Die Rolle des b1-Integrin bei der G-Protein vermittelten Signaltransduktion und der Regulation von Ionenkanälen:
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| Veröffentlicht: |
2003
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TABLE
OF
CONTENT
1
INTRODUCTION
.
1
1.1
CURRENT
KNOWLEDGE
.
1
1.1.1
INTEGRIN
FAMILY
.
1
1.1.2
FOCAL
ADHESION
AND
INTEGRIN
-CYTOSKELETON
STRUCTURE
.
2
1.1.3
INTEGRIN
SIGNALING
.
3
1.2
QUESTIONS
ADDRESSED
IN
THIS
SUBJECT
.
4
2
CELL
PREPARATION
AND
METHODS
.
6
2.1
ES
CELLS
PREPARATION
.
6
2.1.1
DEFROZEN
.
7
2.1.2
PROPAGATION
.
8
2.1.3
DIFFERENTIATION
.
8
2.1.4
DISSOCIATION
.
10
2.1.5
PREPARATION
FOR
EBS
.
11
2.2 PREPARATION
OF
MURINE
EMBRYO
CELLS
.
11
2.3
CYTOCHALASIN-D
TREATMENT
.
12
2.4 IMMUNOFLUORESCENCE
STAINING
.
13
2.5
IMMUNOGOLD
STAINING
.
15
2.6
DECONVOLUTION
MICROSCOPY
.
19
3
RESULTS
.
21
3.1
IDENTIFICATION
OFSSL
INTEGRIN
.
21
3.2
MUSCARINIC
DEPRESSION
OF
BASAL
ICA
WAS
ABSENT
IN
SSL
INTEGRIN
DEFICIENT
ES
CELL
DERIVED
CARDIOMYOCYTES
AND
COULD
BE
RESTORED
IN
SSL
INTEGRIN
RESCUE
CELL
LINE
.
21
3.3
EXPRESSION
AND
DISTRIBUTION
OF
MUSCARINIC
RECEPTOR
2
AND
ALPHA
TYPE
OF
CARDIAC
CURRENT
CHANNEL
.
26
3.4
EXPRESSION
AND
DISTRIBUTION
PATTEM
OF
G
PROTEINS
IN
ES
CELL-DERIVED
AND
MURINE
EMBRYO
DERIVED
CARDIOMYOCYTES
.
29
3.4.1
G
PROTEIN
PATTEM
SEEN
UNDER
IMMUNOFLUORESCENCE
MICROSCOPE
.
29
3.4.2
MORPHOLOGICAL
ANALYSIS
.
33
3.4.3
DECONVOLUTION
RESULTS
.
34
3.4.4
RELATIONSHIP
OF
GMI-3
WITH
CYTOSKELETON
ANCHORING
PROTEIN
.
37
3.4.4.1
GI
COLOCALIZED
WITH
TALIN
OR
VINCULIN
ONLY
IN
CONTROL
CELLS
BUT
NOT
IN
SSL
INTEGRIN
(-/-)
ES
CELLS
.
37
3.4.4.2
G
AL
.
3
PROTEINS
COASSOCIATE
BUT
NOT
DIRECTLY
BIND
TO
FOCAL
CONTACT
RELATED
PROTEINS
.
38
3.5
CYTOCHALASIN
D
COULD
IMITATE
THE
FUNCTIONAL
CHANGES
OF
ICA
AND
MORPHOLOGICAL
CHANGES
OF
GAI
INDUCED
BY
SSL
INTEGRIN
DEFICIENCY
.
43
3.6
FUNCTIONAL
DEFICIENT
ACTIVATION
OF
I
K
.
AOI
IN
SSL
INTEGRIN
NULL
ES
CELL
DERIVED
CARDIAC
CELLS
.
45
3.7
THE
DISTRIBUTION
PATTEM
OF
GIRKL
.
46
3.8
STRUCTURAL
INTERDEPENDENCY
OF
GIRKL
WITH
CYTOSKELETON
ANCHORING
PROTEIN
WAS
NOT
APPARENT
.
46
3.9
THERE
WERE
NO
OBVIOUS
ALTERATION
IN
EITHER
PATTEM
OF
GIRKL
OR
THE
FUNCTION
OF
I
K
.ACH
IN
WILD
TYPE
ES
CELLS
AND
MURINE
EMBRYONIC
CELLS
AFTER
CYTOCHALASIN
D
INCUBATION
.
50
4
DISCUSSION
.
52
4.1
ESTABLISHMENT
AND
RESEARCH
WORK
OF
SSL
INTEGRIN-NULL
ES
CELLS
.
54
4.2 ICA
CHANNELS
AND
THEIR
RELATIONSHIP
WITH
SSL
INTEGRIN
.
55
4.3
ASSOCIATION
OF
SS
1
INTEGRIN-CYTOSKELETON
STRUCTURE
WITH
GPROTEINS
.
56
4.4
EVIDENCE
FOR
GI
DYSFIINCTION
IN
SSL
INTEGRIN
DEFICIENT
CARDIOMYOCYTES
.
59
4.5
INWARD
RECTIFIER
K
+
CHANNEL
AND
ITS
ASSOCIATION
WITH
INTEGRINS
.
63
4.6
I
K
.
ACH
DYSFIINCTION
EVOKED
BY
DISTURBANCE
OF
GI
SIGNAL
IN
SSL
INTEGRIN
DEFICIENT
CELLS
.
66
4.7 THE
RELATIONSHIP
BETWEEN
GIRK
CHANNEL
AND
CYTOSKELETON
CANNOT
BE
CONFLRMED
YET
.
65
4.8 DEFECTIVE
INTEGRIN
OR
ITS
BINDING
CYTOSKELETAL
PROTEINS
MIGHT
RESULT
IN
CARDIAC
DISEASE
.
66
5
SUMMARY
.
69
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
70
6
REFERENCES
.
72
7
LEBENSLAUF.
.
91 |
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