Funktionelle Wechselwirkungen zwischen Promotor und Enhancer-Elementen der Beta-Kette des T-Zellrezeptors:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Utz, Wiss.
1999
|
| Schriftenreihe: | Biochemie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Chemie und Pharmazie, Diss., 1999 |
| Beschreibung: | 115 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
DNA
SEQUENZEN
REGULIEREN
DIE
TRANSKRIPTION
.
1
1.2
GENERELLE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
KLASSE
II
TRANSKRIPTION
.
2
1.3
DAS
RNA-POLYMERASE
II
HOLOENZYM
.
3
1.4
DIE
AKTIVIERUNG
DER
TRANSKRIPTION
.
3
1.5
TRANSKRIPTION
UND
CHROMATIN
.
6
1.6
T-ZELLSPEZIFISCHE
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
.
7
1.7
DIE
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
DER
SS
KETTE
DES
T-ZELLREZEPTORS
UND
DESSEN
COREZEPTORS
CD4
.
8
1.8
DIE
FUNKTION
DES
T-ZELLREZEPTORS
UND
DESSEN
COREZEPTORS
CD4
.
10
1.9
AUFGABENSTELLUNG
.
11
2
MATERIAL
.
12
2.1
GERAETE
.
12
2.2
CHEMIKALIEN
UND
BIOCHEMIKALIEN
.
13
2.3
RADIOCHEMIKALIEN
.
16
2.4
ENZYME
.
16
2.5
ANTIKOERPER
.
16
2.6
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
KULTURMEDIEN
.
17
2.6.1
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
17
2.6.2
KULTURMEDIEN
.
17
2.7
MOLEKULARBIOLOGISCHE
HILFSMITTEL
.
19
2.8
EUKARYOTISCHE
ZELL-LINIEN
.
20
2.9
BAKTERIENSTAEMME
.
20
2.10
DNA
UND
PROTEIN-LAENGENSTANDARDS
.
20
2.10.1
DNA-LAENGENSTANDARDS
.
20
2.10.2
PROTEIN-LAENGENSTANDARDS
.
21
2.11
PLASMIDE
.
22
2.12
OLIGODOEXYRIBONUKLEOTLDE
.
23
3
METHODEN
.
25
3.1
METHODEN
DER
PROKARYOTISCHEN
ZELLKULTUR
.
25
3.1.1
ANZUCHT
VON
BAKTERIENKULTUREN
.
25
3.1.2
ANLEGEN
VON
DAUERKULTUREN
.
25
3.2
METHODEN
DER
EUKARYOTISCHEN
ZELLKULTUR
.
25
3.2.1
ZELLENVERMEHRUNG
EUKARYOTISCHER
ZELL-LINIEN
.
25
3.2.2
ANLEGEN
VON
DAUERKULTUREN
.
26
3.3
DNA
UND
RNA
ARBEITSTECHNIKEN
.
26
3.3.1
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
REINHEIT
EINER
NUKLEINSAEURE-PRAEPARATION.
26
3.3.2
CHLOROPANE-EXTRAKTION
UND
FAELLUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
27
3.3.3
REINIGUNG
VON
DNA
UEBER
GELFILTRATION
.
27
3.3.4
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI
(DEL
SAL
ET
AL.,
1988)
.
28
3.3.5
PLASMID-DNA-PRAEPARATION
MIT
QUIAGEN-ANIONENAUSTAUSCHERSAEULEN
.
29
3.3.6
AMPLIFIKATION
VON
DNA
MIT
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
30
3.3.7
RESTRIKTIONSHYDROLYSE
VON
DNA
.
31
3.3.8
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
31
3.3.9
ELUTION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
31
3.3.10
REINIGUNG
SYNTHETISCHER
OLIGODEOXYRIBONUKLEOTIDE
.
32
3.3.11
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
OLIGODEOXYRIBONUKLEOTIDEN
AM
S'-ENDE
.33
3.3.12
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
.
33
INHALTSVERZEICHNIS
II
3.3.13
AUFFUELLEN
VON
5'-UEBERHAENGENDEN
DNA-ENDEN
.
34
3.3.14
LIGATION
VON
DNA
.
34
3.3.15
HERSTELLUNG
TRANSFONNATIONSKOMPETENTER
E.
COLI
(NACH
M.
SCOTT,UNVEROEFFENTLICHT)
.
35
3.3.16
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.
COLI
(NACH
M.
SCOTT,
UNVEROEFFENTLICHT)
.
35
3.3.17
KLONIERUNG
VON
PROMOTOR
UND
PROMOTOR/ENHANCER
KONSTRUKTEN
.
36
3.3.18
KLONIERUNG
VON
CBP
UND
ETS-1-DERIVATEN
.
37
3.3.19
DNA-SEQUENZIERUNG
.
38
3.3.19.1
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
DEM
DIDEOXY-KETTENABBRUCHVERFAHREN
.
38
3.3.19.2
ANFERTIGUNG
EINES
SEQUENZGELS
UND
DURCHFUEHRUNG
DER
GELELEKTROPHORESE
.
39
3.4
PROTEIN-ARBEITSTECHNIKEN
.
40
3.4.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
40
3.4.2
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
40
3.4.3
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
PROTEINE
.
41
3.4.4
HERSTELLUNG
VON
ZELLEXTRAKTEN
.
42
3.4.4.1
HERSTELLUNG
VON
ZELLKERNEXTRAKTEN
AUS
JURKAT-ZELLEN
.
42
3.4.4.2
HERSTELLUNG
VON
ZELLEXTRAKTEN
AUS
293T
ZELLEN
.
43
3.4.4.3
HERSTELLUNG
VON
ZELLKERNEXTRAKTEN
AUS
293T
ZELLEN
.
44
3.4.5
HETEROLOGE
EXPRESSION
VON
PROTEINEN
IN
E.
COLI
.
45
3.4.6
REINIGUNG
VON
GST
FUSIONSPROTEINEN
.
46
3.5
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
DURCH
WESTERN-BLOT
ANALYSE
.
47
3.6
FUNKTIONELLE
ANALYSEN
.
49
3.6.1
GELRETARDATIONSANALYSE
(EMSA)
.
49
3.6.2
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
VON
KLASSE
II
PROMOTOREN
.
50
3.6.2.1
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
IM
KERNEXTRAKT
.
50
3.6.2.2
NACHWEIS
DER
RNA-POLYMERASE
II
TRANSKRIPTE
DURCH
"
PRIMER
EXTENSION
"
.51
3.6.3
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
EUKARYOTISCHER
ZELLEN
.
52
3.6.3.1
TRANSFEKTION
DURCH
ELEKTROPORATION
.
52
3.6.3.2
TRANSFEKTION
NACH
DER
CALCIUMPHOSPHAT
METHODE
.
53
3.6.3.3
TRANSFEKTIONSAUSWERTUNG
.
54
3.6.4
GST-FAELLUNG
('PULL
DOWN
ASSAY")
.
55
3.6.5
IN
VITRO
ACETYLIERUNG
VON
HISTONEN
.
56
4
ERGEBNISSE
.
57
4.1
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
CD4
UND
DES
VSS
8.1
PROMOTERS
.
57
4.1.1
DER
CD4
CORE-PROMOTOR
IST
EIN
T-ZELLSPEZIFISCHES
ELEMENT
.
57
4.1.2
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
VSS
8.1
PROMOTORS
.
60
4.1.2.1
STRUKTUR
UND
GEWEBESPEZIFITAET
DES
VSS
8.1
PROMOTORS
.61
4.1.2.2
REGULATION
DURCH
PROXIMALE
PROMOTORELEMENTE
.
62
4.1.2.3
CREB
UND
ETS-1
AKTIVIEREN
DEN
VSS
8.1
PROMOTOR
DURCH
KRYPTISCHE
BINDUNGSSTELLEN
INNERHALB
DES
CORE-PROMOTORS
.
63
4.1.2.4
DER
VSS
8.1
UND
DER
CD4
CORE-PROMOTOR
HABEN
EINE
AEHNLICHE
STRUKTUR.
.
65
4.1.2.5
KOOPERATION
VON
CREB,
ETS-1
UND
AML1
AM
VSS
8.1
CORE-PROMOTOR
.
66
4.1.2.6
ZWISCHEN
VERSCHIEDENEN
VSS
PROMOTOREN
KONSERVIERTE
ELEMENTE
.
68
4.2
FUNKTIONELLE
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
DEM
TCR
SS
ENHANCER
UND
DEMVSS
8.1
PROMOTOR
.
73
4.2.1
DIE
AKTIVITAET
DES
TCR
SS
ENHANCERS
IST
ABHAENGIG
VON
ELEMENTEN
DES
VSS
8.1
PROMOTORS
.
73
4.2.2
PMA
STIMULATION
BEEINFLUSST
DIE
FUNKTION
DES
TCR
SS
ENHANCERS
.
75
4.2.3
REKRUTIERUNG
VON
ETS-1
UND
CREB
ZUM
VSS
8.1
PROMOTOR
VERRINGERT
DIE
AKTIVITAET
DESTCR
SS
ENHANCERS
.
79
4.3
DER
COFAKTOR
CBP/P300
IST
AN
DER
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
DER
SS-KETTE
DES
TCR
BETEILIGT
.
80
4.3.1
CBP/P300
VERMITTELT
DIE
SPEZIFISCHE
WECHSELWIRKUNG
ZWISCHEN
TCR
SS
ENHANCER
UND
VSS
8.1
PROMOTOR
.
80
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.3.2
DOMINANT
NEGATIVES
CBP
REPRIMIERT
DEN
VSS
8.1
PROMOTOR
UND
DEN
TCR
SS
ENHANCER.
82
4.4
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
GAL4-CBP
FUSIONSPROTEINEN
.
8
5
4.4.1
OAL4-CBP
FUSIONSPROTEINE
VERHALTEN
SICH
AEHNLICH
WIE
DER
TCR
SS
ENHANCER
.85
4.4.2
HAT
AKTIVITAET
ABHAENGIGE
AKTIVIERUNG
DER
TRANSKRIPTION
.88
5
DISKUSSION
.
90
5.1
DER
VSS
8.1
PROMOTOR
IST
EIN
STRUKURIERTES
UND
KONSERVIERTES
ELEMENT.9O
5.2
WIE
FUNKTIONIEREN
AKTIVATOREN
INNERHALB
DES
CORE-PROMOTORS?
.
92
5.3
DIE
FUNKTION
DISTALER
ENHANCER
.
93
5.4
KOMMUNIKATION
ZWISCHEN
PROMOTOREN
UND
ENHANCERN
.
94
5.5
SPEZIFISCHE
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
DEM
TCR
SS
ENHANCER
UND
DEM
VSS
8.1
PROMOTOR
.
94
5.6
SYNERGISTISCHE
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
DEM
TCR
SS
ENHANCER
UND
DEM
VSS
8.1
PROMOTOR
.
97
5.7
DAS
CORE-PROMOTOR
ELEMENT
DES
VSS
8.1
PROMOTORS
UNTERSCHEIDET
SICH
QUALITATIV
VON
DEM
INITIATOR
ELEMENT
.
98
5.8
AUSBLICK
.
99
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
100
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
103 |
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