Isolierung und Charakterisierung des agglutinierenden Faktors aus Cyperus esculentus und dessen antifungale Wirkung:
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| adam_text | ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES AGGLUTINIERENDEN FAKTORS AUS
CYPERUS ESCULENTUS UND DESSEN ANTIFUNGALE WIRKUNG DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DES NATURWISSENSCHAFTLICHEN DOKTORGRADES DER BAYERISCHEN
JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG VORGELEGT VON CLAUDIA HEID-JEHN
AUSFULDA WUERZBURG 1997 INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS SEITE I.
EINLEITUNG II. ISOLIERUNG DES AGGLUTINIERENDEN FAKTORS AUS CYPERUS
ESCULENTUS 1 II. 1. UNTERSUCHUNG AUF AGGLUTINATIONSAKTIVITAET 7 II. 1.1.
BESTIMMUNG DER AGGLUTINATIONSAKTIVITAET UNTER VERSCHIEDENEN BEDINGUNGEN 7
II. 1.1.1. TITER IN ABHAENGIGKEIT VOM PH-WERT 8 II. 1.1.2. TITER IN
ABHAENGIGKEIT VON DER IONENSTARKE 9 II. 1.1.3. THERMOSTABILILTAET DER
AGGLUTINIERENDEN AKTIVITAET 10 II.1.2. UNTERSUCHUNG AUF HEMMZUCKER * 10
N.2. VERFAHREN ZUR ISOLIERUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS 12 0.2.1.
HERSTELLUNG DES ROHEXTRAKTES 12 II.2.2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE
AUFREINIGUNG 12 II.2.2.1. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN
OVOMUCOID-SEPHAROSE 4B 14 11.2.2.1.1. VERSUCHE ZUR BINDUNG DER
AGGLUTINIERENDEN AKTIVITAET 14 11.2.2.1.2. VERSUCHE ZUR ELUTION DER
AGGLUTINIERENDEN AKTIVITAET 15 11.2.2.1.3. CHROMATOGRAPHIE AN
OVOMUCOID-SEPHAROSE 4B 15 H.2.2.2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN CHITOSAN
15 UE.2.2.2.1. VERSUCHE ZUR BINDUNG DER AGGLUTINIERENDEN AKTIVITAET 16
11.2.2.2.2. VERSUCHE ZUR ELUTION DER AGGLUTINIERENDEN AKTIVITAET 16
11.2.2.2.3. CHROMATOGRAPHIE AN CHITOSAN 17 0.2.3. REINIGUNG DURCH
PH-FAELLUNG 19 0.2.4. REINIGUNGSVERSUCHE MITTELS GELCHROMATOGRAPHIE 21
11.2.4.1. GELFILTRATION AN SEPHADEX G 50 21 11.2.4.2. GELFILTRATION AN
SEPHADEX G 25 23 11.2.4.3. GELFILTRATION AN SEPHADEX G 10 24
INHALTSVERZEICHNIS 11.3. METHODEN ZUR REINHEITSPRUEFUNG 26 II.3.1.
ELEKTROPHORESE UNTER NICHT-DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN 26 0.3.2.
SDS-GELELEKTROPHORESE UNTER DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN 28 II.3.3.
KAPILLARELEKTOPHORESE 29 11.4. ZUSAMMENFASSUNG DER VERSUCHE ZUR
ISOLIERUNG 31 III. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE UND BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS 34 M.L.
AGGLUTINATIONSAKTIVITAET 34 III.2. HEMMUNG DER AGGLUTINATION 36 M.3.
UV-SPEKTRUM 38 M.4. EXTINKTIONSKOEFFIZIENT 39 ULS. BESTIMMUNG DES
GESAMTMOLEKULARGEWICHTES DURCH GELFILTRATION 40 M.6. CHEMISCHER AUFBAU
DES ORGANISCHEN ANTEILS DES CYPERUS ESCULENTUS-TAKTORS 4 3 01.6.1.
BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTES MIT BCA-REAGENZ NACH SMITH ET AL. 43
III.6.2. AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS 45
III.6.2.1. AMINOSAEUREANALYSE NACH DEM PICO-TAG-VERFAHREN 46 RN.6.2.2.
BESTIMMUNG VON CYSTEIN UND CYSTIN ALS CARBOXYMETHYLCYSTEIN 51 IUE.6.2.3.
BESTIMMUNG VON CYSTEIN NACH ELLMAN 52 ID.6.2.4. TRYPTOPHANBESTIMMUNG
NACH HOPKINS UND COLE 52 ID.6.2.5. ERGEBNIS DER UNTERSUCHUNG ZUR
AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG 53 ID.6.3. BESTIMMUNG DER
KOHLENHYDRATZUSAMMENSETZUNG 55 INHALTSVERZEICHNIS 01.6.3.1.
KOLORIMETRISCHE BESTIMMUNG DES ZUCKERANTEILS IM CYPERUS
ESCULENTUS-FAKTOR NACH DUBOIS ET AL. 55 DI.6.3.2. AMPEROMETRISCHE
DETEKTION DER MONOMEREN ZUCKER 56 QI.6.3.2.1. BESTIMMUNG DER
MONOSACHARIDE 57 10.6.3.2.2. BESTIMMUNG VON GALACTURONSAEURE UND
OLIGOSACHARIDE 62 01.6.3.2.3. ERGEBNIS DER AMPEROMETRISCHEN
ZUCKERDETEKTION 65 DI.6.3.3. KOLORIMETRISCHER NACHWEIS AUF AMINOZUCKER
66 01.6.3.4. ERMITTLUNG DES GLUCOSAMINANTEILS AUS DER
STICKSTOFFBESTIMMUNG NACH DEM KJELDAHL-VERFAHREN 68 III 6.4 ERGEBNIS DER
UNTERSUCHUNGEN ZUR ZUSAMMENSETZUNG DES ORGANISCHEN ANTEILS 69 M.7.
CHEMISCHER AUFBAU DES ANORGANISCHEN ANTEILS DES CYPERUS
ESCULENTUS-FAKTORS * 7 0 DI.7.1. BESTIMMUNG UND UNTERSUCHUNG DES
GLUEHRUECKSTANDES 70 DI.7.1.1. BESTIMMUNG DES GLUEHRUECKSTANDES DURCH
DIREKTE VERASCHUNG 70 01.7.1.2. BESTIMMUNG DES SAEUREUNLOESLICHEN
GLUEHRUECKSTANDES 71 DI.7.1.3. GRAVIMETRISCHE SILIKATBESTIMMUNG 71 UEI.7.2.
ELEMENTARANALYSE DER ASCHE MITTELS ICP-MS 72 DI.7.3. ERGEBNIS DER
ANALYTIK DES ANORGANISCHEN ANTEILS 76 IH.8. VERSUCHE ZUR ABTRENNUNG DES
ANORGANISCHEN ANTEILS 76 M.9. DISKUSSION DER ERGEBNISSE ZUR CHEMISCHEN
STRUKTUR DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS 79 IV. BIOLOGISCHE WIRKUNG DES
CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS AUF DAS WACHSTUM VON PATHOGENEN PILZEN 82
RV.L. VERFAHREN ZUR BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES CYPERUS
ESCULENTUS-FAKTORS 84 INHALTSVERZEICHNIS IV.2. BESTIMMUNG DER
ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN FUSARIUM
SOLANIF. PISI 84 IV.2.1. HEMMUNG IN ABHAENGIGKEIT VON DER KONZENTRATION
DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS 84 IV.2.2. EINFLUSS VERSCHIEDENER IONEN
AUF DIE HEMMWIRKUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-VAKTORS 88 IV.2.3. BESTIMMUNG
DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG NACH OXIDATIVER SPALTUNG DES
KOHLENHYDRATANTEILS 93 IV.2.4. BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG NACH
ENZYMATISCHER PROTEOLYSE 96 IV.3. BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG
DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN FUSARIUM NTONILIFORMIS 99 IV.4.
BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN
FUSARIUM CULMORUM 103 IV.5. HEMMVERSUCH MIT CANDIDA ALBICANS 105 IV.6.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE ZUR BESTIMMUNG DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAET
DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS 106 V. ZUSAMMENFASSUNG 107 VI.
EXPERIMENTELLER TEIL 110 VL1. MATERIAL 110 VI. 1.1. PFLANZENMATERIAL 110
VI. 1.2. PILZKULTUREN 110 VI.1.3. REAGENZIEN 110 VI. 1.4.
VERBRAUCHSMATERIAL 111 INHALTSVERZEICHNIS IV. 1.5. GERAETE 112 VI.2.
METHODEN 116 VI.2.1. PUFFER 116 VI.2.2 DIALYSE 116 VI.2.3. EXTRAKTION
DES CYPERUS ESCULENTUS-?AKTOVS 116 VI.2.4. BESTIMMUNG DER
AGGLUTINATIONSAKTIVITAET 117 VI.2.5. HEMMUNG DER AGGLUTINATION 118
VI.2.6. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 118 VI.2.7. GELFILTRATIONEN 119
VI.2.8. ELEKTROPHORETISCHE VERFAHREN 119 VI.2.8.1. ELEKTROPHORESE UNTER
NICHT-DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN 119 VI.2.8.2. SDS-GELEKTROPHORESE
UNTER DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN 123 VI.2.8.3. KAPILLARELEKTROPHORESE
124 VI.2.9. METHODEN ZUR PROTEINBESTIMMUNG 125 VI.2.9.1.
SPEKTRALPHOTOMETRISCHEPROTEINBESTUENMUNG 125 VI.2.9.2. PROTEINBESTIMMUNG
MIT BCA NACH SMITH ET AL. 125 VI.2.10. ZUCKERBESTIMMUNGEN 126 VI.2.10.1.
KOLORIMETRISCHE BESTIMMUNG NACH DUBOIS ET AL. 126 VI.2.10.2.
KOLORIMETRISCHE BESTIMMUNG VON GLUCOSAMIN 126 VI.2.10.3. ERMITTLUNG DES
GLUCOSAMINANTEILS DURCH STICKSTOFFBESTIMMUNG NACH DEM KJELDAHL-VERFAHREN
126 VI.2.11. AMINOSAEUREANALYSE VON PROTEINEN 127 VI.2.12.
CHARAKTERISIERUNG DES ANORGANISCHEN ANTEILS DES
CYPERUS-ESCULENTUS-FAKTOTS 129 VI.2.12.1. BESTIMMUNG DES GLUEHRUECKSTANDES
DURCH DIREKTE VERASCHUNG 129 VI.2.12.2. BESTIMMUNG DES SAEUREUNLOESLICHEN
GLUEHRUECKSTANDES 130 VI.2.12.3. GRAVIMETRISCHE SILIKATBESTIMMUNG 130
VI.2.12.4. CHARAKTERISIERUNG DER ASCHE DURCH ELEMENTARANALYSE MITTELS
ICP-MS 131 VI.2.13. BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES
CYPERUS-ESCULENTUS-FAKTOTS 131 V12.13.1. ANZUCHT DER PILZKULTUREN 131
INHALTSVERZEICHNIS VI.2.13.2. BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES
CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN FUSARIUM SOLANIF. PISI 1 34 VI.2.13.3.
BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN
FUSARIUM MONILIFORMIS 13 9 VI.2.13.4. BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN
WIRKUNG DES CYPERUS ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN FUSARIUM CULMORUM 140
VI.2.13.5. BESTIMMUNG DER ANTIFUNGALEN WIRKUNG DES CYPERUS
ESCULENTUS-FAKTORS GEGEN CANDIDA ALBICANS 141 VFL. TABELLEN- UND
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 142 VM. LITERATURVERZEICHNIS 150
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