.2
VA-EPOXY-BIOSYNTH
ALS
TRAEGERMATERIAL
31
2.1.3.3
GLAS
ALS
TRAEGERMATERIAL
32
2.1.4
BEURTEILUNG
DER
IMMOBILISIERUNGSVERFAHREN
36
2.2
FERTIGUNG
UND
KALIBRATION
VON
PH-MIKROEINSTICHELEKTRODEN
39
INHALT
2.3
UNTERSUCHUNGEN
ZU
DETEKTIONSMOEGLICHKEITEN
FUER
FETTSAEUREN
4
I
2.3.1
POTENTIOMETRISCHE MESSUNGEN
41
2.3.1.1
DARSTELLUNG
DER
EXPERIMENTELLEN
VORLEISTUNGEN
GREBENKAEMPERS
41
2.3.1.2
UEBERPRUEFUNG
DES
MESSAUFBAUS
43
2.3.1.3
UEBERPRUEFUNG
DES
REAKTIONSABLAUFES
45
2.3.1.4
THEORETISCHE
BERECHNUNG
VON
UMSATZDAUER
UND
-MENGE
EINER
ENZYMATISCHEN
TRIGLYCERIDBESTIMMUNG
45
2.3.1.5
BEURTEILUNG
DER
BISHERIGEN
RESULTATE
UND
KONSEQUENZEN
47
2.3.1.6
MESSUNGEN
MIT
EINER
PH-EINSTABMESSKETTE
48
2.3.2
KONDUKTOMETRISCHE MESSUNGEN
53
2.3.2.1
ALLGEMEINES
53
2.3.2.2
DURCHFUEHRUNG
DER
MESSUNGEN
53
2.3.3
ABSCHLIESSENDE
BEURTEILUNG
56
2.4
EMULSIONEN
57
2.4.1
ALLGEMEINES
57
2.4.2
DAS
HYDROPHILE-LIPOPHILE-BALANCE
SYSTEM
(HLB-SYSTEM)
57
2.4.3
UNTERSUCHUNGEN
AN
UND
MIT
DEN
EMULSIONEN
59
2.4.3.1
AUSWAHL
DES
ZU
EMULGIERENDEN
TRIGLYCERIDS
UND
DER EMULGATOREN
59
2.4.3.2
TECHNIKEN
DER
EMULSIONSHERSTELLUNG
59
2.4.3.3
EMULSIONSHERSTELLUNG
UND
QUALITAETSKONTROLLEN
61
2.4.4
AKTIVITAETSUNTERSUCHUNGEN
DER
LIPASEN
IN
GEGENWART
VON
BRIJ
96
66
2.5
UNTERSUCHUNGEN
ZU
DETEKTIONSMOEGLICHKEITEN
FUER
GLYCERIN
69
2.5.1
MOEGLICHKEITEN
DER
GLYCERINBESTIMMUNG
69
2.5.2
VORUNTERSUCHUNGEN
MIT
EINEM
REGISTRIERENDEN
SPEKTRALPHOTOMETER
70
2.5.2.1
APPARATIVER
AUFBAU
70
2.5.2.2
FLUORIMETRISCHE
NADH-BESTIMMUNG
IN
TRUEBEN
LOESUNGEN
70
2.5.2.3
EINFLUSS
VON
PH-WERT
UND
NAD+-KONZENTRATION
AUF
DIE
NADH-FLUORESZENZ
73
2.5.2.4
DIE
ABHAENGIGKEIT
DER
GDH-AKTIVITAET
VOM
PH-WERT
75
2.S.2.5
OPTIMIERUNG DER
NAD+-KONZENTRATION
76
2.5.2.6
KALIBRATIONSKURVEN
FUER
GLYCERIN
77
2.5.3
ENZYMATISCHE
TRIGLYCERIDBESTIMMUNG
IN
EINEM
REGISTRIERENDEN
SPEKTRALPHOTOMETER
78
2.5.3.1
KALIBRATIONSKURVE
FUER
OLIVENOEL
78
2.5.3.2
OPTIMIERUNG
DER
LIPOLYSE
79
2.5.4
IMMOBILISIERUNG
DER
GDH
85
INHALT
2.6
MESSUNGEN
IN
EINEM
FIA-SYSTEM
90
2.6.1
DAS
FIA-SYSTEM
I
90
2.6.1.1
APPARATIVER
AUFBAU
90
2.6.1.2
OPTIMIERUNG
DES
SYSTEMS
92
2.6.1.3
KALIBRATIONSKURVE
FUER
GLYCERIN
94
2.6.1.4
TRIGLYCERIDBESTIMMUNG
95
2.6.1.5
BEURTEILUNG
DES
FIA-SYSTEMS
I
UND
NOTWENDIGE
KONSEQUENZEN
98
2.6.2
DAS
FIA-SYSTEM
II
99
2.6.2.1
APPARATIVER
AUFBAU
99
2.6.2.2
PROGRAMMIEREN
DES
EVA-MASTERS
103
2.6.2.3
NADH-MESSUNGEN
103
2.6.2.4
KALIBRATIONSKURVE
FUER
GLYCERIN
105
2.6.2.5
ALLGEMEINE
VORUEBERLEGUNGEN
ZUR
TRIGLYCERIDBESTIMMUNG
106
2.6.2.6
DAS
DIFFERENZMESSVERFAHREN
1
107
2.6.2.7
DAS
DIFFERENZMESSVERFAHREN
2
108
2.6.2.8
EINFLUSS
DER
GDH-STABILITAET
AUF
DIE
MESSERGEBNISSE
111
2.6.2.9
OPTIMIERUNG
DER
GDH-IMMOBILISIERUNG
112
2.6.3
TRIGLYCERIDBESTIMMUNGEN
114
2.6.3.1
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
114
2.6.3.2
EINFLUSS
DER PUFFERKONZENTRATION
116
2.6.3.2
EINFLUSS
DER
INKUBATIONSZEITEN
116
2.6.3.4
EINFLUSS
DER
INKUBATIONSTEMPERATUR
117
2.6.3.5
TRIGLYCERIDKALIBRATIONSKURVE
119
2.6.3.6
BESTIMMUNG
DES
TRIGLYCERIDGEHALTES
IN
MILCH
122
3
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
124
4
ANHANG
I
4.1
TABELLEN
I
4.2
CHEMIKALIEN
UND
MATERIALIENLISTE
IV
4.3
GERAETELISTE
VII
4.4
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
IX
4.5
LITERATUR
XI |
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