Nachweis des T-Zell-Rezeptor-gamma Rearrangements in Paraffinschnitten:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
E
INLEITUNG
.
6
2.
LITORTUZFFBRIAHT
.
7
2.1.
LYMPHOZYTEN
.
7
2.2.
T-ZELL-ENTWICKLUNG
.
7
2.3.
ANTIGENSPEZIFITAET
DER
T-ZELLEN
.
7
2.4.
REARRANGEMENT
UND
SELEKTION
.
9
2.5.
DIE
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(POLYMERASE
CHAIN
REACTION
=
PCR)
.
10
2.6.
DIE
BEDEUTUNG
DER
PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
GENREARRANGEMENTS
.
13
2.7.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
TECHNIKEN
IN
DER
DIAGNOSTIK
VON
LYMPHOMEN
.
13
3.
EIGENE
UNTERSUCHUNGEN
.
16
3.1.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
16
3.1.1.
DNS
AUS
PERIPHEREN
LEUKOZYTEN
(PBL'S)
UND
ZELL
LINIEN
.
16
A.
HERKUNFT
UND
QUALITAET
DER
PBL'S
.
16
B.
ZELL-LINIEN
.
16
C.
ISOLIERUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
.
16
D.
PROTEINASE-K-VERDAUUNG
.
16
E.
DNS-EXTRAKTION
MIT
PHENOL/CHLOROFORM
.
16
F.
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
DNS
LOESUNG
.
17
G.
QUALITAETSKONTROLLE
DER
DNS
.
17
3.1.2.
PARAFFINSCHNITTE
.
18
A.
UNTERSUCHUNGSGUT
.
18
B.
DNS-ISOLATION
AUS
IN
PARAFFIN
EINGEBETTETEM
MATERIAL.
20
C.
BESTIMMUNG
DER
QUANTITAET
UN.D.'QUEALITAET
'
DER
.DNS
AUS
PARAFFINSCHNITTEN
.
J.I
.
.
.'.
.
20
3.1.3.
PRIMER
.
21
A.L
TCR-SS-PRIMER
.
21
A.2
TCR-Y-PRIMER
.
22
B.
AUFARBEITUNG
DER
FRISCH
SYNTHETISIERTEN
PRIMER
LOESUNG
.
23
C.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
PRIMER-STAMMLOESUNG
.
23
D.
HERSTELLUNG
DER
GEBRAUCHSFERTIGEN
LOESUNGEN
.
23
3.1.4.
PCR-REAKTION
.
24
A.
MATERIAL
.
24
B.
PCR-ANSATZ
.
24
C.
PCR-THERMOZYKLER-PROGRAMM
.
24
3.1.5.
GEL-ELEKTROPHORESE
.
25
3.1.6.
SEQUENZIERUNG
DER
AMPLIFIZIERTEN
PCR-PRODUKTE
.
26
A.
HERSTELLUNG
EINER
AUSREICHENDEN
PROBENMENGE
.
26
B.
ELUTION
DER
DNS
NACH
GELELEKTROPHORETISCHER
AUFTRENNUNG
.
26
YY
C.
KONTROLLE
DER
DNS-ELUTION
.
27
D.
SEQUENZREAKTION
MIT
DEM
TAQ
DYE
TERMINATOR
CYCLE
SEQUENCING
KIT
.
27
E.
AUFARBEITUNG
DER
GEWONNENEN
PRODUKTE
.
28
3.2.
BEGEBNISSE
.
29
3.2.1.
AUSWAHL
DER
PRIMER
.
29
3.2.1.
A
.
AUSWAHL
UND
TEST
DER
TCR-SS-PRIMER
.
29
3.2.1.
B.
AUSWAHL
DER
TCR-Y-PRIMER
.
32
3.2.2.
EINSTELLUNG
DER
TCR-Y-PCR.
35
3.2.3.
OPTIMIERUNG
DER
DARSTELLUNGSWEISE
DER
PCR-PRODUKTE
AUF
DEN
GELEN
.
37
3.2.4.
ERGEBNISSE
DER
SEQUENZIERUNG
.
44
4.
DISKUSSION
.
45
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
48
6.
SUMMARY
.
4
8
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
49
8.
ANHANG
.
54
8.1.
PUFFER
UND
STANINLOESUNGEN
.
54
8.2.
BEZUGSQUELLEN
FUER
CHEMIKALIEN
.
55
8.3.
ABKUERZUNGEN
.
56 |
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