Molekulare und immunologische Charakterisierung der immundominanten Antigene HSP60, HSP70 und LpLA7 von Borrelia burgdorferi, dem Erreger der Lyme-Borreliose:
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1995
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I
INHALT
1 ABKUERZUNGEN 1
2 EINLEITUNG 2
2.1 GESCHICHTE. 2
2.2 DER ERREGER BORRELIA BURGDORFERI. 2
2.2.1 TAXONOMISCHE STELLUNG. 2
2.2.2 MORPHOLOGIE UND ULTRASTRUKTUR . ._. 3
2.2.3 GENETIK . . . . 4
2.2.4 VEKTOR UND WIRT. 4
2.3 LYME-BORRELIOSE. 6
2.3.1 EPIDEMIOLOGIE. 6
2.3.2 KLINISCHER VERLAUF. 7
2.3.3 IMMUNANTWORT. 10
2.3.4 DIAGNOSE. 12
2.3.5 THERAPIE UND PROPHYLAXE . 13
2.4 HITZESCHOCK PROTEINE. 14
2.4.1 DEFINITION. 14
%
2.4.2 EINTEILUNG. 14
2.4.3 FUNKTION. 14
2.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT. 16
3 MATERIALIEN UND METHODEN 17
3.1 CHEMIKALIEN. 17
3.2 ENZYME. 18
3.3 FILMMATERIAL. 18
3.4 GERAETE. 18
3.5 PLASMID PUEXL. 19
3.6 BORRELIEN-DNS. 20
3.7 GENBIBLIOTHEK. 21
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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N
INHALT
3.8 ANTIKOERPER. 22
3.9 ANLEGEN EINER ZELL-DAUERKULTUR. 22
3.10 PROTEIN-KOLONIE-IMMUNFAERBUNG VONE. CO/I-ZELLEN . 22
3.11 PLASMIDPRAEPARATION. 23
3.11.1 STANDARD-PLASMIDPRAEPARATION . 23
3.11.2 PLASMID-MAXIPRAEPARATION NACH QIAGEN. 24
3.12 BESTIMMUNG VON KONZENTRATION UND REINHEIT DER NUKLEINSAEUREN. 25
3.13 ANALYSE VON PLASMID-DNS MIT RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN. 26
3.14 AGAROSEMINIGELE. 27
3.15 SEQUENZIERUNG VON PLASMID-DNS. 28
3.15.1 DENATURIEREN DES PLASMIDS UND PRIMER HYBRIDISIERUNG . 28
3.15.2 LABELLING . 28
3.15.3 TERMINATION. 28
3.15.4 STOP-REAKTION. 29
3.15.5 GELELEKTROPHORESE. 29
3.16 VERWENDETE OLIGONUKLEOTIDE. 30
3.17 AMINOSAEURESEQUENZANALYSE. 31
3.18 HERSTELLUNG VON REKOMBINANTEN PROTEINEN. 31
3.19 RESTRIKTIONSFRAGMENT-LAENGENPOLYMORPHISMUS. 32
4 ERGEBNISSE 33
4.1 EXPRESSIONSSCREENING . 33
4.2 SEQUENZIERUNG DES 60 KDA ANTIGENS. 33
4.2.1 DNS- UND AMINOSAEURESEQUENZ HSP60. 34
4.2.2 VERGLEICH MIT VORHANDENEN SEQUENZEN. 36
4.3 REKOMBINANTES PROTEIN VON HSP60. 39
4.4 SEQUENZIERUNG DES 70 KDA ANTIGENS. 39
4.4.1 VERGLEICH MIT VORHANDENEN SEQUENZEN. 43
4.5 SEQUENZIERUNG DES ANTIGENS LPLA7.
45
4.6 GENOTYPISCHE ANALYSE VON
B. BURGDORFERI-LSOLATEN
MITTELS RESTRIKTIONSFRAGMENT-
LAENGENPOLYMORPHISMUS . 48
INHALT M
5 DISKUSSION UND AUSBLICK 52
5.1 SEQUENZANALYSE VON HSP60 UND HSP70. 52
5.2 LPLA7-ANALYSE. 53
5.3 EINTEILUNG VON
B. BURGDORFERI IN UNTERGRUPPEN MITTELS RFLP. 54
5.4 OLIGONUKLEOTIDE ALS PRIMER IN DER POLYMERASE-KETTENREAKTION. 54
5.5 VERWENDUNG REKOMBINANTER PROTEINE. 54
6 ZUSAMMENFASSUNG 58
7 LITERATUR
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