Aktivierung von humanen antigen-präsentierenden Zellen durch mykobakterielle Glykolipide:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2014
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| adam_text | AKTIVIERUNG VON HUMANEN ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN DURCH MYKOBAKTERIELLE
GLYKOLIPIDE
DER MEDIZINISCHEN MEDIZINISCHEN FAKULTAET/
DES INSTITUTS FUER KLINISCHE MIKROBIOLOGIE, IMMUNOLOGIE UND HYGIENE
DER
FRIEDRICH-ALEXANDER-UNIVERSITAET
ERLANGEN-NUERNBERG
ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DR. MED.
VORGELEGT VON
KATHARINA HOFMANN
AUS
HEIDELBERG
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ZUSAMMENFASSUNG IV
SUMMARY VI
1 EINLEITUNG 1
1.1 TUBERKULOSE 1
1.1.1 BESONDERHEITEN DER MYKOBAKTERIEN 2
1.1.1.1 DIE MYKOBAKTERIELLE ZELLWAND 2
1.1.2 PATHOGENESE DER INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS 3
1.2 DAS IMMUNSYSTEM 5
1.2.1 ERKENNUNG DES M. TUBERCULOSIS DURCH DAS IMMUNSYSTEM 6
1.2.1.1 ANGEBORENE (INNATE), UNSPEZIFISCHE IMMUNITAET 6
1.2.1.1.1 ZELLULAERE VERTRETER 6
1.2.1.1.2 ERKENNUNG VON ERREGERN DURCH PATHOGENERKENNUNGSREZEPTOREN
(PRR) 7
1.2.1.1.3 C-TYP LEKTIN REZEPTOREN 7
1.2.1.2 ERWORBENE (ADAPTIVE), SPEZIFISCHE IMMUNITAET 10
1.2.1.2.1 ANTIGENPRAESENTATION UND -ERKENNUNG 10
1.2.1.2.2 T-ZELL VERMITTELTE IMMUNANTWORT 12
1.3 IMPFSTRATEGIEN GEGEN TUBERKULOSE 13
1.3.1 BEDEUTUNG DER VAKZINIERUNG 13
1.3.2 BACILLUS CALMETTE-GUERIN (BCG) 14
1.3.3 ENTWICKLUNG VON SUBUNIT-VAKZINEN 15
1.3.4 ADJUVANZIEN 15
1.3.4.1 T REHALOSE-6 ,6 -DIMYKOLAT (TDM) & T REHALOSE-6 ,6 -DIBEHENAT
(TDB) 17
2 FRAGESTELLUNG 18
3 MATERIAL UND
METHODEN 19
3.1 ZELLISOLATION UND -KULTIVIERUNG 19
3.1.1 ISOLATION VON PERIPHERBLUT MONONUKLEAEREN ZELLEN (PBMZS) AUS
HUMANEM
PERIPHEREM BLUT 19
II
3.1.2 ISOLATION VON NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN (PMNS) 21
3.1.3 MACS-ISOLATION VON CD14+ MONOZYTEN 22
3.1.4 MAKROPHAGENDIFFERENZIERUNG 23
3.1.5 ZELLKULTIVIERUNG UND STIMULATION 23
3.2 GIEMSA-FAERBUNG 23
3.3 QUANTITATIVE MRNA-EXPRESSION VON C-TYP-LEKTIN REZEPTOREN 24
3.3.1 RNA-ISOLATION 24
3.3.2 CDNA-PRAEPARATION 25
3.3.3 QUANTITATIVE REAL-TIME TAQMAN PCR 25
3.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS) 29
3.4.1 MESSUNG DER EXPRESSION VON OBERFLAECHENANTIGENEN 29
3.4.2 MESSUNG VON REAKTIVEN SAUERSTOFFSPEZIES (OXIDATIVER BURST) 31
3.5 LAKTATDEHYDROGENASE (LDH) -ASSAY 32
3.6 PROTEINNACHWEIS MITHILFE DES WESTERN BLOTS (WB) 33
4 ERGEBNISSE 38
4.1 UNTERSUCHUNG DER EXPRESSION VON C-TYP LEKTIN REZEPTOREN 38
4.1.1 BASISEXPRESSION VON CLRS AUF MRNA-EBENE 39
4.1.1.1 PBMZS IM VERGLEICH ZU MONOZYTEN 40
4.1.1.2 PBMZS IM VERGLEICH ZU MF I UND MF II 41
4.1.1.3 MONOZYTEN IM VERGLEICH ZU MF* I UND MF* II 43
4.1.1.4 PBMZS IM VERGLEICH ZU GRANULOZYTEN 44
4.1.2 BASISEXPRESSION VON CLRS AUF PROTEINEBENE 46
4.1.2.1 EXPRESSION DES MINCLE-PROTEINS AUF DER OBERFLAECHE VON PMNS 46
4.1.2.2 EXPRESSION DES MINCLE-PROTEINS AUF DER OBERFLAECHE VON MF L/MF II
47
4.1.2.3 WESTERN BLOT 49
4.2 EFFEKTE VON GLYKOLIPIDEN 52
4.2.1 STIMULATION DER PBMZS UND MONOZYTEN MIT GLYKOLIPIDEN, IFN-Y UND
LPS 53
4.2.1.1 AENDERUNG IN DER EXPRESSION VON MINCLE 53
4.2.2 STIMULATION DER MAKROPHAGEN AUS PBMZS (MF L/MF II) UND
EXPRESSIONSAENDERUNG 54
4.2.3 STIMULATION DER MAKROPHAGEN AUS MONOZYTEN (MF* L/MF* II) UND
EXPRESSIONSAENDERUNG 57
4.2.4 REAKTION DER GRANULOZYTEN 59
4.2.4.1 MORPHOLOGIE VON STIMULIERTEN UND UNSTIMULIERTEN GRANULOZYTEN 59
4.2.4.2 GIEMSA-FAERBUNG VON REAKTIVEN GRANULOZYTEN 60
III
4.2.4.3 LDH-ASSAY 61
4.2.4.4 PHAGOZYTOSE-REAKTION VON GRANULOZYTEN 64
4.2.4.4.1 OXIDATIVER BURST 64
4.2.4.4.2 GIEMSA-FAERBUNG VON PHAGOZYTIERENDEN GRANULOZYTEN 70
5 DISKUSSION 71
5.1 DER CLR MINCLE WIRD AUF MRNA-EBENE IN HUMANEN PBMZS UND MONOZYTEN
EXPRIMIERT 71
5.2 PBMZS UND MONOZYTEN REAGIEREN NUR SCHWACH AUF EINE STIMULATION MIT
DEN
GLYKOLIPIDEN TDM UND TDB 71
5.3 HUMANE MO AUS PBMZS (MF I, MF II) UND AUS MONOZYTEN (MF* I, MF* II)
EXPRIMIEREN MINCLE IN GLEICHER WEISE ODER IN GERINGEREM MASSE WIE IHRE
AUSGANGSZELLEN; DIE REAKTION
DER MO AUF GLYKOLIPIDE IST VERNACHLAESSIGBAR 73
5.4 PMNS EXPRIMIEREN DEN CLR MINCLE 79
5.5 PMNS ZEIGEN NACH STIMULATION MIT DEN MYKOBAKTERIELLEN GLYKOLIPIDEN
TDM
UND TDB EINE GESTEIGERTE ANTIBAKTERIELLE REAKTION 80
6 LITERATURVERZEICHNIS 86
ABKUERZUNGEN VIII
EIGENSTAENDIGKEITSERKLAERUNG XII
DANKSAGUNG XIII
LEBENSLAUF XIV
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