Die Regulation von Proliferation und Bindegewebsmetabolismus dermaler Fibroblasten durch die rekombinanten Wachstumsfaktoren PDGF-AB, IGF-I und TGF-beta-1: Zell- und molekularbiologische Untersuchungen zum Einfluß von Wachstumsfaktoren während der kutanen Wundheilung:
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2000
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1
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
4
I.
EINLEITUNG
.
5
1.1.
AUFBAU
UND
FUNKTION
DES
DERMALEN
BINDEGEWEBES
.
7
1.1.1.
BINDEGEWEBSZELLEN
.
7
1.1.2.
BINDEGEWEBSPROTEINE
.
9
1.1.3.
KOLLAGENSTOFFWECHSEL
.
15
1.1.3.1.
KOLLAGENSYNTHESE
.
15
1.1.3.2.
MATRIX-METALLOPROTEINASEN
.
16
1.1.3.3.
REGULATION
DES
KOLLAGENSTOFLWECHSELS
.
21
I.2.
WACHSTUMSFAKTOREN
ALS
MEDIATOREN
ZELLULAERER
FUNKTIONEN
.
24
1.2.1.
PLATELET-DERIVED
GROWTH
FACTOR
(PDGF)
.
25
I.2.2.
INSULIN-IIKE
GROWTH
FACTOR
(IGF)
.
28
I.2.3.
TRANSFORMING
GROWTH
FACTOR-SS
(TGF-SS)
.
31
I.3.
DER
BINDEGEWEBSMETABOLISMUS
IM
KONTEXT
DER
KUTANEN
WUNDHEILUNG
.
33
1.3.1.
PHASEN
DER
WUNDHEILUNG
.
33
I.3.2.
BEDEUTUNG
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
BEI
DER
WUNDHEILUNG
.
37
1.
3.2.1.
FREISETZUNG
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
WAEHREND
DER
WUNDHEILUNG
.
38
I.3.2.2.
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DEN
HEILUNGSVERLAUF
.
39
I.4.
FRAGESTELLUNG
.
41
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
42
11.1.
CHEMIKALIEN
UND
RADIOCHEMIKALIEN
.
42
11.1.1.
ZELLKULTUR
.
42
11.1.2.
INKUBATION
MIT
WACHSTUMSFAKTOREN
.
42
11.1.3.
3
H-THYMIDIN-EINBAU
IN
DNS
.
43
11.1.4.
35
S-METHIONIN-EINBAU
IN
PROTEINE
.
43
11.1.5.
PLASMIDISOLIERUNG
.
44
11.1.6.
RNS-ISOLIERUNG
UND
NORTHEM-BLOT-ANALYSE
.
44
11.1.7.
IMMUNPRAEZIPITATION
UND
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
46
11.1.8.
3
H-PROLIN-EINBAU
.
47
2
INHALTEVERZEICHNIS
11.2.
GERAETE
.
48
11.3.
METHODEN
.
50
11.3.1.
ZELLKULTUR
.
50
11.3.1.1.
GEWINNUNG
HUMANER
FIBROBLASTENZELLINIEN
.
50
11.3.1.2.
KULTIVIERUNG
VON
FIBROBLASTEN
IN
DER
MONOLAYERKULTUR
.
50
II.
3.2.
INKUBATION
MIT
WACHSTUMSFAKTOREN
.
51
II.
3.3.
BESTIMMUNG
DER
PROLIFERATION
.
51
11.3.3.1.
ERMITTLUNG
DER
ZELLZAHL
.
51
II.
3.3.2.
3
H-THYMIDIN-EINBAU
IN
DNS
.
52
II.
3.4.
DOKUMENTATION
DER
ZELLMORPHOLOGIE
.
52
II.
3.5.
EINBAU
VON
35
S-METHIONIN
BEI
DER
PROTEINSYNTHESE
.
52
II.3.6.
PLASMIDISOLIERUNG
UND
GEWINNUNG
VON
CDNS-FRAGMENTEN
.
53
II.
3.7.
RNS-ISOLIERUNG
UND
NORTHERN-BLOT-ANALYSE
.
53
11.3.7.1.
RNS-ISOLIERUNG
.
53
II.3.7.2.
RNS-GELELEKTROPHORESE
UND
NORTHEM-BLOT-ANALYSE
.
54
11
.3.7.3.
HYBRIDISIERUNG
DER
RNS
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTER
CDNS
.
55
II.
3.8.
IMMUNPRAEZIPITATION
UND
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
56
11.3.8.1.
VERWENDETE
ANTIKOERPER
.
56
II.
3.8.2.
IMMUNPRAEZIPITATION
AUS
DEN
UEBERSTAENDEN
VON
FIBROBLASTENKULTUREN
.
56
II.3.8.3.
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
57
II.
3.9.
DENSITOMETRISCHE
VERMESSUNG
VON
AUTORADIOGRAMMEN
.
57
11.3.10.
NACHWEIS
DES
NEUSYNTHETISIERTEN
KOLLAGENS
.
57
III.
ERGEBNISSE
.
59
111.1.
KONZENTRATIONSABHAENGIGER
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DIE
PROLIFERATION
VON
FIBROBLASTEN
.
59
III.
1.1.
PDGF-ISOFORMEN
.
59
III.
1.2.
IGF-I
.
63
III.
1.3.
TGF-SS1
.
64
III.2.
VERGLEICH
DER
PROLIFERATIONSFOERDERNDEN
WIRKUNG
VON
PDGF-AB,
IGF-I
UND
TGF-SS1
ALLEIN
UND
IN
VERSCHIEDENEN
KOMBINATIONEN
.
66
III.3.
REGULATION
DER
PROTEINSYNTHESE
VON
HUMANEN
FIBROBLASTEN
DURCH
PDGF-AB,
IGF-I
UND
TGF-SS1
ALLEIN
UND
VERSCHIEDENE
KOMBINATIONEN
.
69
3
INHALTSVERZEICHNIS
111.4.
AENDERUNG
DER
MORPHOLOGIE
VON
DERMALEN
FIBROBLASTEN
NACH
INKUBATION
MIT
PDGF-AB,
IGF-I
UND
TGF-SS1
ALLEIN
UND
VERSCHIEDENEN
KOMBINATIONEN
70
III.5.
REGULATION
DER
SPEZIFISCHEN
MRNS
FUER
KOLLAGEN-TYP-I,
VERSCHIEDENE
MATRIX-METALLOPROTEINASEN
UND
TIMP-1
IN
HUMANEN
DERMALEN
FIBROBLASTEN
DURCH
BEHANDLUNG
MIT
PDGF-AB,
IGF-I
UND
TGF-SS1
ALLEIN
ODER
VERSCHIEDENEN
KOMBINATIONEN
.
73
III.
5.1
REGULATION
DER
SPEZIFISCHEN
MRNS
FUER
KOLLAGEN-TYP-I
.
77
III
.5.2.
REGULATION
DER
SPEZIFISCHEN
MRNS
FUER
MMP-1
,
MMP-3
UND
TIMP-1
.
78
111.6.
EINFLUSS
VON
PDGF-AB,
IGF-I
UND
TGF-SS1
ALLEIN
UND
IN
KOMBINATIONEN
AUF
DIE
SEKRETION
VON
KOLLAGEN,
VERSCHIEDENEN
MATRIX-METALLO
PROTEINASEN
UND
TIMP-1
DURCH
HUMANE
DERMALE
FIBROBLASTEN
.
81
111.6.1.
REGULATION
DER
KOLLAGENSYNTHESE
.
81
III.
6.2.
REGULATION
VON
MMP-1,
MMP-2,
MMP-3,
MMP-1
0
UND
TIMP-1
.
86
IV.
DISKUSSION
.
90
IV.1
.
PROLIFERATION
VON
FIBROBLASTEN
UNTER
DEM
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
90
IV.2.
REGULATION
DES
BINDEGEWEBSSTOFFWECHSELS
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
.
101
IV.3.
AENDERUNG
DER
MORPHOLOGIE
VON
FIBROBLASTEN
UNTER
DEM
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
.114
IV.4.
KOORDINATION
DER
WUNDHEILUNG
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
.
117
V.
ZUSAMMENFASSUNG
.
124
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
.126
VII.
VORABVEROEFFENTLICHUNG
.
159
LEBENSLAUF
.
160 |
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