Etablierung und Evaluation von DNA-Nachweismethoden und Immunhistologie zur Diagnostik von Bartonella-henselae-Infektionen:
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1999
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INHALSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1.1
TAXONOMIE UND
HISTORIE
VON
BARTONELLA
1
1.2
MIKROBIOLOGISCHE
CHARAKTERISTIKA
VON
BARTONELLA
2
1.2.1
KULTUR,
MORPHOLOGIE
UND
ERREGERANZUCHT
2
1.2.2
BIOCHEMIE
UND
ZELLULAERE
FETTSAEUREN-ANALYSEN
3
1.4.6
WEITERE
INFEKTIONEN
11
13
INFEKTIONSBIOLOGIE
UND
PATHOGENITAETSFAKTOREN
VON
BARTONELLA
4
1.3.1
PATHOGENITAET
VON
BARTONELLA
UND
IMMUNABWEHR
4
1.3.2
TRANSMISSION
VON
BARTONELLA
5
1.3.3
EPIDEMIOLOGIE
VON
B.
HENSELAE
UND
B.
QUINTANA
6
14
DAS KLINISCHE
SPEKTRUM
VON
BARTONELLA-INFEKTIONEN
7
1.4.1
FUENF-T
AGE-FIEBER
7
1.4.2
KATZENKRATZKRANKHEIT
8
1.4.3
BAZILLAERE
ANGIOMATOSE
9
1.4.4
BAZILLAERE
PELIOSIS
HEPATIS
9
1.4.5
ENDOKARDITIS
10
13
DIAGNOSTIK
VON
BARTONELLA-INFEKTIONEN
11
1.5.1
SEROLOGIE
11
1.5.2
KULTUR
11
1.5.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
12
1.6
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
14
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
2.1
MATERIAL
15
2.1.1
GERAETE
15
2.1.2
SONSTIGE
MATERIALIEN
15
2.1.3
CHEMIKALIEN
16
2.1.4
ANTIKOERPER,
ENZYME
UND
PROTEINE
16
2.1.5
VERSUCHSTIERE
17
2.2
BAKTERIEN
17
2.2.1
BAKTERIENSTAEMME
17
2.2.2
KULTURBEDINGUNGEN
18
2.2.2.1
HERSTELLEN
UND
ALIQUOTIEREN
VON
BAKTERIENSUBKULTUREN
18
2.2.3
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
18
2.3
ANTISEREN
19
2.3.1
HERSTELLEN
DER
ANTISEREN
19
2.3.1.1
KANINCHENIMMUNISIERUNG
19
2.3.1.2
NACHWEIS
SPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
NACH
IMMUNISIERUNG
19
2.3.1.3
REINIGUNG
UND
PROTEINBESTIMMUNG
19
2.4
POLYMERASEKETTENREAKTION
20
2.4.1
ENTPARAFFINIEREN
VON
GEWEBSPROBEN
20
2.4.2
HOMOGENISIEREN
VON
GEWEBSPROBEN
21
2.4.3
PROTEINASE-K-VERDAU
VON
GEWEBSPROBEN
21
2.4.4
REINIGEN
DER
DNA
22
2.4.5
YYPRIMER
"
-
SEQUENZEN
23
2.4.6
PCR
ANSAETZE
UND
-PROGRAMME
24
2.4.6.1
NACHWEIS
VON
B.
AENRE/AE-SPEZIFISCHER
16SRDNA
MITTELS
PCR
24
2.4.6.2
NACHWEIS
BARTONE/LA-SPEZIFISCHER
CITRATSYNTHASE
DNA
MITTELS
PCR
24
2.4.6.3
NACHWEIS
VON
AFLPIA
FELIS
DNA
MITTELS
PCR
25
2.4.OE.4
NACHWEIS
VON
PROKARYONTEN
DNA
MITTELS
PCR
25
2.4.7
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
25
2.5
ZELLKULTUR
INFEKTION
26
2.5.1
MEDIEN
UND
REAGENZIEN
26
2.5.2
ZELLEN
UND
BAKTERIEN
26
2.5.3
INFEKTION
VON
ZELLKULTUREN
26
2.5.4
GIMENEZ-FAERBUNG
27
2.6
YYSOUTHERN-BLOTTING
"
UND
DNA-SONDEN-HYBRIDISIERUNG
27
2.6.1
AUSGANGSPUFFER
27
2.6.2
YYSOUTHERN-BLOTTING
"
28
2.6.3
DNA-HYBRIDISIERUNG
MIT
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
28
DOPPELSTRANGSONDEN
2.6.3.1
HERSTELLEN
DER
SONDEN
28
2.6.3.2
HYBRIDISIERUNG
28
2.6.3.3
ENTWICKLUNG
UND
DETEKTION
29
2.6.4
DNA-HYBRIDISIERUNG
MIT
PEROXIDASE-MARKIERTER
EINZELSTRANG
SONDE
UND
DETEKTION MITTELS
YYENHANCED-CHEMI-LUMINESCENCE
"
29
2.6.4.1
VORBEREITUNG
DER
SONDE
29
2.6.4.2
HYBRIDISIERUNG
30
2.6.4.3
ENTWICKLUNG
UND
DETEKTION
30
2.7 IMMUNHISTOLOGIE
UND
INDIREKTER
IMMUNFLUORESZENSTEST
31
2.7.1
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
31
2.7.2
HERSTELLEN
DER
CRYO-SCHNITTE
31
2.7.3
HERSTELLEN
DER
PARAFFIN-SCHNITTE
31
2.7.3.1
ENTPARAFFINIEREN
31
2.7.3.2
BLOCKADE
DER
ENDOGENEN
PEROXIDASE
31
2.7.4
HERSTELLEN
DER
BAKTERIEN-ANTIGENE
32
2.7.5
IMMUNHISTOLOGIE
32
2.7.5.1
PRIMAERANTIKOERPER
32
2.7.5.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
32
2.7.5.3
ENTWICKELN
33
2.7.5.4
GEGENFAERBEN
NACH
MAYER-HAEMALAUN
33
2.7.5.5
ENTWAESSERN
/
EINDECKEN
/
AUSWERTEN
33
2.7.6
INDIREKTER
IMMUNFLUORESZENZTEST
33
2.7.6.1
PRIMAERANTIKOERPER
34
2.7.6.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
34
2.7.6.3
EINDECKEN
/
AUSWERTEN
34
2.7.7
HE-FAERBUNG
34
2.8
MAUSINFEKTIONSVERSUCHE
34
2.8.1
VORBEHANDLUNG
UND
INFEKTION
DER
MAEUSE
35
2.8.2
BESTIMMUNG
DER
KEIMZAHL
NACH
INFEKTION
35
3.
ERGEBNISSE
36
3.1
UNTERSUCHUNG
DER
FUER
DIE
ARBEIT
RELEVANTEN
BARTONELLA-STAEMME
36
3.1.1
KULTURELLE
ANZUCHT
UND
FAERBETECHNIKEN
36
3.1.2
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
39
3.2
POLYKLONALE
KANINCHENSEREN
GEGEN
B.
HENSELAE,
B.
QUINTANA
UND
A.
FELIS
41
3.2.1
SPEZIFITAETSKONTROLLEN
41
3.3
ZELLKULTURINFEKTIONEN
MIT
B.
QUINTANA
UND
B.
HENSELAE
43
3.4
NACHWEISMETHODEN
FUER
B.
HENSELAE
IN
GEWEBEN
46
33
IMMUNHISTOLOGIE
UND
INDIREKTER
IMMUNFLUORESZENZTEST
49
3.6
SENSITIVITAET
UND
SPEZIFITAET
DER
POLYMERASEKETTENREAKTIONEN
/
HYBRIDISIERUNGEN
54
3.6.1
NACHWEIS
VON
B.
HENSE/AE-SPEZIFISCHER
16S
RDNA
MITTELS
HYBRIDISIERUNG
54
3.6.2
NACHWEIS
DES
BARTONELLA-CITRATSYNTHASE-GENS
MITTELS
PCR
58
3.6.3
NACHWEIS
AFLPIA
/E/IS-SPEZIFISCHER
DNA
MITTELS
PCR
62
3.6.4
NACHWEIS
VON
EUBAKTERIELLER
16S-DNA
MITTELS
PCR
62
3.7
UNTERSUCHUNG
VON
PATIENTENMATERIALIEN
63
3.7.1
PROBEN
VON
PATIENTEN
MIT
KLINISCHEM
VERDACHT
AUF
KATZENKRATZKRANKHEIT
63
3.7.2
HERZKLAPPENSCREENING
AUF
B.
HENSELAE-DTIA
67
3.7.3
B.
HENSEZAE-DNA-POSITIVE
PATIENTENPROBEN
AUS
DEN
NIEDERLANDEN
68
4.
DISKUSSION
70
4.1.
KLINIK
UND
EPIDEMIOLOGIE
VON
BARTONELLA
HENSELAE
INFEKTIONEN
70
4.2.
MIKROBIOLOGISCHER
NACHWEIS
UND
DIAGNOSTIK
VON
B.
HENSELAE
71
4.3.
THERAPIE
VON
BARTONELLOSEN
75
4.4.
AUSBLICK
76
5.
ZUSAMMENFASSUNG
77
6.
ANHANG
78
6.1
ABKUERZUNGEN
79
6.2
LITERATURVERZEICHNIS
81 |
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