Etablierung verschiedener Verfahren zur Lyse der Zellwand von Trichophyton-Species sowie Untersuchung von Trichophyton rubrum und Trichophyton rubrum variatio nigricans auf das Vorhandensein von Plasmiden als Voraussetzung für die Suche nach Möglichkeiten einer beschleunigten mykologischen Labordiagnostik:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGEN
01
TABELLEN
02
1.
EINLEITUNG
03
1.1.
PLASMIDE
03
1.2.
PILZE
06
1.3.
AUFGABENSTELLUNG
08
2.
MATERIAL
09
2.1.
PILZ-UND
BAKTERIENKULTUREN
09
2.1.1.
TRICHOPHYTON
RUBRUM
UND
TRICHOPHYTON
RUBRUM
VARIATIO
NIGRICANS
09
2.1.2.
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
09
2.1.3.
ESCHERICHIA
COLI
10
2.2.
MEDIEN
10
2.3.
VERSUCHSLOESUNGEN
11
2.4.
PLASMIDE
UND
DNS-MARKER
13
2.4.1.
R
300
B
13
2.4.2.
PRS415
14
2.4.3.
DNS
'
SUPERCOILED'
MARKER
14
2.5.
GERAETE
15
3.
METHODEN
17
3.1.
KULTUR
DER
TRICHOPHYTEN
17
3.2.
AUFREINIGUNG
DER
TRICHOPHYTONKULTUR
17
3.3.
ZELLLYSE
DER
TRICHOPHYTEN
17
3.3.1.
MECHANISCHE
ZELLLYSE
MIT
DEM
TISSUE
GRINDER'
17
3.3.2.
THERMISCHE
ZELLLYSE
DURCH'KOCHEN'
18
3.3.3.
ENZYMATISCHE
ZELLLYSE
MIT
'
LYSING
ENZYME'
18
3.4.
KULTUR,
AUFREINIGUNG
UND
ZELLLYSE
VON
ESCHERICHIA
COLI
MIT
R
300
B
18
3.5.
KULTUR,
AUFREINIGUNG
UND
ZELLLYSE
VON
YPH
499
MIT
PRS
415
19
3.6.
PLASMIDISOLIERUNG
19
3.7.
PLASMIDDARSTELLUNG
MITTELS
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
20
3.8.
TRANSFORMATION
GANZER
YPH
499-ZELLEN
MIT
PRS
415
20
3.9.
ERGAENZENDE
ZELLLYSEVERFAHREN
FUER
TRICHOPHYTEN
21
3.9.1.
MECHANISCHE
ZELLLYSE
DURCH'MOERSERN'
21
3.9.2.
MECHANISCHE
ZELLLYSE
DURCH
'ULTRASCHALLBEHANDLUNG'
22
3.9.3.
ENZYMATISCHE
ZELLLYSE
DURCH
'
CHITINASE
,
CELLULASE,
LYTIKASE
UND
LYSOZYM
ALS
EINZELSUBSTANZEN
SOWIE
ALS
VIERERKOMBINATION
22
4.
ERGEBNISSE
23
4.1.
KULTUR
VON
TRICHOPHYTON-SPECIES
AUS
PATIENTENMATERIAL
24
4.2.
VERFAHREN
ZUR
LYSE
DER
ZELLWAND
VON
TRICHOPHYTON-SPECIES
24
4.2.1.
MECHANISCHE
LYSEVERFAHREN
24
4.2.2.
ENZYMATISCHE
LYSEVERFAHREN
27
4.2.3.
THERMISCHE
LYSEVERFAHREN
28
4.3.
PLASMIDISOLIERUNG
UND
-DARSTELLUNG
29
4.3.1.
PLASMID
R
300
B
IN
ESCHERICHIA
COLI
29
4.3.2. PLASMID
PRS
415
IN
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
30
4.3.3.
PLASMIDE
IN
DERMATOPHYTEN
31
5.
DISKUSSION 33
5.1.
KULTUR
VON
BAKTERIEN
UND
PILZEN 33
5.1.1.
KULTUR
VON
ESCHERICHIA
COLI
MIT
R
300
B
33
5.1.2.
KULTUR
VON
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
MIT
PRS
415
34
5.1.3.
KULTUR
VON
TRICHOPHYTON-SPECIES
34
5.2.
LYSE
DER
ZELLWAND
ALS
NOETIGER
SCHRITT
ZUR
PLASMIDISOLIERUNG
36
5.2.1.
LYSE
VON
BAKTERIEN
37
5.2.2.
LYSE
VON
HEFEN
37
5.2.3.
LYSE
VON
TRICHOPHYTON-SPECIES
37
5.3.
PLASMIDNACHWEIS
39
5.3.1.
EXTRAKTION
ZUR
PLASMIDISOLIERUNG
39
5.3.2.
GELELEKTROPHORESE
ZUR
PLASMIDDARSTELLUNG
41
5.4.
PLASMID
IN
PILZEN
43
5.4.1.
PLASMIDE
UND
PILZDIAGNOSTIK
44
5.4.2.
NACHWEISGRENZE
45
5.5.
AUSBLICK
46
6.
ZUSAMMENFASSUNG
48
7.
LITERATURVERZEICHNIS
50
DANKSAGUNG
56
LEBENSLAUF
57 |
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