Untersuchungen zur Struktur und Regulation der glyoxysomalen Malatdehydrogenase Gene aus Brassica napus:
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| Format: | Buch |
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1998
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| adam_text | UNTERSUCHUNGEN ZUR STRUKTUR UND REGULATION DER GLYOXYSOMALEN
MALATDEHYDROGENASE GENE AUS BRASSICA NAPUS INAUGURAL-DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN
FAKULTAET DER RHEINISCHEN FRIEDRICH-WILHELMS-UNIVERSITAET BONN VORGELEGT
VON ULRIKE IMHOFF AUS PRUEM BONN 1998 INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 1
1.1 RAPS ALS VIELFAELTIG NUTZBARE KULTURPFLANZE 1 1.2 PHYSIOLOGISCHE
VORGAENGE DER KEIMUNG 3 1.3 PHYSIOLOGISCHE FUNKTIONEN DER MDH IN
GLYOXYSOMEN UND PEROXISOMEN 5 1.4 DIE ISOFORMEN DER MDH 7 1.5 ZIELE DER
ARBEIT 9 2. MATERIAL UND METHODEN 11 2.1 VERWENDETE MATERIALIEN 11 2.1.1
CHEMIKALIEN UND ENZYME 11 2.1.2 RADIOAKTIVE ISOTOPE, FILME UND MEMBRANEN
11 2.1.3 ANTIKOERPER 11 2.1.4 GERAETE 12 2.1.5 BAKTERIENSTAEMME 12 2.1.6
PLASMIDE 13 2.1.7 GENOMISCHE X-PHAGEN BANK 13 2.1.8 OLIGONUKLEOTIDE 13
2.1.9 PFLAHZENMATERIAL 14 2.1.10 AUSGANGSSEQUENZ DER GLYOXYSOMALEN MDH
14 2.1.11 MEDIEN 15 2.1.12 LAGERUNG VON BAKTERIENSTAEMMEN UND
PHAGENLYSATEN 15 2.1.13 PUFFER UND LOESUNGEN 16 2.2 METHODEN 18 2.2.1
DNA-MODIFIKATIONEN 18 2.2.2 PRAEPARATION UND TRANSFORMATION KOMPETENTER
ZELLEN 18 2.2.3 GEWINNUNG DES PFLANZENMATERIALS 18 2.2.4 SYNTHESE VON
RADIOAKTIV MARKIERTEN SONDEN 19 2.2.5 SYNTHESE VON
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN SONDEN 19 2.2.6 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA 20
2.2.7 PRAEPARATION VON GENOMISCHER PFLANZEN DNA 20 2.2.8 PRAEPARATION VON
.-PHAGEN-DNA 20 2.2.9 AGAROSEGELELEKTROPHORESE UND DNA-AUFREINIGUNG 21
2.2.10 SOUTHERNBLOTANALYSE 21 2.2.11 PRAEPARATION VON GESAMT-RNA UND
POLY-A-RNA 22 2.2.12 NORTHERNBLOTANALYSE 23 2.2.13
POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 23 2.2.14 DNA-SEQUENZANALYSE 24 2.2.15
CDNA-SYNTHESE 24 2.2.16 SYNTHESE VON REKOMBINANTEM PROTEIN 24 2.2.17
GEWINNUNG VON PROTEINROHEXTRAKTEN 25 2 2.18
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 25 2.2.19 WESTERNBLOTANALYSE UND
IMMUNOFARBUNG 25 2.2 20 AKTIVITAETSTEST 25 2.2.21 ABSUCHEN EINER
GENOMISCHEN RAPS-BANK 26 2.2.22 PRIMER-EXTENTION-METHODE 27 2.2.23
TRANSIENTE EXPRESSION MITTELS DER PARTIKEL-BESCHUSS-TECHNIK 28 2.2 24
GUS-ASSAY 28 3. ERGEBNISSE 29 3.1 ISOLIERUNG DER GLYOXYSOMALEN MDH-GENE
AUS RAPS 29 3.1.1 ERSTELLUNG EINER SPEZIFISCHEN SONDE 29 3.1.2
KARTIERUNG DER X-PHAGEN-KLONE 30 3.1.3 SEQUENZANALYSE UND MOSAIKSTRUKTUR
DER BEIDEN GMDH-GENE 31 3.1.4 AMINOSAEURESEQUENZ DER GMDH 40 3.1.5
BESTIMMUNG DER TRANSKRIPTIONSINITIATION 42 3.2 BESTIMMUNG DER KOPIENZAHL
IM GENOM UND URSPRUNG DER GENE 42 3.2.1 ERSTELLUNG SPEZIFISCHER SONDEN
42 3.2.2 KOPIENZAHLBESTIMMUNG BEIDER GENE IM RAPSGENOM 43 3.2.3
ABSTAMMUNGSNACHWEIS BEIDER GMDH-GENE VON DEN PARENTALEN
KREUZUNGSPARTNERN DES RAPSES 45 3.3 EXPRESSIONSSTUDIEN DER GMDH AN HAND
VON MRNA-AKKUMULATION 46 3.3.1 EXPRESSIONSMUSTER DER GMDH 46 3.3.2
EXPRESSIONSMUSTER DER ISOCITRATLYASE AN HAND VON MRNA-AKKUMULATION 50
3.4 UNTERSUCHUNGEN DER GMDH AUF PROTEINEBENE 51 3.4.1
CDNA-SYNTHESE...... 51 3 4.2 ERSTELLUNG EINES EXPRESSIONSSYSTEMES FIIR
REKOMBINANTE GMDH 54 3.4.3 AUFREINIGUNG VON REKOMBINANTER GMDH UND
ANTISERUMREAKTION 55 3.4.4 FUNKTIONSANALYSE DES REKOMBINANTEN PROTEINS
56 3.5 PROMOTORAKTIVITAETSNACHWEIS MIT HILFE DES REPORTERGENES UIDA 57 4.
DISKUSSION 63 4.1 DIE STRUKTUR DER GMDH-GENE AUS RAPS 63 4.2 HERKUNFT
DER BEIDEN GMDH-GENE 65 4.3 TRANSKRIPTIONS-UND TRANSLATIONSSTARTPUNKT 65
4.4 SEQUENZVERGLEICH AUF DNA UND PROTEINEBENE 66 4.5 PUTATIVE
STEUERELEMENTE DER PROMOTOREN 67 4.6 LOKALISATION GLYOXYSOMALER UND
PEROXISOMALER PROTEINE 67 4.7 KEIMUNGS-UND LICHTGESTEUERTE MDH
MRNA-AKKUMULATION 69 4.8 PROMOTORAKTIVITAET DER GMDH-GENE 71 4.9
AUSBLICKE 74 5. ZUSAMMENFASSUNG 75 6. LITERATURVERZEICHNIS 76 7. ANHANG
87 7.1 CDNA-SEQUENZ DER GLYOXYSOMALEN MALATDEHYDROGENASE AUS BRASSICA
NAPITS 87 7.2 SEQUENZVERGLEICH MDH-GEN A UND MDH-GEN B 88 7.3
ABKUERZUNGEN 96
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