Sphäroide aus glialen und neuronalen Modellzellen: Untersuchungen zu Differenzierung und Proliferation sowie zur Lokalisation von Wachstumsfaktoren und Wachstumsfaktor-Rezeptoren
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1
EINLEITUNG
1
1.1
NERVENWACHSTUMSFAKTOR
UND
WEITERE
SUBSTANZEN
MIT
NEUROTRCPHEN
AKTIVITAETEN
1
1.2
TRANSFORMIERENDER
WACHSTUMSFAKTOR
SS
(TGFSS)
3
1.3
BASISCHER
FIBROBLASTERRWACHSTUMSFAKTOR
(FGF-2)
UND
FGF-REZEPTOREN
4
1.4
C6-GLIOM-UNDPC12-PHAEOCHROMOCYTOMZELLEN
6
1.5
SPHAEROIDE
9
1.6
FRAGESTELLUNG
10
2
MATERIAL
UND
METHODEN
11
2.1
MATERIAL
11
2.2
ZELLKULTUR
13
2.2.1
MONOLAYER-KULTUR
13
2.2.1.1
PRIMAERZELLEN
13
2.2.1.1
ZELLINIEN
13
22.2
SPHAEROID-KULTUR
14
2.2.3
KULTUR
UNTER
SERUMFREIEN
BEDINGUNGEN
14
2.2.3.1
MONOLAYER
14
2.2.3.2
SPHAEROIDE
15
2.2.4
KULTUR
VON
CO-SPHAEROIDEN
15
2.3.
CYTO
/
HISTOLOGIE
15
2.3.1
FIXIERUNG
15
2.3.2
VORBEREITUNG
DER
MONOLAYER-ZELLEN
ZUR
MIKROSKOPISCHEN
UNTERSUCHUNG
16
2.3.3
VORBEREITUNG
DER
SPHAEROIDE
ZUR
MIKROSKOPISCHEN
UNTERSUCHUNG
16
2.3.3.1
PARAFIINSCHNITTE
16
2.3.3.2
CRYOSCHNITTE
16
2.3.3.3
"WHOLE
MOUNT"-PRAEPARATE
17
2.3.4
VITALFAERBUNG
MIT
TRYPANBLAU
17
2.3.5.
FAERBUNG
MIT
DIL
17
2.3.6
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
18
2.3.7
FAERBUNG
MIT
DAPI
19
2.3.8
AKTIN-MARKIERUNG
MIT
TRITC-PHALLOIDIN
19
2.3.9
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
AUSWEITUNG
20
2.3.10
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
20
2.3.10.1
TRANSMISSIONS-ELEKTRONENMIKROSKOPIE
20
2.3.10.2
RASTER-ELEKTRONENMIKROSKOPIE
20
2.4
DISKONTINUIERLICHE
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
UND
IMMUNBLOT
21
2.4.1
HERSTELLUNG
DER
PROTEIN-PROBEN
AUS
MONOLAYER
UND
SPHAEROIDZEILEN
21
2.4.2
DISKONTINUIERLICHE
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
22
2.4.3
COOMASSIE-FAERBUNG
22
2.4.4
POLYPEPTID-TRANSFER
AUF
IMMOBILEN
22
2.4.5
PONCEAU
S-FAERBUNG
23
2.4.6
INUNUNDETEKTION
23
3
ERGEBNISSE
24
3.1
SPHAEROIDE
AUS
C6-GLIOMZELLEN
24
3.1.1
KULTIVIERUNG
24
3.1.2
ALLGEMEINER
STRUKTURELLER
AUFBAU
26
3.1.2.1
LICHTMIKROSKOPIE
26
3.1.2.2
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
28
3.1.3
LOKALISATION
VON
KOMPONENTEN
FUNKTIONELLER
ZELLKONTAKTE,
DES
CYTOSKELETTS
UND
DER
EXTRAZELLULAEREN
MATRIX
29
3.1.3.1
COIMEXIN43
29
3.1.3.2
AKTIN
31
3.1.3.3
LAMININ
31
3.1.4
LOKALISATION
ZELLTYP-SPEZIFISCHER
MARKER-ANTIGENE
34
3.1.4.1
VIMENTIN
34
3.1.4.2
SAURES
GLIAFASERPROTEIN
(GFAP)
36
3.1.4.3
GALACTOCEREBROSID
(GALC)
36
3.1.5
PROLIFERATIONSBESTIMMUNG
DURCH
MARKIERUNG
DES
ANTIGENS
KI-67
39
3.1.6
LOKALISATION
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
41
3.1.6.1
TRANSFORMIERENDER
WACHSTUMS&KTOR
SS
(TGFSS)
41
3.1.6.2
BASISCHER
FIBROBLASTEN-WACHSTUMSFAKTOR
(FGF-2)
42
3.1.7
DETEKTION
HOCHAFFINER
FGF-REZEPTOREN
44
3.2
CO-SPHAEROIDE
AUSC6-GLICM-UNDPC12-PHAEOCHROMOCYTOMZELLEN
50
3.2.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
PC
12-ZELLEN
50
3.2.1.1
KULTIVIERUNG
50
3.2.1.2
LOKALISATION
VON
TYROSINHYDROXYLASE
52
3.2.1.3
LOKALISATION
VON
BASISCHEM
FIBROBLASTEN-WACHSTUMSFAKTOR
53
3.2.1.4
DETEKTION
HOCHAFFINER
FGF-REZEPTOREN
54
3.2.2
SELEKTIVE
FAERBUNG MIT
DIL
UND
KULTIVIERUNG
VON
CO-SPHAEROIDEN
57
4
DISKUSSION
59
4.1
SPHAEROIDE
AUS
C6-GLIOMZELLEN
59
4.1.1
KULTIVIERUNG
UND
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
59
4.1.2
ZELLTYP-SPEZIFISCHE
DIFFERENZIERUNG
UND
PROLIFERATION
66
4.1.3
DETEKTION
VON
TGFSS,
FGF-2
UND
HOCHAFFINEN
FGF-REZEPTOREN
70
4.2
CO-SPHAEROIDE
AUS
C6-GLIOM
UND
PC12-PHAEOCHROMOCYTOMZELLEN
75
4.2.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
PC
12-ZELLEN
75
4.2.1.1
KULTIVIERUNG
UND
LOKALISATION
VON
TYROSINHYDROXYLASE
75
4.2.1.2
DETEKTION
VON
FGF-2
UND
HOCHAFFINEN
FGF-REZEPTOREN
76
4.2.2
KULTIVIERUNG
VON
CO-SPHAEROIDEN
77
4.3
SCHLUSSFOLGERUNG
UND
AUSBLICK
78
5
ZUSAMMENFASSUNG
79
6
LITERATURVERZEICHNIS
81 |
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