Untersuchungen zur intrazellulären pH- und Zellvolumenregulation in isolierten Enterozyten des Duodenums der Ratte:
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| Format: | Buch |
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1997
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3
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
7
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
13
2.1
CHEMIKALIEN
UND
LOESUNGEN
13
2.1.1
LOESUNGEN
ZUR
ZELLISOLIERUNG
UND
-FAERBUNG
13
2.1.2
LOESUNGEN
ZUR
ZELLPERFUSION
13
2.1.3
BEZUGSQUELLEN
15
2.2
ZELLISOLIERUNG
15
2.2.1
VERSUCHSTIERE
15
2.2.2
EINBRINGEN
DES
PERFUSIONSKATHETERS
15
2.2.3
VASKULAERE
PERFUSION
16
2.2.4
FRAKTIONIERTE
ZELLGEWINNUNG
17
2.2.5
HISTOLOGIE
18
2.3
BCECF
18
2.3.1
SUBSTANZEIGENSCHAFTEN
18
2.3.2
FLUORESZENZFAERBUNG
DER
ENTEROZYTEN
19
2.3.3
INTRAZELLULAERE
PH-MESSUNG:
RATIOMETRIE
20
2.3.4
INTRAZELLULAERE
PH-MESSUNG:
KALIBRIERUNG
20
2.3.5
RELATIVE
ZELLVOLUMENMESSUNG
21
2.3.6
BCECF-FAERBUNG
ZUR
BEURTEILUNG
DER
ZELLVIABILITAET
21
2.4
KONFOKALE
LASERRASTERMIKROSKOPIE
22
2.4.1
KONFOKALES
PRINZIP
22
2.4.2
EINGESETZTES
MIKROSKOP
22
2.4.3
ANPASSUNGEN
FUER
MESSUNGEN
MIT
BCECF
23
2.5
INTRAZELLULAERE
PH
UND
RELATIVE
ZELLVOLUMENMESSUNGEN
24
2.5.1
HEMMSTOFFE
24
4
2.5.2
ARTIFIZIELLE
INTRAZELLULAERE
ANSAEUERUNG
24
2.5.3
ARTIFIZIELLE
INTRAZELLULAERE
ALKALISIERUNG 24
2.5.4 VERSUCHSANSAETZE 25
2.5.5
PRAKTISCHE
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
26
2.6
VERSUCHSAUSWERTUNG
28
2.6.1
VALIDE
VERSUCHE
28
2.6.2
BILDVERARBEITUNG
28
2.6.3
BERECHNUNGEN
UND
STATISTIK
29
3.
ERGEBNISSE
30
3.1
ISOLIERTE
ZELLEN
30
3.1.1
ZELLFRAKTIONEN
30
3.1.2
HISTOLOGIE
30
3.1.3
FLUORESZENZFAERBUNG
31
3.1.4
VIABILITAETSFAERBUNG
MIT
BCECF
UND
TRYPAN
BLAU
IM
VERGLEICH
31
3.2
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
32
3.2.1
VALIDE
UND
GESCHEITERTE
EXPERIMENTE
32
3.2.2
VERHALTEN
AVITALER
ZELLEN
33
3.3
INTRAZELLULAERER
PH
UND
FLUORESZENZINTENSITAET
BEI
ANREGUNG
AM
33
ISOSBESTISCHEN
PUNKT
3.3.1
RUHEBEDINGUNGEN
33
3.3.2
NATRIUMFREIES
EXTRAZELLULAERES
MEDIUM
33
3.3.3 EXPOSITION
MIT
AMILORID
34
3.3.4
ANSAEUERUNG
MIT
AMMONIUM
35
3.3.5
NATRIUMFREIES
EXTRAZELLULAERES
MEDIUM
NACH
ANSAEUERUNG
35
3.3.6
AMILORID
NACH
ANSAEUERUNG
36
3.3.7
CHLORIDFREIES
EXTRAZELLULAERES
MEDIUM
37
3.3.8 EXPOSITION
MIT
[H
2
]DIDS
37
3.3.9
ALKALISIERUNG
MIT
PROPIONAT
37
5
3.3.10
CHLORIDFREIES
EXTRAZELLULAERES
MEDIUM
NACH
ALKALISIERUNG
38
3.3.11
[HJJDIDS
NACH
ALKALISIERUNG
39
4.
DISKUSSION
40
4.1
ISOLIERTE
ENTEROZYTEN
40
4.1.1
ZELLISOLIERUNGSMETHODE
40
4.1.2
FRAKTIONIERUNG
IN
VILIUS
UND
KRYPTZELLEN
40
4.1.3
VIABILITAET
DER
ENTEROZYTEN
42
4.1.4
VIABILITAETSFAERBUNGEN
IM
VERGLEICH
43
4.2
METHODIK
DER
MESSUNGEN
44
4.2.1
MESSUNG
AN
ISOLIERTEN
EINZELZELLEN
44
4.2.2
FLUORESZENZFAERBUNG
MIT
8CECF
44
4.2.3
EXTRAZELLULAERES
MILIEU
45
4.2.4 KOMBINATION
VON
BCECF
UND
KONFOKALER
LASERRASTERMIKROSKOPIE
46
4.2.5
MESSUNGEN
DES
RELATIVEN
ZELLVOLUMENS
46
4.3 INTRAZELLULAERE
PH-REGULATION
48
4.3.1
EIGENE
ERGEBNISSE
48
4.3.2
NATRIUM/PROTONEN-AUSTAUSCH
49
4.3.3
CHLORID/BIKARBONAT-AUSTAUSCH
51
4.3.4
NATRIUM/BIKARBONAT-COTRANSPORT
53
4.3.5
DIE
TRANSPORTER
IM
ZUSAMMENSPIEL
53
4.3.6
BIKARBONATSEKRETION
DES
DUODENUMS
55
4.4
AENDERUNGEN
DES
ZELLVOLUMENS
56
4.4.1
EIGENE
ERGEBNISSE
56
4.4.2
MECHANISMEN
DER
ZELLVOLUMENAENDERUNG
58
4.5
SCHLUSSFOLGERUNGEN
59
4.5.1
METHODIK
59
4.5.2
INTRAZELLULAERER
PH
59
4.5.3
ZELLVOLUMEN
60
6
5.
ZUSAMMENFASSUNG
61
6.
ABBILDUNGEN
63
7.
LITERATURVERZEICHNIS
74
8.
LEBENSLAUF
85 |
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